α-亚麻酸植物甾醇酯调节自噬改善油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性

目的 观察α-亚麻酸植物甾醇酯（PS - ALA）对油酸（OA）诱导的肝细胞脂肪变性的影响，并从调节自噬角度进一步探索其可能的分子机制。方法 将HepG2细胞分为:对照组（Control）、模型组（OA）、ALA组（OA + ALA）、PS组（OA + PS）和PS - ALA组（OA + PS - ALA）。CCK - 8检测细胞活力；尼罗红染色观察肝细胞脂滴积累；GPO - PAP法测定细胞中TG的含量；Western blot检测自噬相关蛋白LC3II和p62蛋白表达水平；免疫荧光检测自噬调控因子p - mTORC1、LC3II和p62表达水平。采用单因素方差分析进行多组实验结果间的比较；采用LSD法和Dunnett T3法进行两两比较。结果 PS - ALA显著降低OA诱导的HepG2细胞脂质沉积和TG水平，且效果优于α- 亚麻酸（ALA）或者植物甾醇（PS）单独干预（F = 35.198, P＜0.001）；PS - ALA显著降低HepG2细胞LC3II和p62的蛋白表达水平，促进细胞自噬（F = 10.614, P = 0.001; F = 20.222 , P＜0.001）；进一步的分子机制研究表明PS - ALA抑制OA引起的mTORC1磷酸化激活（F = 644.164 , P＜0.001），同时伴随LC3II和p62的表达水平降低（F = 393.234, P＜0.001; F = 668.414 , P＜0.001）。结论 PS - ALA显著改善OA诱导的HepG2细胞脂肪变性，其分子机制可能与抑制mTORC1磷酸化促进自噬有关。     

α-亚麻酸植物甾醇酯调控TGF-β1/Smad信号通路改善小鼠肝纤维化

目的探讨α-亚麻酸植物甾醇酯(PS-ALA)对高脂高胆固醇饮食(HFCD)诱导的肝纤维化的改善作用,及其抑制TGF-β1/Smad信号通路的分子机制。方法将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为Control、HFCD、ALA、PS和PS-ALA组,每组10只。Control组给予普通饲料;HFCD组给予高脂高胆固醇饲料(45%kcal脂肪、2%胆固醇);ALA、PS和PS-ALA组给予相同的高脂高胆固醇饲料并分别添加1.3%ALA、2%PS和3.3%的PS-ALA。24w后,Masson染色评估肝脏纤维化严重程度;试剂盒检测HYP、ALT和AST水平;免疫荧光法检测肝脏α-SMA的表达水平;Western-blot法检测肝脏TGF-β1、Smad2/3、P-Smad2、α-SMA、COL1A1及CTGF蛋白表达水平。结果与Control组相比,HFCD组小鼠肝脏组织出现大量胶原沉积,同时伴随α-SMA蛋白表达水平上调,提示肝脏纤维化发生。PS-ALA显著改善HFCD诱导的小鼠肝脏纤维化,并显著降低血清ALT、AST以及肝脏HYP水平(P <0.05);PS-ALA显著下调纤维化...     

α-亚麻酸植物甾醇酯调节SIRT1抑制油酸和胆固醇联合诱导的HepG2细胞焦亡

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（PS-ALA）对油酸和胆固醇（OA/Cho）联合诱导的肝细胞焦亡的改善作用，并基于SIRT1信号分子进一步探索潜在的分子机制。方法 采用OA/Cho联合诱导HepG2细胞焦亡，同时给予PS-ALA、PS、ALA干预。油红O染色观察细胞脂质沉积；Hoechst33342/PI双染评价焦亡发生情况；蛋白免疫印迹检测细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD-N的表达水平；免疫荧光染色检测NLRP3的表达水平；免疫荧光双标记进行SIRT1和NLRP3以及SIRT1和GSDMD-N共定位。结果 与正常对照组相比，OA/Cho组细胞内有大量脂滴沉积，并且发生明显的细胞焦亡，细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N的表达水平显著增加，PS-ALA干预后显著改善OA/Cho诱导的细胞内脂质沉积，并有效抑制细胞焦亡。进一步的分子机制研究发现PS-ALA显著上调SIRT1的表达水平并同时降低NLRP3和GSDMD-N的表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/Cho诱导的HepG2细胞焦亡，其分子机制...     

α-亚麻酸植物甾醇酯调控Nrf2/GPX4信号通路抑制HepG2细胞铁死亡

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（PS-ALA）对油酸与铁死亡诱导剂（OA/erastin）联合诱导的HepG2细胞铁死亡的改善作用，并基于Nrf2/GPX4信号通路进一步探索其潜在分子机制。方法 采用1mmol的OA和10μmol的erastin联合诱导HepG2细胞发生铁死亡，同时给予ALA、PS和PS-ALA干预。油红O染色观察HepG2细胞脂肪变性程度；Hoechst/PI双染评价铁死亡发生；蛋白免疫印迹检测铁死亡相关蛋白Nrf2、GPX4、HO-1、NQO1及ptgs2的表达水平；荧光探针检测细胞内ROS与脂质过氧化物水平。结果 与Control组相比，OA/erastin组细胞内有大量脂质沉积，ROS和脂质过氧化物显著增多，发生明显铁死亡。PS-ALA干预显著减轻OA/erastin诱导的HepG2细胞脂质沉积、减少细胞ROS与脂质过氧化物产生，抑制铁死亡。进一步的分子机制研究表明PS-ALA显著上调HepG2细胞Nrf2及其靶基因GPX4、HO-1与NQO1的蛋白表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/erastin诱导的HepG2细胞铁死亡，其分子机制可能与上调Nrf...