氯化镉引起线粒体分裂诱导小鼠精母细胞GC-2 spd凋亡

目的探讨镉诱导小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡的作用机制。方法于2021年3月, 分别用5和10 μmol/L氯化镉(CdCl2)染毒GC-2 spd细胞24 h, 分别为CdCl2 5 μmol/L染毒组(CdCl2低剂量组)和CdCl2 10 μmol/L染毒组(CdCl2高剂量组), 以未染毒的GC-2 spd细胞作为对照组。采用Mito-Track Red CMXRos线粒体荧光探针染色细胞检测线粒体形态, 流式细胞术结合JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化;使用细胞线粒体分离试剂盒和RIPA裂解液分别提取GC-2 spd细胞的线粒体蛋白、细胞浆蛋白和细胞总蛋白, Western blot检测线粒体稳态调节蛋白[分裂蛋白(FIS1)和融合蛋白(OPA1)]及细胞凋亡相关蛋白(Cytochrome c和cleaved Caspase-3)的表达。结果与对照组细胞比较, CdCl2低剂量组和高剂量组细胞中JC-1红色/绿色荧光信号相对比值均明显降低(0.740±0.071、0.570±0.028), 差异有统计学意义(P=0.017、0.004);线粒体形态由长管状变为点状,...     

Parkin蛋白抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解和增殖迁移

目的 评估Parkin蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和生长增殖的影响。方法 首先采用Western blot检测Parkin蛋白在人乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达。随后构建高表达Parkin的乳腺癌MDA-MB-231细胞株为实验组,以转染空载体的MDA-MB-231细胞为对照组,分别采用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测两组细胞葡萄糖摄取量,乳酸和ATP生成量,并通过Western blot检测糖酵解相关蛋白GLUT1、PKM2和LDHA表达水平;运用细胞增殖实验、平板克隆及细胞划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的表达水平。结果 与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞Parkin蛋白表达水平显著下降（P<0.01）。高表达Parkin可使乳腺癌MDA-MB-231细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成下降,ATP水平上升（P<0.05）,其增殖和迁移能力下降（P<0.01）;与对照组相比,Parkin组细胞糖酵解相关蛋...     

武汉市学龄前儿童幽门螺杆菌感染与炎症性疾病关联研究

目的 探讨武汉市学龄期儿童幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染与炎症性疾病发生风险的关联性。方法 采用分层整群抽样的方法，于2019年11-12月间抽取武汉市7个区3162例学龄前童进行炎症疾病问卷调查。通过收集医疗档案选取其中670名确认为Hp感染儿童作为感染组，其余作为对照组。比较两组人群炎症性疾病（包括哮喘、肺炎、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、食物过敏）患病情况，运用非条件多因素logistic回归进行关联性分析。结果 共回收2886份有效问卷，应答率为91.27%。与未感染Hp儿童相比，Hp患儿与炎症性疾病的关联有统计学意义（P值均<0.05），发生哮喘、肺炎、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、食物过敏的风险均增加，OR值分别为2.09（95%CI:1.31~3.20）、1.66（95%CI:1.41~2.00）、1.58（95%CI:1.31~1.94）、1.83（95%CI:1.51~2.22）、1.99（95%CI:1.61~2.51）。多因素分析控制了性别、年龄、被动吸烟、炎症家族史之后，Hp与炎症性疾病仍有关联（P值均＜0.05）。结论 儿童Hp感染是炎症性疾病的危险因素，提示应加强对儿童Hp感染的风险防范意识，合理制定相关防治和预防措施。     

