SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

人和猪脱细胞真皮体外构建活性真皮替代物的对比研究

目的 观察异体和异种脱细胞真皮支架(ADM)对体外构建的活性人工真皮生物学活性的影响.方法 体外培养、扩增人皮肤成纤维细胞后,按2.5×105个/cm2密度分别接种于异体(人)脱细胞真皮(hADM)、异种(猪)脱细胞真皮(pADM)支架表面进行复合培养.动态观测细胞生长情况及活性真皮替代物的组织结构,并观测复合培养3、6、10 d培养上清中IL-6、透明质酸(HA)的变化.结果 人皮肤成纤维细胞在人和猪的脱细胞真皮支架上粘附、生长良好,均可形成细胞膜片并向支架内生长.在接种人皮肤成纤维细胞后,hADM组和pADM组培养上清液中均可检测出逐渐增高的IL-6和HA.复合培养第6、10天,hADM组和pADM组均显著高于单层成纤维细胞培养组(P＜0.05),但两组间并无统计学差异.结论 人皮肤成纤维细胞接种于hADM和pADM进行体外复合培养后均可构建具有生物学活性的人工真皮,就成纤维细胞的生物学活性而言.二者之间并无差别.     

病案教学法在医学微生物学教学中的研究应用

目的:以PBL教学法为基础,探索一种适合基础课教学的病案教学法。方法:对比两种教学法在《医学微生物学》教学中的教学效果,并从主客观两方面进行评价。结果:病案教学法的教学效果在主客观两方面的评价中均优于传统教学法。结论:病案教学法在基础课教学中是一种能培养提高学生各种能力和综合素质的较好的教学模式。     

SHIV-KB9感染中国恒河猴的实验研究

目的研究SHIV-KB9感染中国恒河猴的可能性,确定其有效病毒浓度,明确实验猴感染SHIV-KB9后的病毒复制和免疫反应情况,建立SHIV/SAIDS模型,并确定、完善SHIV/SAIDS模型评价指标。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查。选出6只无SIV、STLV、SRV/D和B病毒感染的恒河猴,分别用10倍系列稀释的病毒液静脉感染实验猴,使用流式细胞术、血常规检测、病毒分离、DNA-PCR和RT-PCR等方法确定实验猴是否被感染,以及感染后恒河猴体内病毒复制和免疫细胞损伤情况,持续测定3个月。结果实验猴的血浆病毒载量、病毒分离结果、CD4+/CD8+比值和CD4+细胞数等证实,4.8×106copies/mL以上浓度的SHIV-KB9病毒液能成功感染中国恒河猴。结论SHIV-KB9成功感染中国恒河猴为进一步建立SHIV/SAIDS模型奠定了良好的实验基础,为使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。     

11078 Ionsys获得美国FDA的批准

美国FDA已经批准Alza公司的芬太尼经皮离子电渗入系统Ionsys（Ⅰ），用于短期治疗成人手术后急性疼痛。 这个认证标志着美国（Ⅰ）较长的认证过程的结束。此申请最初是在2003年9月份提出来的，可是FDA可批准文件一直推迟到第二年的7月份才下发。（Ⅰ）在1月份通过欧盟集中程序获得欧盟广泛批准。     

ELISPOT方法检测SIVmac239感染猴特异性细胞免疫水平

目的为了完善现有的SIV／恒河猴模型，掌握恒河猴被SIV感染后体内细胞免疫应答状态，为评价HIV疫苗提供方法和数据上的参考，我们测定了SIV感染猴体内病毒特异性的细胞免疫水平。方法实验前选出4只无SIV、sTLV、SRV／D和B病毒感染的恒河猴，用SIVmac239病毒液静脉感染实验猴，使用RT-PCR、流氏细胞术和ELISPOT等方法，监测SIVmac239病毒在恒河猴体内复制情况、感染猴的外周免疫损伤情况和细胞免疫情况，持续测定一年。结果实验结果显示IFN-γ ELISPOT方法能有效的评估实验猴的细胞免疫情况，IFN—YELISPOT结果和CD4＋T细胞数无相关性，与血浆病毒载量稍有相关。结论本实验明确了SIVmac239感染中国恒河猴体内CTL的基本趋势和范围，了解了外周血病毒载量、外周免疫损伤与细胞免疫状况之间的联系，完善了SIV／SAIDS模型评价指标，为使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了基础条件。     

