降解萘的假单胞菌ND24菌株的分离和萘污染土壤的生物修复

用富集培养法从石油工业废水中分离到高效降解萘的ND24菌株．该菌株能以萘为惟一碳源生长，在48h内将无机盐培养基中2g／L的萘降解98．4％．该菌株还能降解水杨酸、对羟基苯甲酸、邻苯二甲酸和苯乙酸．16SrRNA基因测序和同源序列比对表明，ND24菌株属于假单胞茵（Pseudomonas sp．）．将ND24菌株接种到含有0．2g／dL萘的灭菌土壤中，经过14d室温培养以后，萘的去除率为98．2％．     

实时荧光定量PCR检测应力性骨折新兵外周血TNFRSF10C mRNA表达

目的:检测TNFRSF10C基因在应力性骨折(SF)患者与正常人之间的表达差异。方法:采用1:1配比的病例对照研究,选取入伍新兵SF病例及正常对照各10例,取受试者空腹肘静脉血,采用实时荧光定量PCR检测TNFRSF10C基因表达,结合管家基因GAPDH进行相对定量分析。结果:设计并合成了一组只特异性结合人TNFRSF10C基因的实时荧光定量PCR引物,结果未发现非特异性扩增。10例SF样本中有7例TNFRSF10C基因表达上调,上调1.4倍至6.7倍,另3例SF样本TNFRSF10C基因表达下调,分别为50%、90%和90%。结论:本研究建立的TNFRSF10C基因实时荧光定量PCR检测体系特异性好、可靠。TNFRSF10C基因表达结果为分析SF发病的分子机制及SF早期诊断提供了重要线索。     

大负荷运动对雌性大鼠雌激素及抗苗勒管激素的影响

目的探讨大负荷运动对卵巢功能的影响,为防治运动性月经失调,提高训练成绩提供依据。方法选择20只动情周期稳定的健康雌性SD大鼠,随机分为两组,实验组和对照组各10只,按预设方案进行跑台训练;动态观察阴道脱落细胞;监测大鼠的体重及血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)水平。结果随着运动负荷增加,实验组大鼠于第4周起开始出现动情周期紊乱现象;第5、6周实验组大鼠的平均体重[分别为(288.80±8.51)g、(286.70±12.95)g]显著低于对照组[分别为(305.76±7.57)g、(314.67±11.08)g](P均0.01);第5、6周实验组大鼠的血清E2水平[分别为(349.86±25.84)pmol/L、(332.14±27.82)pmol/L]显著低于对照组[分别为(412.80±36.81)pmol/L、(417.79±22.24)pmol/L](P均0.01),AMH水平[分别为(2.06±0.42)ng/ml、(1.81±0.48)ng/ml]亦显著低于对照组[分别为(2.55±0.50)ng/ml、(2.46±0.55)ng/ml](P均0.05)。结论持续的大负荷运动会造成大鼠动情周期紊乱,血清E2和AMH水平下降,提示大负荷运动应激导致月经失调的发生机制可能与卵巢功能下降有关。     

Pseudomonas putida ND6中萘降解调控基因nahR突变株的构建及萘降解调控机制初探

【目的】构建Pseudomonas putida ND6中双拷贝萘降解调控基因nahR突变株,初步探讨ND6菌株的萘降解调控模式。【方法】扩增nahR基因的上下游同源片段及卡那霉素抗性基因Km;利用重叠延伸PCR技术将这三个片段连接起来,然后将其克隆到自杀性载体pEX18Tc,得到同源重组载体pEX18Tc-RKm;采用热激法将同源重组载体pEX18Tc-RKm转化到供体菌Escherichia coli S17-1,再利用接合转移的方法将供体菌中的载体转到受体细菌ND6菌株,通过同源重组敲除nahR基因,对突变菌株进行nahR基因调控分析。【结果】成功获得了nahR基因突变株。以萘为唯一碳源的无机盐培养基中,突变株生长明显比野生型延迟;以水杨酸钠为唯一碳源的无机盐培养基中,突变株与野生株生长曲线并无明显差异。以葡萄糖为唯一碳源培养时,野生型ND6中的nahR基因有一定量的本底表达量,加入诱导物水杨酸钠后,其表达水平没有明显的变化。【结论】本研究为深入研究ND6菌株萘降解操纵子调控机制奠定了基础。通过对突变株和野生型的比较研究,我们发现ND6菌株中的萘降解上游操纵子受到NahR蛋白的调控,而下游操纵子不受NahR蛋白的调控,且nahR基因为组成型表达。     

