新型冠状病毒RBD区重组流感病毒的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的利用流感反向遗传技术,以B型流感病毒B/Yamagata/16/88株作为骨架,表达新型冠状病毒(SARSCoV-2)S蛋白的受体结合域(RBD),构建以B型流感病毒为载体的新型冠状病毒疫苗候选株。方法基因合成新冠病毒参考株S蛋白上的RBD基因片段(318-541aa),对B型流感病毒B/Yamagata/16/88/的NS1片段进行设计改造并插入RBD序列,构建重组质粒NS110-RBD。将NS110-RBD与其余7个骨架株重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞,拯救表达新型冠状病毒RBD区重组流感病毒,对拯救出的毒株进行形态学、分子生物学鉴定及病毒滴度和Western blot检测。结果成功拯救出重组流感病毒株并命名为rIBV-NS110-RBD。PCR鉴定RBD目的基因大小正确,测序表明拯救病毒株的序列正确,在透射电镜下观察到拯救病毒株的病毒粒子具有流感病毒粒子的典型特征。经测定,拯救株rIBV-NS110-RBD在MDCK细胞上的病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/ml,在鸡胚上的病毒滴度为10^(6.5) EID_(50)/ml,血凝效价最高达2_(5);Western Blot检测到RBD的表达,其分子质量为35ku。结论成功拯救出高表达新型冠状病毒RBD蛋白的高血凝效价的重组流感病毒株,该病毒具有流感病毒粒子的典型特征,为以B型流感病毒为载体作为新型冠状病毒疫苗的研发提供了新思路。     

被犬猫等动物咬伤者流行病学调查分析

目的　 探讨我县被犬、猫等动物咬伤的规律、发率情况及流行病学调查分析。 方法　 利用各乡防保站及我站门诊登记的病例名单逐个进行登门或电话采防。 结果　978例被犬、猫等动物咬伤患者中 ,男 62 1例 ,女 3 5 7例 ,5～ 10岁后最多 3 81例 ,占 3 8 96%。职业以中小学生为主 5 81例 ,占 5 9 41%。咬伤部位以下肢为主 65 4例 ,占 66 87%。伤情以轻微伤和抓伤为主 899例 ,占 91 92 %。伤人动物以犬为主 869例 ,占 92 94%。咬伤后 2 4h内接种狂犬者 910例 ,占 93 0 5 %。 结论　 应重点控制宠物传染源     

犬细小病毒VP2蛋白在家蚕/昆虫细胞中表达

目的犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)能够引起犬急性出血性肠炎,在幼犬中的死亡率很高,为我国养犬业和经济动物养殖业带来巨大的经济损失。因而,寻找一种新型、安全、高效的疫苗为细小病毒性肠炎的防控具有重要意义。方法本研究利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达CPV VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-D-VP2。该重组病毒感染昆虫细胞和家蚕后,表达CPV VP2蛋白。体外表达的VP2蛋白自动装配成病毒样粒子。随后用蚕蛹中大量组装成的病毒样粒子分别通过口服和肌注两种途径免疫豚鼠。结果经电镜检测,观察到直径为25nm大小的球形病毒样粒子,表明重组杆状病毒表达的VP2能形成病毒样粒子,且在大小、形态上与天然病毒相似。间接免疫荧光检测表明成功构建了表达VP2的病毒样粒子。口服和肌注两种途径免疫豚鼠,均产生了血凝抑制效价。结论本研究为CPV新型亚单位疫苗的研究提供了依据。     

弓形虫病诊断方法研究进展

弓形虫病是由弓形虫感染引起的一种严重的人兽共患寄生虫病,对人类健康造成极大威胁。本文对弓形虫病诊断技术,包括不依赖DNA检测诊断方法、血清学检测以及基于寄生虫核酸的分子生物学方法进行综述,为弓形虫病诊断技术和方法的发展提供新的思路。     

狂犬病病毒HEP-Flury-mEG株的拯救与鉴定

目的拯救狂犬病毒HEP-Flury-mEG株,为疫苗制备奠定基础。方法将ERA株G蛋白333位毒力位点修饰为谷氨酸后替换至HEP-Flury株基因组。重组感染性克隆质粒和4个辅助质粒,共转染BHK-21细胞,拯救重组病毒。结果 IFA鉴定成功拯救出了HEP-Flury-mEG株狂犬病病毒。重组病毒G基因经XholⅠ酶切,片段大小为1 071bp和520bp,与预期结果相符。重组病毒在BHK-21细胞中传代4次,滴度维持在1×107.5 FFU/ml。重组病毒经常规负染后在电镜下为弹状粒子,长度和直径与亲本株一致。结论获得了重组狂犬病毒HEP-Flury-mEG株。该病毒滴度高,形态完整,传代稳定,为进一步研究狂犬病毒病毒的生物学特性和新型基因工程疫苗奠定了基础。     

