醋酸锌对谷氨酸诱导的小鼠脑片即早基因过度表达的抑制作用

目的：探讨谷氨酸对脑组织即早基因表达的影响以及醋酸锌对谷氨酸诱导c-fos和c-jun过度表达的拮抗作用。方法：体外小鼠海马脑片培养；在培养基中加入200μmol/L的谷氨酸（或同时加入谷氨酸和醋酸锌），作用0.5,1,2,3h，然后进行RT-PCR实验，检测c-fos和c-jun的表达变化。结果：200μmol/L谷氨酸处理的脑片中，1-2h期间c-fos的表达升高，当谷氨酸与100μmol/L醋酸锌共同处理脑片时，1-3h期间c-fos表达基本恢复正常；200μmol/L谷氨酸作用下，脑片c-jun表达水平从0.5h起即明显升高，谷氨酸与醋酸锌共同作用时，可见c-jun基因在各检测时段表达基本接近正常。结论：谷氨酸可引起c-fos及c-jun的过度表达，锌离子可拮抗谷氨酸诱导的c-fos和c-jun过度表达作用，使二基因表达恢复正常。     

早期诊断肾综合征出血热自身红细胞凝集试验

肾综合征出血热(HFRS)是一种烈性病毒性传染病，早期诊断、早期治疗对于HFRS病人的预后尤为重要。目前常用的HFRS诊断方法如ELISA，间接荧光抗体试验(IFAT)等，尽管特异性和敏感性较好，但技术要求和设备要求较高，很难普及到基层医疗单位。本研究创造性地将肾综合征出血热病毒(HFRSV)G1G2结构蛋白与抗人红细胞单克隆抗体的2C8的Fab片段偶联，制备出既能与抗HFRSV抗体结合．又能与人红细胞结合。同时出现红细胞凝集的双功能抗原抗体结合物，     

Apoptin基因/壳聚糖缓释微球的制备及其对A375细胞的凋亡诱导作用

目的:以羧甲基壳聚糖为基质材料,制备apoptin基因缓释微球.方法:采用复凝聚法制备apoptin/壳聚糖微球,分别用光镜观察微球形态、内切酶研究其稳定性、DNA电泳阻滞分析apoptin/壳聚糖最佳比例、PCR测定apoptin基因作为复制摸板能力、用MTT法检测其抗肿瘤活性.结果:壳聚糖与apoptin基因可形成稳定的微球,其直径在200～300 nm之间,成球性较好、apoptin/壳聚糖微球P/N最佳质量比为5.5:1、微球能够有效防止DNA酶的降解作用、apoptin/微球载体中的基因仍具有DNA复制模板功能,并能有效地转染A375细胞,诱导A375细胞发生凋亡,从而抑制瘤细胞生长.结论:apoptin基因与羧甲基壳聚糖可形成稳定的缓释微球,并能有效地转染肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞发生凋亡.     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备

目的:克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体。方法:利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达;以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果:扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性。结论:已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人宫颈癌细胞凋亡作用

目的 研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中信号转导机制.方法 用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人宫颈癌细胞(hela);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测hela细胞的凋亡;以比色法检测胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)的相对活性.结果 Apoptin基因瞬间转染的hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率[(40.45±0.76)%]明显高于正常对照组[(3.25±0.16)%]和载体对照组[(3.55±0.12)%](P＜0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性无明显变化.结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导hela细胞凋亡.     

重组人IL-18对辐射损伤后小鼠免疫功能的调节作用

目的:探讨重组人IL-18(IL-18)对辐射损伤后小鼠免疫功能的影响.方法:对32只小鼠分4组进行辐射损伤,然后分别用淋巴细胞转化实验、NK细胞细胞毒实验、T淋巴细胞亚群测定和血清中IgG测定方法观察IL-18对其免疫功能的调节作用.结果:重组人IL-18能够提高辐射损伤后小鼠的T、B淋巴细胞转化能力,增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,上调CD4 T细胞的数量,但对IgG产生能力没有调节作用.结论:重组人IL-18对辐射后小鼠免疫功能损伤有促进恢复的作用.     

穹隆海马伞切断大鼠海马PKC和ERK活性的变化

目的 探讨信号转导机制在阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD)发病过程中的作用。方法 应用脑立体定位仪制备穹隆海马伞切断AD大鼠模型，采用放射性同位素方法检测大鼠海马蛋白激酶C（protein ki-naseC,PKC)和细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK)的活性。结果 手术组手术侧海马PKC较正常对照组降低，手术组手术侧海马EPK较正常对照组升高，结论 在AD大鼠海马PKC和ERK的变化证实了信号转导机制在AD的形成中起到了一定的作用。