白藜芦醇对UVB损伤HaCaT细胞保护作用的双向电泳图谱差异分析

目的利用双向电泳技术(2-DE)从蛋白质组学角度分析白藜芦醇对中波紫外线(UVB)照射的人角质形成细胞(HaCaT细胞)的保护作用,以探讨白藜芦醇防御UVB损伤的作用靶点及有关机制。方法 MTT法检测不同浓度的白藜芦醇对经或不经UVB照射的HaCaT细胞增殖的影响。2-DE实验分对照组、UVB组、白藜芦醇组、UVB+白藜芦醇干预组(共同干预组),提取各组蛋白进行2-DE实验,结合质谱(MALDI-TOF-MS)分析与数据库检索对差异蛋白质点进行鉴定。结果筛选10个存在明显差异的蛋白点,质谱鉴定出8种蛋白质,除4种功能未知蛋白外,其余4种蛋白分别为转录起始因子IIE-β(TFIIE-β)、组蛋白H1.2、锌指蛋白、MAGOH蛋白。UVB组细胞内组蛋白H1.2水平较其它各组明显增高(P<0.05);UVB组、UVB+白藜芦醇干预组的TFIIE-β及锌指蛋白表达水平均降低,UVB组下降最为明显(P<0.05);UVB组的MAGOH蛋白较各组明显减少(P<0.05)。结论应用2-DE联合质谱技术发现了白藜芦醇对UVB诱导的HaCaT细胞损伤防护作用相关的差异蛋白点。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

目的建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性。方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化。结果两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数（678&#177;32）个,非还原烷基化蛋白质斑点数（358&#177;26）个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰。结论还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用。     

新兵集训期间消化系统疾病筛查及其患病特点分析

[目的]分析新兵集训期间消化系统疾病的发病特点。[方法]对驻津某部2007年入伍新兵,采用分层随机整群的抽样方法获得样本。按照国际ICD-10标准进行疾病分类。采用Epiinfo6.0录入数据。用SPSS11.0进行数据分析。[结果]消化系统疾病患病率为8.94%,居所有系统疾病患病第3位,占所有系统疾病的11.97%。胃肠炎、牙周炎、胃肠功能紊乱累计超过70%。消化系统疾病在整个集训期间发病围绕1%上下波动,第2、4、8周患病最高。华北、华中、华东和东北地区来源新兵消化系统疾病的患病率无统计学差异(χ2=0.626,P=0.890)。农村和城市新兵消化系统疾病患病率差异无统计学意义(χ2=0.610,P=0.435)。[结论]建议重视新兵的心理、思想工作和健康教育宣传,并注意循序渐进的安排训练科目,以更加有效的控制消化系统疾病的发生。     

基因芯片筛选应力性骨折差异表达基因

目的 了解应力性骨折(SF)患者与正常人群相比较的外周血差异表达基因.方法 选取入伍新兵(均为男性),采用1:1配比的病例对照研究,正常对照组与SF组各3例.收集被测试者空腹肘静脉血提取RNA,纯化后进行人表达谱芯片试验.SAM软件分析芯片结果.选取表达差异最显著并有提示意义的差异基因,应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术进行验证.结果 SF组上调基因21条,下调基因1条.表达差异最显著的基因为TNFRSF10C,其验证结果显示,SF组TNFRSF10C的相对表达量与正常对照组相比较,3组上调,1组下调.结论 SF患者与正常人群外周血之间存在基因表达差异,SF的发生发展是一个涉及多种功能基因表达的复杂的生物学过程,为SF的生物力学研究提供了背景资料,并未其早期诊断和筛查提供了重要线索.     

2010年天津市流行的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VPl区域序列分析

【目的】研究2010年天津市手足口病患者中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的VPl基因特征。【方法】采集60例天津地区2010年手足口病流行期间患儿的粪便标本,分别用EV71和CoxAl6的VPl区域引物对粪样中病毒RNA进行PCR检测。同时选取11株EV71扩增阳性和4株CoxAl6扩增阳性的样本,对其扩增产物的VPl区进行核苷酸序列测定,比照EV71和CoxAl6各基因型进行同源性分析,并构建系统发生树。【结果】从60例手足口病患儿粪便标本共检测出27例EV71阳性和4例CoxAl6阳性。经VPl区测序,11例EV71阳性与EV71C4基因型同源性94．4％～94．8％;4例CoxAl6阳性与CoxAl6C基因型同源性93．4％-94．7％。在系统发生树上,这11株EV71均属于EV71C基因型,与c4亚型属于同一分支;4株CoxAl6均属于CoxAl6的C基因型。【结论】2010年天津市手足口病患者粪便样本中检测出的EV71毒株属于EV71C4亚型,CoxAl6毒株属于CoxAl6C基因型。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

目的 建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性.方法 采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦(IEF)为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化.结果 两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数(678±32)个,非还原烷基化蛋白质斑点数(358±26)个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰.结论 还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用.