口服精氨酸对烫伤大鼠肠缺血--再灌注损害的保护作用

目的：探讨口服精氨酸对烫伤大鼠肠缺血－再灌注损害的保护作用。方法：66只SD大鼠随机分为正常对照组（N组，6只），灌喂精氨酸组（A组，30只）和普通喂养组（E组，30只），A、E组复制30％体表总面积（TBSA）Ⅲ度烫伤模型。分别观察伤后6、12、24、48、72h肠组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化钠（NO）含量的变化以及肠外组织器官的细菌移位率。结果：与N组比较，A、E组烫伤后肠组织SOD活力明显下降（P＜0．05）、MDA含量显著上升（P＜0．05），但A组的这种变化低于E组，尤其是在伤后12、24h（P＜0．05），A组伤后24h内肠组织NO含量明显高于E组（P＜0．01）。伤后24、48hA组细菌移位率明显低于E组（P＜0．05）。结论：口服精氨酸可以减轻伤后肠缺血－再灌注所引起的肠黏膜屏障损害，其机制可能与口服精氨酸导致肠黏膜局部NO含量增加有关。     

慢性前葡萄膜炎致眼球破裂

患者　男　 3 8岁　汽车驾驶员　双眼红、痛、视物模糊两个月 ,在门诊按双眼虹膜睫状体炎给予相应治疗 ,病情反复不愈。 2 0 0 0年 8月 16日以双眼前葡萄膜炎、表层巩膜炎入院。既往健康 ,全身检查无异常 ,否认风湿、结核、梅毒、糖尿病等病史。右眼裸眼视力 1 2 ,左眼裸眼视力 2 0 ,双眼结膜混合充血 ,右眼颞侧、左眼鼻侧结膜隆起呈暗红色 ,结膜充血水肿 ,压痛 (+ ) ,尘状色素ＫＰ ( ) ,Ｔｙｎｄａｌｌ ( ) ,虹膜纹理不清 ,瞳孔药物散大 7ｍｍ、圆、无粘连 ,晶状体、玻璃体及视网膜无异常。眼内压 :右眼 14 7ｍｍＨｇ ,左眼13 2ｍｍＨｇ…     

胰岛素样生长因子1水平变化与阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征患者认知功能的相关性

目的:观察阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者认知功能及血清胰岛素样生长因子1水平的变化,并分析其相关性。方法:试验于2005-11/2006-04在中南大学湘雅二医院老年病科睡眠实验室完成。80例受试者进行多导睡眠监测,应用包含11个亚组的简易智能状态量表评价认知功能,同时检测血清胰岛素样生长因子1水平。采用SPSS13.0统计软件,对以上各指标间的相关性进行线性相关、Spearman秩相关及多元逐步回归分析。结果:①分组:80例受试者根据呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻度组14例(5≤AHI<15),中度组12例(15≤AHI<30),重度组44例(AHI≥30),对照组10例(AHI<5)。②组间比较:OSAHS患者慢波睡眠时间、快动眼睡眠时间、最低血氧饱和度和血清胰岛素样生长因子1水平均低于对照组(P<0.05)。③认知功能损害:OSAHS患者简易智能状态量表中短时记忆、注意与计算、语言复述、时间定向、地点定向、言语表达6个亚组分值低于对照组(P<0.01)。④多导睡眠图各指标与其他指标相关性:简易智能状态量表总分及血清胰岛素样生长因子1与AHI负相关(P<0.01),与慢波睡眠时间、快动眼睡眠时间和最低血氧饱和度正相关(P<0.01);不同受累认知功能亚组与多导睡眠图各指标相关性不全一致,但均与睡眠结构紊乱及低氧相关。⑤简易智能状态量表总分及血清胰岛素样生长因子1相关性:两者呈显著正相关(r=0.778,P<0.01)。结论:①患者存在认知功能受损,主要表现在总体认知功能以及短时记忆、注意与计算、语言复述、时间定向、地点定向、言语表达领域的损害,随着病变严重程度的加深,认知功能受损的范围增加。②总体认知功能与夜间低氧、睡眠结构紊乱以及血清胰岛素样生长因子1水平降低相关。③患者血清胰岛素样生长因子1水平降低,与夜间低氧、睡眠结构相关。