人新的生长激素异形体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的　构建含新的生长激素异形体 (GHv)基因全长编码区的pGEM TEasy质粒和GHv 谷胱甘肽转硫酶 (GST)融合蛋白的表达质粒并在大肠杆菌表达出其融合蛋白。方法　采用克隆和亚克隆技术构建GHv GST融合基因的表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1并用异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导其表达GHv GST融合蛋白 ,谷胱甘肽 Sepharose 4B纯化试剂盒纯化融合蛋白。 结果　含GHv GST融合基因表达质粒的大肠杆菌表达出相对分子质量约 43 0 0 0的GHv GST融合蛋白 ,SDS PAGE结果显示纯化的融合蛋白为单一条带。结论　成功构建成GHv GST融合基因的表达质粒并且GHv GST融合蛋白在大肠杆菌BL2 1中有高表达。上述工作为制备多抗 ,深入研究GHv基因的功能奠定了基础。     

PBL教学法在生物化学课程教学中的探索

为探讨基于问题的教学法(Problem based learning,PBL)在生物化学教学中的应用效果,采用考核和问卷调查方式对PBL教学效果进行评估,与传统教学方法相比较。结果显示PBL教学模式能加深学生对所学知识的理解和记忆,激发学生学习兴趣,培养学生思考和解决问题的能力。在生物化学教学中采用PBL教学法是可行、有效的。     

TSH受体基因SNP与Graves病、桥本甲状腺炎和结节性甲状腺肿之间的相关性研究

目的　探讨TSH受体基因单核苷酸多态性 (SNP)与甲状腺疾病〔包括Graves病 (GD) ,结节性甲状腺肿 ,桥本甲状腺炎 (HT)〕有无相关性。方法　以 60例有甲状腺疾病家族史患者 (其中 3 0例GD、10例HT、2 0例结节性甲状腺肿患者 ) ,48例散发Graves病患者及 96名健康对照者作为研究对象 ,采用外周血白细胞抽提DNA ,设计引物 ,PCR扩增 ,对扩增产物纯化后测序。结果患者中共发现 8个多态位点 ,其中第8外显子上的多态位点 (E8A 40C)在SNP库中未见报道 ,为首次发现 ;将这些多态位点基因型变化与正常组比较 ,无明显统计学差异。结论　本研究提示汉族人TSH受体基因与这几种甲状腺疾病无相关性 ;该基因的多态位点在不同的人种间存在明显差异。     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法，对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性。91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测，阳性标本数53例，总阳性检测率58．24％；荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例，阳性检出率74．73％；两种方法联合，阳性标本数76例，阳性检出率83．52％。结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率，也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础。     

播散性浅表汗孔角化病的基因定位

目的 对收集的汉族山东籍一家系6代共254人的播散性浅表汗孔角化病家系进行基因定位,以期识别该病的致病基因。方法 收集家系成员的临床资料及血液样本,抽提外周血基因组DNA,选用382对来自常染色体的荧光标记引物,进行全基因组扫描,用Genescan和Genotyper软件进行基因分型,用Linkage软件包进行连锁分析,初步明确致病基因的区域。然后,在该区域内选择覆盖密度更高的10对引物进行精细定位,缩小致病基因的范围。结果 定位结果发现DSP致病基因与微卫星标记D12S78两点之间LOD值最大,为3.06(重组率θ=0.00)。精细定位后将DSP的致病基因定位于标记物D12S326和D12S79之间约38.5cM区域内。结论 DSP的致病基因位于染色体12q21.2~24.2。     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法.方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测.结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性.91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%.结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础.     

慢病毒载体介导的基因治疗临床研究进展

慢病毒载体具有高效、安全以及可感染非分裂细胞的优点,是一种基因治疗的重要载体。慢病毒载体介导的基因治疗已获得重大进展并已逐渐进入临床试验阶段,在对多项重要疾病的治疗中获得了显著的疗效,有望成为今后临床治疗的新手段。     

CRISPR/Cas9在基因治疗中的应用研究进展

常间回文重复序列丛集/常间回文重复序列丛集关联蛋白9（clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR）/（CRISPR-associatedproteins9,Cas9）改造的第3代人工核酸内切酶,因其简单、高效等优点,已成为一种热门的基因编辑工具。近年来一些研究成功应用CRISPR/Cas9系统在体内外进行相关疾病基因的靶向修饰,为基因编辑技术在临床的应用奠定了基础,但其脱靶效应、导入方式、编辑效率等仍需改进。本文将对CRISPR/Cas9在基因治疗中的应用进展作一综述。