狂犬病病毒弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立

目的构建狂犬病病毒弱毒疫苗株SRV9全长cDNA感染性克隆,并建立其反向遗传操作系统。方法通过DNAStar对狂犬病病毒SRV9株全长基因组序列进行分析,利用单一的酶切位点,将SRV9全长cDNA分为4段,根据每段重叠区域的酶切位点拼接全长,分别连入pCI和pCDNA3.1(+)载体,并通过PCR方法分别在全长序列的3′端和5′端引入核酶HamRZ和HdvRZ序列,构建全长真核表达质粒pCI-SRV9和pD-SRV9。同时构建能表达狂犬病病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、糖蛋白(G)和聚合酶蛋白(L)的4个辅助质粒。分别将pCI-SRV9或pD-SRV9与辅助质粒通过脂质体共转染BSR细胞,拯救重组病毒。结果两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,但pD-SRV9表达质粒的拯救效率(8/8)较pCI-SRV9表达质粒拯救效率3/30高;重组病毒与母本野生病毒的体外生长动力学曲线相一致,相同培养时间的病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了狂犬病病毒弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,为进一步研究狂犬病病毒致病机理、筛选新型狂犬病疫苗或开发基于狂犬病病毒载体的其他疾病疫苗奠定了基础。     

农村地区儿童家长计划免疫知识现状调查及影响因素分析

目的 了解正阳县农村地区儿童家长计划免疫知识现状及其影响因素,为进一步做好计划免疫工作提供依据.方法 采用分层多阶段随机抽样方法,对22个乡镇60个村760名2003年12月1日至2004年12月1日出生的儿童及监护人进行了调查.结果 儿童家长普遍缺乏计划免疫知识,"四苗"全程合格接种及好区的儿童家长对计划免疫知识的掌握情况,好于"四苗"未全程合格接种及差区的儿童家长,儿童母亲的计划免疫知识水平影响儿童的合格接种率.结论 是否参加计划免疫保偿、母亲的文化程度是影响儿童母亲计划免疫知识水平的主要因素.     

集中推荐筛查法提高肺结核发现率效果分析

目的分析总结集中推荐肺结核病例发现方法。方法培训乡村医生,普及结核病防治知识,由乡村医生上门调查,推荐有肺结核可疑症状者到乡卫生院免费检查。结果共培训乡村医务人员546人。推荐可疑者胸透并作PPD试验者2105人,发现肺结核病人53例,其中22例为涂阳患者,发现病例数占全县新登记病人数的15.68%(53/338),该研究覆盖全县人口的82.7%。结论该措施能提高农村地区的肺结核病人的发现率,可以作为因症求诊发现方式的补充。     

正阳县2001—2006年涂阳肺结核病人发现与治疗转归分析

目的分析正阳县6年来肺结核病例登记及治疗情况，为实施《结核病防治规划（2001—2010年）》可持续发展提供技术依据。方法依据正阳县2001—2006年结核病登记表进行病例登记和治疗转归队列分析。结果正阳县6年来共新登记肺结核病人3272例，其中涂阳肺结核病人所占比例从2001年的33．73％提高到2006年的48．84％，涂阳新登记率从2001年11．48／10万提高到2006年的44．25／10万，涂阳病人平均治愈率从2001年的78．57％提高到2006年的89．02％，其中初治涂阳平均治愈率91．26％，复治涂阳平均治愈率79，90％。结论正阳县实施现代结核病控制策略（DOTS策略）取得了预期的成效，实现了《规划》的中期目标和结核病控制阶段性目标。     

黄芪注射液治疗冠心病心绞痛的疗效观察

用黄芪注射液对46例冠心病心绞痛患者采用治疗前后自身对照法观察疗效,结果对心绞痛的有效率达95％,能显著改善心肌缺血对缺血性心电图的改善率为85％。 我科自1998年10月至1999年10月用成都地奥制药公司生产的黄芪注射液对46例冠心病心绞痛患者进行治疗观察,取得较好疗效,现将结果报道如下。 1 资料与方法 选择46例冠心病心绞痛患者,诊断符合1980年全国内科学术会议“冠心病诊断标准”及同时有典型心电图改变。46例中,男性28例,女性18例,年龄最大78岁,最小46岁,