细胞因子诱导破骨细胞分化的2种实验模型的建立

目的探讨体外从单个核细胞诱导分化形成破骨细胞的2种不同方法,建立研究细胞因子对破骨细胞分化作用的2种不同实验模型。方法外周血单个核细胞在10-8mol/L LTB4和25μg/LM-CSF刺激下,经过2周的直接诱导分化;外周血单个核细胞与RAFLs共培养,加入10-8mol/L LTB4和25μg/L M-CSF,经过3周的间接诱导分化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞样细胞(OCL)。结果通过直接分化和间接分化均可形成破骨细胞样细胞。结论2种不同实验模型能分别用于研究细胞因子对破骨细胞的直接和间接分化作用。     

IL-2诱导类风湿关节炎与骨关节炎T淋巴细胞STAT3 STAT5酪氨酸磷酸化状态的比较

目的观察白细胞介素(IL)-2作用于类风湿关节炎(RA)与骨关节炎(OA)外周血T淋巴细胞前后,T淋巴细胞中STAT3及STAT5的酪氨酸磷酸化活化状态,并进行比较.方法从RA与OA患者的外周血中分离培养单个核细胞,继而纯化得到T淋巴细胞,静息后,用重组人IL-2刺激,在各时相裂解细胞,收获提取蛋白,进行Western blot分析.结果在静息后,RA与OA的外周血T淋巴细胞中STAT3与STAT5均处于极低水平磷酸化的状态;在IL-2作用后,T淋巴细胞中STAT3和STAT5发生时相性的酪氨酸磷酸化,而RA的T淋巴细胞磷酸化程度较OA显著增高.结论IL-2对RA患者T淋巴细胞的STAT3和STAT5过度激活,引起T淋巴细胞中IL-2信号传导的异常放大效应,可能在RA的发病过程中发挥重要作用.     

趋化素样因子1在类风湿关节炎滑膜中的表达研究

目的研究趋化素样因子1(CKLF1)在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达,探讨CKLF1在RA发病过程中的可能的病理作用。方法取35例RA,20例骨关节炎(OA)及20例半月板损伤患者手术切除的膝关节滑膜标本。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CKLF1在上述3种病变滑膜中的mRNA水平表达水平。采用免疫组织化学方法检测CKLF1在滑膜组织中的蛋白水平表达特征。结果RA滑膜组织中CKLF1在mRNA水平的表达(0．41±0．17)明显高于OA(0．07±0．06)和半月板损伤患者(0．16±0．10)(P<0．05)。免疫组织化学结果显示,OA病例中仅有2例显示少量滑膜衬里层细胞着色,半月板损伤病例仅有5例显示少量滑膜衬里层细胞着色。在RA滑膜中20例染色强阳性,10例染色阳性,5例染色阴性。阳性染色颗粒位于细胞胞质内,阳性细胞定位在滑膜衬里层的成纤维细胞、滑膜下层大量的浆细胞以及增生的血管上皮细胞。结论CKLF1基因在RA滑膜中有高水平的表达特征,为进一步深入研究RA的发病机制提供新的研究思路。     

HLA-B2704转基因小鼠自发性前葡萄膜炎

目的　观察HLA B2 70 4转基因小鼠葡萄膜炎发病情况和糖皮质激素治疗的初步疗效。方法　应用PCR、斑点杂交、Southern杂交、免疫组织化学和流式细胞术进行阳性动物筛选和表达检测。隔日观察眼部症状 ,可疑动物行眼底镜以及裂隙灯检查 ,眼球组织切片行HE染色 ,房水行细胞计数和分类统计。结果　部分HLA B2 70 4转基因阳性鼠出现明显畏光 ,眼科检查发现角膜后沉淀。病理发现角膜上皮细胞增生 ,排列紊乱。房水总细胞数增加 ,炎性细胞与总细胞数之比为9 2 4%。正常对照比值为 0 75 %。 χ2 检验显示二者差异存在显著性 ,P <0 0 5。地塞米松治疗可以减轻症状 ,停药后症状加重。符合前葡萄膜炎诊断。结论　首次在转基因小鼠观察到类似人的HLA B2 7相关性前葡萄膜炎。     

中国人群HLA－B＿（27）等位基因亚型与强直性脊柱炎的相关性研究

利用聚合酶链式反应和顺序特异性寡核苷酸探针斑点杂交方法，对７８例中国汉族强直性脊柱炎（ＡＳ）病人ＨＬＡ－Ｂ２７，基因分析结果显示，该基因与ＡＳ易感性显著相关，在中国汉族ＡＳ病人中至少存在两种亚型，其中Ｂ２７４０亚型频率最高（占５４．８％），其次Ｂ２７０５（占４１．１％）。实验结果表明，不同人种ＡＳ患者的Ｂ２７亚型分布频率不同；与强直性脊柱炎相关的可能是各亚型共有的序列特征，即Ｂ２７特异性抗原决定基而与各亚型特异性序列特征无关。     

