用体外器官培养方法研究EDCs对新生小鼠睾丸的影响

目的 通过已建立的小鼠睾丸体外培养系统,研究四种内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs）对男性内分泌系统的影响。 方法 将新生小鼠的睾丸组织在体外环境中培养24h,而后在培养基中分别加入浓度为0.1μM, 1μM, 10μM and 100μM的四种（DEHP、MEHP、NP、p, p’-DDE）内分泌干扰物并培养72h,同时设置对照组;培养结束后进行组织学观察,测定冻存培养基中睾酮和抑制素βB (INH-βB)的分泌水平,同时测定细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P45017α-羟化酶(P450C17)和波形蛋白（vimentin）的基因表达情况。 结果 所有剂量组中睾酮的分泌水平均发生改变;P450Scc、3β-HSD、P450C17和INH-βB蛋白质的表达及mRNA水平均受到四种内分泌干扰物的影响（P<0.05）;DEHP和MEHP降低了波形蛋白的mRNA水平（P<0.05）,而NP和p, p’-DDE对波形蛋白没有显著影响（P>0.05）。 结论 本研究建立的体外培养新生小鼠睾丸模型中,所选的四种已知EDCs改变了两种睾丸激素水平,三种类固醇合成酶以及与支持细胞功能相关的波形蛋白的表达。     

桂花提取物Osthin的免疫功能研究

目的 通过对桂花提取物Osthin的免疫功能进行研究,促进其在食品、保健品等领域的开发。方法 将SPF级雌性昆明小鼠160只随机分为对照组和低、中、高剂量组（50、150、450 mg/kg bw）。灌胃Osthin 4周,分别进行脏器/体重比值测定、抗体生成细胞实验、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定和脾细胞的Treg/Th17比值分析。结果 与植物油对照组相比,一定剂量的桂花提取物Osthin对小鼠的胸腺系数（F = 8.440,P＜0.01）和脾脏系数（F = 4.710,P＜0.01）有增强作用;对脾淋巴细胞增殖能力有促进作用（F = 5.991,P＜0.01）以及可增强迟发型变态反应（F = 4.213,P＜0.05）;提高小鼠的吞噬指数a（F = 3.901,P＜0.05）;使抗体生成细胞数增加（F = 5.192,P＜0.01）。同时,随着桂花提取物Osthin浓度的升高,小鼠脾细胞的Th17细胞比例下降（F = 5.203,P＜0.05）、Treg细胞比例上升（F = 7.369,P＜0.05）,Treg/Th17比值也随之增大（F = 8.377,P＜0.01）。结论 桂花提取物Osthin具有较好的免疫增强作用,可能通过影响Treg/Th17的平衡调节细胞免疫功能。     

纳米三氧化二铁经口暴露对大鼠肝脏的影响

目的 探讨纳米三氧化二铁（iron oxide nanoparticles，Fe2O3 NPS）经口暴露后对大鼠肝脏的影响,评估其在食品领域的安全性。 方法 40只大鼠随机分配到低（L组）、中（M组）、高（H组）剂量组和分散剂对照组（C 组），分别给予 50、100、200mg/kg.bw Fe2O3 NPS悬浊液和等体积 0.5%的羟丙基甲基纤维素溶液灌胃。90d后腹腔麻醉取血，计算肝脏系数，观察肝脏组织病理学切片，检测血液生化指标谷丙转氨酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、血清白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）含量；测定肝组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - PX)活性、总抗氧化能力(T - AOC)活力、丙二醛(MDA)含量。 结果 各组大鼠的ALB、TP、AST均无统计学差异 (F=0.210；F=2.492；F=0.132，P＞0.05)；病理切片未观察到肝组织损伤；M组、H组的肝脏系数升高（t=2.343；t=2.957，P<0.05）、 T-AOC水平升高（t=2.552，P=0.015；t=5.669，P<0.001）,GSH活性升高（t=3.793，P=0.001；t=6.879，P<0.001）; M、H组的ALT活力降低(t=4.083，P=0.001；t=4.647，P<0.001)，MDA含量降低(t=4.290，P<0.001；t=4.754，P<0.001)。结论 在本研究所设计的灌胃剂量和干预时长的作用下，暂未观察大鼠肝脏病理组织改变，未对大鼠血液生化水平产生负面影响以及对大鼠肝脏产生氧化应激损伤,提示Fe2O3 NPs在食品正常剂量使用下是安全的。     

染料木黄酮对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制研究

  目的  研究染料木黄酮（genistein,GEN）对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制。  方法  选用30只初断乳（21日龄）SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组（Con组）、GEN低剂量组（G1组）、GEN高剂量组（G2组）,每组10只。根据大鼠体质量,分别以5 mL/kg玉米油、150 mg/kg和300 mg/kg用玉米油溶解的GEN灌胃6周,隔天称取体质量1次。6周后处死大鼠,解剖睾丸、附睾、前列腺组织,计算脏器系数;观察睾丸组织病理结构变化;计数精子数量并计算精子畸形率;放射免疫法检测血清中睾酮和雌二醇的质量浓度;免疫荧光技术检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2调节亚基2C（PPP2R2C）蛋白的表达定位;分别采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测大鼠睾丸组织中PPP2R2C和细胞周期依赖性蛋白激酶（CDK2）的mRNA和蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2A（PP2A）活性。  结果  各组大鼠体质量、精子数量、血清雌二醇、PP2A酶活性差异均无统计学意义（P>0.05）;G2组睾丸组织的病理结构紊乱;G1和G2组的精子畸形率高于Con组（P<0.05）;G2组的血清睾酮质量浓度低于Con组（P<0.05）;G2组PPP2R2C和CDK2的mRNA水平高于Con组（P<0.05）,但蛋白水平低于Con组（P<0.05）;PPP2R2C蛋白在各组睾丸组织中均有表达。  结论  青春期前长期暴露高剂量（300 mg/kg）GEN会对雄性大鼠成年后的生殖功能造成不良影响。由于在PP2A酶活性没有改变的情况下,磷酸化CDK2（p-CDK2）蛋白的表达量出现下降,PPP2R2C-PP2A-CDK2磷酸化路径可否影响大鼠的生殖系统仍需进一步研究。