三阴性乳腺癌细胞中线粒体功能障碍对糖代谢途径的影响

目的:探讨线粒体功能损伤和膜通透性转换与乳腺癌细胞中葡萄糖有氧糖酵解途径的相关性。方法:分别采用MitoTracker Green、TMRE和钙黄绿素（Calcein AM）荧光染色检测乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MDA-MB-231、BT-20的线粒体形态、线粒体膜电位和膜通透性;通过检测试剂盒分析其葡萄糖消耗量、乳酸生成量、ATP水平,以及三羧酸循环中琥珀酸脱氢酶（SDH）和线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）的活性;采用Western blot检测三组细胞中糖酵解相关蛋白葡萄糖转运受体1（GLUTI）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）和乳酸脱氢酶A（LDHA）的表达情况。采用2.5 μmol/L环孢菌素A（CsA）处理MDA-MB-231和BT-20细胞24 h后检测其线粒体形态及糖代谢的相关指标。结果:与MCF-10A细胞比较,乳腺癌MDA-MB-231和BT-20细胞的线粒体呈短管状或点状,线粒体膜电位下降而线粒体膜通透性增加,葡萄糖消耗量和乳酸生成量均升高（P＜0.05）;细胞内GLUT1、GAPDH、PKM2和LDHA蛋白表达均显著升高而SDH和ICDHm酶活性降低（P＜0.05）;CsA处理后MDA-MB-231和BT-20细胞中线粒体呈长杆状,葡萄糖消耗量和乳酸生成量下降而ATP水平、SDH和ICDHm酶活性均升高（P＜0.05）。结论:乳腺癌MDA-MB-231和BT-20细胞中有氧糖酵解与线粒体异常相关,CsA可恢复线粒体结构和功能,重塑葡萄糖代谢途径。     

SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨抑制精子相关抗原6（sperm-associated antigen 6,SPAG6）对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞（NOE-71）和卵巢癌细胞（SKOV-3、OVCAR-3）,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验检测细胞中SPAG6基因的表达。将4种潜在抑制SPAG6基因表达的“SPAG6-shRNA”质粒分别转染到SKOV-3细胞,RT-qPCR和Western blot实验筛选有效抑制SPAG6基因表达的细胞株;采用细胞计数法和平板克隆实验检测抑制SPAG6基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响;运用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞实验检测抑制SPAG6基因表达对细胞周期的影响;免疫荧光实验和Western blot检测在SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达对p27kip1分布的影响。结果:SPAG6基因在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强。RT-qPCR和Western blot实验显示2种“SPAG6-shRNA”质粒能够有效抑制SKOV-3细胞中SPAG6基因的表达;与对照组细胞相比,抑制SPAG6基因表达能够降低SKOV-3细胞的增殖,差异有统计学意义（P＜0.01）;平板克隆实验显示抑制SPAG6基因表达能降低SKOV-3细胞的克隆形成率,差异有统计学意义（P＜0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验显示抑制SPAG6基因表达能够降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力（P＜0.01）;流式细胞实验显示抑制SPAG6基因表达能使细胞G0/G1期显著上调,S期显著下调(P＜0.01)。SKOV-3细胞中抑制SPAG6表达可降低细胞质中p27kip1的水平而增加细胞核中p27kip1的水平。结论:SPAG6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

去泛素化酶通过肿瘤坏死因子-α途径对小鼠心肌衰老的作用

目的探讨去泛素化酶(CYLD)在小鼠心肌细胞衰老中的作用及机制。方法选取野生型FVB(WT)小鼠和CYLD过表达(CYLD+/+)小鼠构建自然衰老模型。2月龄雄性WT小鼠(WT-2M, n=10)和CYLD+/+小鼠(CYLD-2M, n=10)作为年轻组, 普通饲养17.5月(WT-17.5M, CYLD-17.5M, n=10)作为年老组。小动物超声检测心功能[左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)], 蛋白免疫印迹检测心肌组织衰老相关蛋白p53、p21、p16表达水平, 实时荧光定量PCR(qPCR)检测心肌组织衰老相关分泌表型(SASP) [细胞因子白介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、趋化因子CXCL1(CXCL1)]转录水平。转录组测序检测CYLD调控心肌细胞衰老的信号通路, 对肿瘤坏死因子α(TNF-α)通路行qPCR验证。结果与WT-17.5M小鼠比较, CYLD-17.5M小鼠心功能LVEF和LVFS值增高(均P<0.05);p53、p21、p16蛋白表达水平减低(均P<0.05), IL1B、MMP3、CXCL1转录水平...     

心肌梗死小鼠不同时间点心肌组织mRNA表达谱的变化

目的 分析小鼠心肌梗死(MI)后7、14、28d心肌组织mRNA表达谱的变化.方法 将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(S组)和MI模型组(MI组),每组10只.采用结扎小鼠冠状动脉左前降支方法建立MI模型,行心电图和组织病理学检查验证,心脏彩超观察心脏结构变化.取梗死边缘区心肌组织进行转录组测序,筛选差异表达mR...