新生期大鼠化学物暴露对睾丸DNA甲基化及精子生成的影响

目的 通过新生期大鼠暴露DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)、镉(Cd)和多氯联苯153(PCB153),探讨化学物新生期暴露对SD大鼠睾丸DNA甲基化变化、细胞凋亡和精子生成的影响.方法 将出生3 d(postnatal day 3,PND3)SD大鼠随机分组,每组24只动物.经口给予溶剂对照5-Aza-CdR(0.025、0.250mg/kg)、PCB153(0.025、0.250、2.500mg/kg)和Cd(1、2、4mg/kg),连续暴露5 d.最后1次暴露24 h后,解剖每组的一半动物,剩余动物在无暴露条件下继续喂养至12周龄(成鼠)解剖.检测睾丸细胞凋亡和DNA甲基化水平.结果 与对照组比较,新生期大鼠5-Aza-CdR、PCB153和Cd暴露后,在12周龄时精子计数均呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05).新生期化学物暴露后,与对照组相比,基因组整体DNA甲基化水平降低,新生期细胞凋亡上升,差异均有统计学意义(P<0.05). 5-Aza-CdR使p53启动子区BstUI位点甲基化水平下降,p53基因表达上调,提示p53通路可能是DNA甲基化诱导细胞凋亡的通路之一.新生期大鼠Cd暴露可诱导整体DNA甲基化变化,细胞凋亡增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但p53 mRNA表达及p53启动子区BstUI位点甲基化水平和对照组相比,差异无统计学有意义(P>0.05),提示Cd暴露诱导的细胞凋亡可能是非p53通路依赖的.PCB153的体内暴露未发现基因组整体甲基化和细胞凋亡的明显变化.结论 新生期化学物体内暴露可诱导成年精子形成障碍.DNA甲基化异常和细胞凋亡可能是其中的机制之一.     

071 基于PCR技术的DNA甲基化检测方法研究进展

DNA甲基化是表观遗传修饰最基本的方式,在维持正常细胞功能、胚胎发育和肿瘤发生中起着重要的作用,是当前学术研究的重点和热点.随着研究的深入,为满足不同研究目的需求,DNA甲基化检测方法也得到了较快的发展.本文针对近年来基于PCR技术的DNA甲基化检测方法进行简要的分析总结,为选择适合研究目的的检测方法提供帮助.     

基于PCR技术的DNA甲基化检测方法研究进展

DNA甲基化是表观遗传修饰最基本的方式，在维持正常细胞功能、胚胎发育和肿瘤发生中起着重要的作用，是当前学术研究的重点和热点。随着研究的深入，为满足不同研究目的需求，DNA甲基化检测方法也得到了较快的发展。本文针对近年来基于PCR技术的DNA甲基化检测方法进行简要的分析总结，为选择适合研究目的的检测方法提供帮助。     

5-Aza-2＇-deoxycytidine暴露对新生大鼠精子发生的影响

[目的]探讨暴露于DNA甲基化抑制剂5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-CdR）对新生SD大鼠生长发育和成年精子发生的影响。[方法]新生大鼠随机分为3组,每组24只雄鼠。自出生第3天（postnatal day3,PND3）开始经口给予5-Aza-CdR 25、250μg／kg,对照组给予等量的溶剂。连续暴露5d,最后一次暴露结束后24h,处死半数雄鼠（幼鼠。剩余部分继续喂养至12周龄（成鼠）,乙醚麻醉。取睾丸组织做病理学检查、精子头计数等,附睾做精子畸形检查。[结果]随着剂量的增加,幼鼠体重出现下降趋势,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。组织病理学发现幼鼠睾丸组织中出现空泡变性。检查发现染毒结束后继续喂养至12周的成鼠睾丸组织无明显形态和组织学变化;但每克睾丸组织精子头计数及每日精子生成量随幼年时暴露剂量增加呈现下降趋势（P〈0.05）,而精子畸形率随剂量增加呈现上升趋势（P〈0.05）。[结论]新生大鼠对DNA甲基化抑制制5-Aza-CdR生殖毒性作用敏感,低剂量短时间的暴露即可引起成年期生殖功能的异常。     

297例中老年妇女腰椎和髋部骨密度变化特点分析

目的了解中老年妇女腰椎和髋部骨密度（BMD）的变化规律及其影响因素，探讨不同测量部位对骨质疏松（OP）诊断的影响，并为防治OP提供科学参考。方法从2004年1月～2006年1月在南昌大学第二附属医院骨密度测定窒检测的就诊者中随机抽取297例中老年妇女，准确记录其年龄、身高、体重；采用法国DMS公司Challenger双能X线骨密度测定仪（DEXA）检测腰椎（L2～4）、股骨颈、Ward’s三角以及大转子的BMD，然后进行比较和统计分析。结果各部位的BMD均随年龄的增加而下降，其中以Ward’s三角下降最为明显；腰椎（L2～4）和髋部各部位BMD均与身高、体重及体质指数（BMI）呈正相关；低BMI组（BMI％18）与超BMI组（BMI〉25）比较，髋部各部位的BMD差别有统计学意义（P〈0．01）；中老年妇女骨质疏松检出率最高者为腰椎，其次为Ward’s三角。结论中老年妇女是OP的高危人群，女性在40岁之后应监测BMD的变化，中老年人群应普及预防知识，加强锻炼，增加户外活动，以减少OP的发生。     

大鼠新生期暴露2,2',4,4',5,5'-六氯联苯对精子发生的影响

目的 探讨新生期SD大鼠暴露持续性有机污染物2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对大鼠精子发生的远期效应.方法 大鼠出生当天(postnatal day O,PNDO),将所有雄性大鼠混合后,重新分为12只,窝.在出生1 d(PND1),按窝别随机分成对照组和处理组,每组24只雄性大鼠.自PND1开始连续7 d经口给予PCB153 0.025、0.250、2.500 mg/kg和等量溶剂对照玉米油.在PND8,每组随机选择16只大鼠称重和测肛殖距离后,经乙醚麻醉并处死,分离和称重睾丸后作组织学检查.剩余大鼠在PND21断奶并饲养至PND90,称重和测肛殖距离后经质量分数为10%的水合氯醛麻醉后解剖,分离并称重睾丸和附睾,其中睾丸用作组织学检查和精子头计数,附睾尾作精子计数.结果 从PND3至PND8,2.500 mg/kg剂量组体重与对照组相比明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);在光学显微镜和电子显微镜下观察显示,PND8睾丸组织曲精小管结构疏松,精原细胞体积增大、变性并与管内结构相脱离.随着染毒剂量的增加,PND90睾丸每日精子生成量和附睾尾精子计数与染毒剂量呈剂量-反应关系(r值分别为-0.97和-0.99,P<0.05).0.250和2.500mg/kg剂量组的每日精子生成量分别为30x106/g睾丸和18×106/g睾丸,与对照组(36×106/g睾丸)相比,差异有统计学意义(P<0.05);0.250和2.500 mg/kg剂量组附睾尾精子计数分别为42×107/g附睾尾和18x107/g附睾尾,明显低于对照组(51×107/g附睾尾),差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SD大鼠新生期暴露PCB153,可引起成年期睾丸生精功能障碍,导致每日精子生成量和附睾尾精子计数下降.新生期化学物暴露可能引起雄性大鼠生殖功能的远期损害.