237例意向生育二孩男性精液常规与精子DNA损伤的相关性分析

目的对40岁以上有意向生育二孩的男性精液常规参数与精子DNA损伤进行相关性分析。方法收集2015年11月至2016年9月来本中心就诊的40岁以上有二孩生育意愿的男性精液标本237例。分别利用计算机辅助方法进行精液常规分析,利用改良巴氏染色法进行精子形态学分析,通过染色质扩散法(SCD)检查精子DNA碎片率。依据年龄与精液常规主要参数进行分组,分析各组精子DNA损伤差异,探讨精液常规各参数与精子DNA损伤程度的相关性。结果 237例研究对象平均年龄为(43.7±3.4)岁,精液体积(3.2±1.5)ml,精子浓度(67.5±38.9)×106/ml,精子前向运动率(45.0±22.2)%,正常形态精子(9.6±5.5)%,精子DNA损伤程度(21.8±14.9)%;精子DNA碎片率与精子前向运动、精子正常形态成低度负相关(r=-0.333、r=-0.365),与年龄成极弱正相关(r=0.146),与精液体积、精子浓度无相关关系(r=-0.064、r=0.057)。结论精子DNA损伤随着年龄的增加而增加,与精子活力及形态成负相关,40岁以上有意向生育二孩的男性精液常规分析可与精子DNA碎片进行联合分析。     

精子碱性单细胞凝胶电泳法优化条件的建立及效果分析

目的:探讨精子碱性单细胞凝胶电泳法(SCGE)的主要影响因素,并优化条件,以利于标准化。方法:采用不同浓度H2O2处理精子,碱性SCGE检测精子DNA碎片(SDF),探讨凝胶层数、DNA解旋及电泳时的p H、DNA解旋及电泳时间、计数精子数对结果的影响,分析优化后方法的重复性,并用于检测40例精液标本。结果:3层琼脂糖凝胶可降低本底,DNA解旋及电泳缓冲液最佳p H值为10,最佳DNA解旋及电泳时间分别为40 min和30 min,计数50个精子即可保证结果的可靠性。优化后的碱性SCGE,用尾部DNA含量百分比表示,其批内、批间变异系数(CV)分别为3.12%、7.13%,用DNA损伤得分表示,其批内、批间CV分别为2.38%和6.09%。与健康生育男性相比,少弱畸形精子症不育男性精液SDF显著升高(P0.05)。结论:优化后的精子碱性SCGE,重复性好,易于标准化,可用于不育男性SDF检测,适合在临床推广应用。     

精子DNA碎片指数在男性生育力评估及其疗效监测中的应用

目的 探讨精子DNA碎片指数(DFI)在评估男性生育力及监测抗氧化药物对高DFI男性不育患者疗效中的应用.方法 根据生育力不同将2017年2月至2019年7月至湖南省妇幼保健院就诊的2122例男性分为3组:正常生育组(62例)、女方复发性流产的不育组(61例)及不育行体外受精(IVF)组(1999例);用精子染色质结构...     

全面二孩政策实施后准备生育二孩的男性精液质量分析

目的 对二孩政策全面实施后准备生育二孩的丈夫精液常规参数、精子畸形率进行分析。 方法 将纳入标准的研究对象分为意向生育二孩组(二孩组,n=232)、试管婴儿组(试管组,n=120)、正常生育组(正常组, n=82),精液标本充分液化后严格按照《WHO人类精液检查与处理实验手册(第五版)》进行精液常规分析, 采用改良巴氏染色法, 严格按照Kruger标准检测研究对象精子畸形率。 结果 ① 二孩组、试管组、正常组的年龄分别为(37.1±5.7)、(33.0±6.2)、(28.2±3.8)岁;精液量分别为(2.8±1.7)ml、(2.8±3.5)ml、(3.1±0.9)ml;精子浓度分别为(73.4±53.6)×10⁶/ml、(45.7±49.7)×10⁶/ml、(79.8±48.0)×10⁶/ml;精子总活力分别为(60.9±18.8)%、(30.7±13.0)%、(71.8±14.8)%;精子前向运动率分别为(51.2±17.9)%、(23.5±10.8)%、(61.9±15.9)%;精子畸形率分别为(87.8±5.8)%、(93.6±6.1)%、(86.5±6.7)%。② 三组间进行两两比较,二孩组的精子浓度、精子总活力、精子前向运动率和正常形态精子百分比方面明显优于试管组,差异有统计学意义(P＜0.01),精液量均值与试管组相同,但差异有统计学意义(P＜0.05);与正常组相比,二孩组在精液量、精子总活力、精子前向运动率方面低于正常组,差异有统计学意义(P＜0.01),但精子浓度、精子总畸形率方面差异无统计学意义(P＞0.05);正常组在精液量、精子浓度、精子总活力、前向运动率、精子形态方面明显优于试管组,差异有统计学意义(P＜0.01)。 结论 准备生育二孩的男性精液质量较正常生育者差异不明显,但要明显优于进行试管婴儿的男性。     

超高效液相色谱-荧光法检测精液中DNA甲基化水平

目的建立超高效液相色谱-荧光法(UPLC-FLD)定量分析精液标本中DNA甲基化水平。方法精液样本DNA提取、水解后,以100 mmol/L 2-溴苯乙酮为衍生试剂,在0.51 mol/L乙酸乙腈溶液中80℃加热60 min,生成脱氧胞嘧啶核苷(d C)和5-甲基脱氧胞嘧啶核苷(5md C)的荧光衍生物(λex=306 nm,λem=378 nm)。取1μL上清液进样,经Agilent C18色谱柱(2.1×100 mm、1.8μm)分离[流动相为28%甲醇+10%乙腈+62%水溶液(含0.1%甲酸),柱温40℃,流速0.3 m L/min]及统计学分析,并用临床样本进行验证。结果在上述最佳衍生反应与色谱分离条件下,7 min即可将精液DNA中的d C与5md C完全分离,无需消除RNA干扰;本法中5md C的检测限为2.5 pg/μL,线性范围为0.025~0.75 ng/μL,r0.99,日间、日内变异系数(CV)5.6%,衍生化合物室温条件放置30 h内比较稳定。临床精液样本结果表明,少弱畸精子症患者的DNA甲基化水平低于健康男性。结论建立的UPLC-FLD法可快速、简便、准确、稳定地检测基因组DNA甲基化水平。