低分子量多肽2 基因多态性与强直性脊椎炎表型的关系

目的研究低分子量多肽（ｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｐｅｐｔｉｄｅ,ＬＭＰ）基因多态性与强直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ,ＡＳ）表型的关系。方法收集各种类型ＡＳ和单纯虹膜炎（Ａｃｕｔｅａｎｔｅｒｉｏｒｕｖｅｉｔｉｓ,ＡＡＵ）血标本１１８例。应用聚合酶链反应技术对正常人和患者进行ＨＬＡ－Ｂ２７检测以及ＬＭＰ２和ＬＭＰ７扩增,以ＣｆｏⅠ进行限制性酶切图谱分析。结果ＡＳ有ＡＡＵ病史患者ＬＭＰ２基因ＢＢ型频率较正常人以及ＡＳ患者明显增高（Ｐ＜０．０５）,ＯＲ为３．７１。少年型ＡＳ与成年型ＡＳ以及单纯中心型ＡＳ与伴有外周关节炎（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＰＡ）的ＡＳ之间ＬＭＰ２基因型没有明显差异（Ｐ＞０．０５）。ＰＡ＋／ＡＡＵ＋与ＰＡ＋／ＡＡＵ－患者间存在显著差异（Ｐ＜０．０５）,ＯＲ值为４．６３６。ＡＡＵ患者与正常人存在显著差异（Ｐ＜０．０５）,ＯＲ值为５．８３。ＬＭＰ７基因多态性无明显差异。结论ＬＭＰ２基因多态性与有ＡＡＵ病史的ＡＳ以及单纯ＡＡＵ发病存在明显相关,而与ＡＳ发病年龄以及关节类型没有明显关系。     

人β2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定

目的:制备人β2m转基因小鼠,研究HLA-B2704的表达.方法:应用显微注射将人β2m基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵,出生动物及其后代经PCR筛选,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数,利用RT-PCR检测阳性鼠中人β2m转基因的表达.结果:6只原代仔鼠及7只它们的下一代(F1)带有人β2m基因.由微注射基因后移卵出生的86只小鼠中,C57BL/6×昆明鼠杂交仔鼠35只,其中4只阳性(11.4%),昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠51只,其中2只阳性(3.9%),含有人β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠20只,其中7只阳性.整合的转基因均为单拷贝.Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合.阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达.结论:在转基因动物制备中,C57BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代.与人HLA-B2704基因相比,人β2m基因不易整合,其整合率与整合拷贝数均较低.得到的人β2m转基因小鼠能够将人β2m基因传给下一代并可与人HLA-B2704转基因鼠交配.     

人类白细胞抗原B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达

目的研究人类白细胞抗原(HLA)-B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达。方法应用显微注射技术将HLA-B2704基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F0代受精卵,出生动物进行聚合酶链反应(PCR)筛选及Southern杂交鉴定。阳性者进行反转录(RT)-PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达。结果101只F0代仔鼠中,10只F0代仔鼠基因组中有HLA-B2704基因整合。其中昆明鼠×昆明鼠F0代3只,整合率为4.7%,C57BL/6×昆明鼠F0代7只,整合率为18.9%(字2检验,P<0.05)。阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA-B2704基因的mRNA水平表达,其外周血淋巴细胞膜上HLA-B2704基因的蛋白表达为7.87%(直方图统计表,5%以上为阳性)。结论尽管受精卵的注射成活率差异无统计学意义,在注射浓度相同的情况下,含有C57BL/6基因背景的受精卵更易整合外源基因,而单纯昆明鼠的受精卵不易接受外源基因。C57BL/6×昆明鼠F0代比单纯昆明鼠F0代更适合于转基因动物的制备。HLA-B2704的重链分子与小鼠茁2微球蛋白结合的复合物不稳定,不易于在细胞表面表达。     

HLA-B2704转基因小鼠的银屑病样皮肤病

目的 通过对HLA－B2704转基因小鼠的皮肤疾病表型的研究,证实HLA－B2704在银屑病样皮肤病发病中的作用。方法 应用聚合酶链式反应（PCR）、斑点杂交和Southern杂交对转基因小鼠进行筛选和鉴定,并用图象处理测定其整合拷贝数,发病鼠行皮肤HE染色和免疫组织化学染色检测病理和HLA－B2704的表达。结果 有6只转基因阳性鼠出现明显的皮肤银屑病样改变,皮肤HE染色可见表皮明显增生、角化,免疫组织化学表皮细胞内可见HLA－B2704高表达。结论 HLA－B2704重链可诱发转基因小鼠银屑病样皮肤病。     

低浓度氯乙烯职业危害的调查

低浓度氯乙烯职业危害的调查齐鲁石化公司中心医院（２５５４００）胡富荣蒋东芳１９９５年５月至８月我们对某氯碱厂的生产氯乙烯车间，进行了职业危害的调查，现报告如下。一、资料与方法（一）生产环境该生产工艺系用乙烯、氯和氧为原料生产氯乙烯单体。生产流程由直接...