英夫利西单抗对类风湿关节炎患者外周血单核细胞CD147表达的影响

目的 探讨抗肿瘤坏死因子-α人鼠嵌合单克隆抗体英夫利西单抗(infliximab)治疗前后类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞CD147表达的变化.方法 30例经甲氨蝶呤(MTX)治疗至少3个月病情仍处于活动期的RA患者按3:1:1比例由计算机程序产生随机分配方案分为A、B、C 3组,A组接受为期14周的英夫利西单抗(3 mg/kg)治疗;B组接受为期6周的英夫利两单抗(3 mg/kg)治疗;C组接受为期14周的安慰剂治疗.治疗期间继续口服原剂量的MTX.流式细胞术检测RA患者外周血CD14+单核细胞CD147平均荧光强度水平(MFI)变化,并观察其与临床相关指标的关系.数据采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析、Spearman相关分析和Kruskal-Wallis秩和检验.结果 ①治疗前RA患者外周血CD14+单核细胞CD147 MFI为(101±25),健康志愿者为(78±18),差异有统计学意义(P=0.019).RA患者外周血CD147 MFI与病情活动指标DAS28(r=0.471,P=0.000)、红细胞沉降率(ESR)(r=0.371,P=0.000)、C反应蛋IQ(CRP)(r=0.249.P=0.010)、晨僵持续时间(r=279,P=0.010)呈正相关.②3组患者治疗后外周血CD14+单核细胞CD147 MFI均有下降,第18周与基线相比,A组平均改变差值(-26.9±21.7)、B组平均改变差值(-35.4±15.5)与C组平均改变差值(-10.0±6.0)相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 活动期RA患者外周血CD14+单核细胞CD147表达增高;与单用MTX相比,英夫利西单抗联合MTX治疗CD147 MFI表达下降更明显.     

A771726对经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

目的 观察来氟米特活性代谢产物A771726对经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9表达的影响。方法 THP-1细胞悬浮生长于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中。细胞密度达5×105·ml-1时用于实验。THP-1细胞经PMA刺激24h（诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞）后,细胞进行无血清化处理12h,继而加入不同剂量的A771726（5ug/mL、15 ug/mL 、45ug/mL）,干预24h。实时荧光定量PCR检测细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的活性。结果 细胞经不同浓度的A771726（5ug/mL、15 ug/mL 、45ug/mL）处理后,MMP-2、MMP-9 mRNA表达量均有下降(P＜0.01) 。中、高剂量的A771726（15 ug/mL 、45ug/mL）可降低PMA活化的THP-1细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性(P＜0.01)。结论 来氟米特活性代谢产物A771726可以降低经PMA活化的THP-1细胞MMP-2及MMP-9的表达。     

来氟米特活性代谢产物抑制人单核细胞系细胞CD147基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9表达的研究

目的 观察来氟米特活性代谢产物(A771726)对豆蔻佛波醇乙酯(PMA)诱导的人单核细胞系(THP-1)细胞CD147、基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9表达的影响.方法 THP-1细胞悬浮生长于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,细胞密度达5×105/ml时用于实验.细胞无血清化处理12 h后,加入PMA和(或)不同剂量的A771726(5、15、45μg/ml),培养24 b,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA的表达,流式细胞术检测细胞表而CD147的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的活性.多个样本均数比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验.结果 细胞经PMA刺激后CD147、MMP-2及MMP-9三者表达量均较与空白组有增高(P＜0.01).A771726干预后,细胞表面CD147平均荧光强度(MFI)有不同程度的下降,对照组MFI为109.5±3.8,A771726干预组(5、15、45μg/ml)MFI分别为73.3±2.5、64.5±2.3、40.9±2.7(P＜0.01);不同浓度A771726干预后MMP-2、MMP-9 mRNA表达量及细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性与对照组比较均有不同程度的下降(P＜0.01).各干预组CD147 mRNA表达量与对照组比较,未见下降(P＞0.05).结论 来氟米特活性代谢产物A771726可以抑制PMA诱导的THP-1细胞CD147、MMP-2及MMP-9的表达.

Abstract：

Objective To investigate the effects of the leflunomide active metabolite (A771726) on the expression of phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) -induced CD147, matrix metallo-proteinase (MMP)-2 and MMP-9 on THP-1 cells. Methods THP-1 cells were cultured in RPMI-1640 medium supplemented with 10％ fetal bovine serum. For all experiments, THP-1 cells were cultured at an initial density of 5×105/ml. Before A771726 treatment, cells were cultured with serum-free RPMI-1640 medium for 12 h, THP-1cells were co-cultured with PMA at three different concentrations of A771726 (5, 15 , 45 μg/ml) for 24 h.The mRNA expression of CD147, MMP-2 and MMP-9 was measured by real-time PCR. CD147 expression on the cells were evaluated by flow cytometric analysis. The activity of MMP-2 and MMP-9 were evaluated by gelatin zymography. Statistical differences among the groups were tested by one-way ANOVA or KruskalWallis test. Results The expression of CD147, MMP-2 and MMP-9 were upgraded by the PMA. The expression of CD147 on THP-1 cells was inhibited significantly by A771726 in a dose-dependent pattern (P＜0.01). The mean fluorescence intensity (MFI) of CD147 in positive control group was 109.5±3.8, the MFI in A771726 (5, 15, 45 μg/ml) group were 73.3±2.5, 64.5±2.3, 40.9±2.7, respectively. The expression of MMP-2, MMP-9 mRNA and the activity of MMP-2, MMP-9 in the supernatant was inhibited significantly by A771726 (P＜0.01). The expression of CD147 mRNA was not inhibited significantly by A771726 (P＞0.05).Conclusion Leflunomide active metabolite (A771726) can inhibit the expression of PMA-induced CD147,MMP-2 and MMP-9 on THP-1 Cells.     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Sonic Hedgehog信号通路表达的初步研究

目的: 初步探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)和滑膜组织中Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关因子表达及意义。方法: 收集符合1987年美国风湿病学会(ACR)RA分类标准、28个关节疾病活动度评分(DAS28)≥3.2,病情活动RA患者(35例)及年龄、性别相匹配的健康志愿者(35例)外周血2 mL,分离PBMCs,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测Shh信号通路中信号肽Shh、膜受体Ptch1和核转录因子Gli1 mRNA的表达。收集10例病情中度活动(DAS28≥3.2)RA患者的滑膜组织,同时收集5例外伤或半月板损伤(无关节炎)者滑膜组织作为对照组,免疫组化检测Shh、Ptch1和Gli1的蛋白表达情况。结果: RA患者PBMCs中Shh和Gli1 mRNA的相对表达量分别为1.36±1.48和1.15±0.68,对照组上述信号分子的mRNA表达量分别为0.47±0.25和0.49±0.05,2组差异有统计学意义(P<0.05),Ptch1 mRNA表达在2组间的差异无统计学意义(P>0.05);免疫组化示Shh和Gli1蛋白表达的阳性细胞百分率均高于对照组(P<0.05),Ptch1蛋白表达阳性细胞百分率2组无显著差异(P>0.05)。结论: RA患者PBMCs与滑膜组织中检测到Shh通路相关信号分子Shh和Gli1的表达上调,提示RA患者中可能存在Shh信号通路的激活,其在RA发病机制中的作用值得进一步研究。     

系统性红斑狼疮合并妊娠继发重度血小板减少的危险因素分析

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)合并妊娠继发重度血小板减少(sever thrombocytopenia,STP)的危险因素.方法 回顾性分析广西医科大学第七附属医院(梧州市工人医院)2014年1月至2019年12月收治的47例SLE合并妊娠患者的临床资料,应...