医院获得性肺炎患者分离耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌OprD的表达

目的 研究耐碳青霉烯类抗菌药物铜绿假单胞菌(PAE) OprD的表达水平,探讨济南地区PAE耐碳青霉烯类抗菌药物的机制.方法 收集从医院获得性肺炎患者痰液中分离的PAE,提取13株耐碳青霉烯类抗菌药物菌株的RNA,应用荧光实时定量PCR分析PAE外膜蛋白oprD的基因表达水平;采用超声破碎法制备外膜蛋白,超速离心收集外膜蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离外膜蛋白,观察OprD的表达.结果 荧光实时定量RT-PCR检测PAEoprD基因表达的结果表明,实验室标准株Ct值oprD/rpsL为1.42;13株碳青霉烯类耐药株Ct值oprD/rpsL平均值为1.17,与实验室标准株相比,差异有统计学意义(t=3.0716,P＜0.01),2株碳青霉烯类敏感株Ct值的oprD/rpsL平均值为1.58,与实验室标准株相比,差异无统计学意义;外膜蛋白电泳图谱表明,碳青霉烯类耐药株在45 kDa处表达明显下降,此处外膜蛋白为OprD.结论 济南地区PAE耐碳青霉烯类抗菌药物与OprD表达水平下降有关.     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

近年来不动杆菌对碳青霉烯酶的耐药性不断增强，并且呈现多药耐药趋势。研究表明，不动杆菌对碳青霉烯的主要耐药机制是产生了质粒或染色体编码的碳青霉烯酶。为了解本地区鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶的类型，进行了研究。     

肺血栓栓塞症的抗凝药物治疗

1 引言 抗凝治疗是肺血栓栓塞症与深静脉血栓形成的基本治疗方法,可以有效地防止血栓再形成和复发,同时利用机体自身纤维蛋白溶解机制溶解已形成的血栓.对肺血栓栓塞症与深静脉血栓形成患者,无论是否给予溶栓治疗,在没有禁忌证的情况下均应常规给予抗凝治疗.对于临床高度怀疑肺血栓栓塞症的患者,在等待诊断检查结果期间,即可安排使用肝素钠或低分子肝素钠进行有效的抗凝治疗.抗凝药物多采用肝素钠、低分子肝素钠和华法林.     

碳青霉烯酶OXA 72在毕赤酵母中的表达和纯化

目的对我国临床分离的第一株鲍曼不动杆菌产生的碳青霉烯酶OXA 72在毕赤酵母表达系统中进行重组表达及分离纯化。方法提取临床分离的鲍曼不动杆菌菌株40的基因组DNA,PCR扩增oxa 72全基因;将oxa 72基因双酶切回收后与毕赤酵母表达载体连接,重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定;电转化法将线性化的重组表达DNA转导入GS115感受态细胞,在Zeocin平板上筛选阳性转化子,并通过PCR和Western进行验证;对阳性克隆进行头孢硝噻吩实验,检测表达OXA 72的活性。用镍柱分离纯化OXA 72。结果以该株鲍曼不动杆菌的基因组DNA为模板,用目的引物进行PCR可获得843?bp的特异扩增条带;DNA测序证明核苷酸序列与Genbank公布的oxa 72基因序列100%一致;电转化后经Zeocin平板筛选得到一株阳性克隆,SDS PAGE表明重组蛋白的相对分子量在34～43?kDa之间,Westem blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His Tag抗体结合。头孢硝噻吩试验为阳性。纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论成功构建了OXA 72的表达载体,在毕赤酵母中成功地表达并分离纯化了具有酶活性的OXA 72。     

不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素机制的研究进展

近年来,随着临床广谱抗生素的大量使用,分离出了多种不动杆菌耐药株。本文主要从菌株产生的可使碳青霉烯类抗生素失活的多种碳青霉烯酶的遗传表达以及细胞膜通透性和抗生素作用靶位的改变对菌体耐药性的影响等方面阐述了不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。