融合表达β趋化因子受体5NH2端膜外第一襻及其特异抗体F(ab′)2的制备

目的：研究β趋化因子受体５（ＣＣＲ５）ＮＨ２端膜外第一襻结构域的功能及其特异抗体Ｆ（ａｂ′）２的制备。方法：计算机分析趋化因子超基因家族,定位超基因家族中同源顺序最低的结构域ＮＨ２端膜外结构域,ＰＣＲ扩增出该结构域１１４个核苷酸序列。构建融合表达载体ｐＧＥＸ－ＩＮ／ＮＲ５,经测序鉴定正确后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达,经纯化后免疫新西兰兔。蛋白Ａ亲和层析和胰蛋白酶消化ＩｇＧ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－１２柱层析制备Ｆ（ａｂ′）２。结果：经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＡＸ分析证明得到抗ＣＣＲ５ＮＨ２端的特异性抗体。结论：本方法为一简捷快速的特定功能结构域抗体Ｆ（ａｂ′）２制备方法,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。     

复合金标法同步检测HBsAg 、抗-HBc的研究

目的：建立一种快速，简便，敏感的检测乙型肝炎患者血清指标的方法。方法：以胶体金标记的HBsAb,HBcAb为指示物，应用ELISA夹心法和竞争法，建立同步检测乙型肝炎患者血清中HBsAg，抗－HBc两项指标的胶体金免疫渗滤法。结果：检测了150例乙型肝炎患者阳性血清，与ELISA法总符合率为92．0％，检测了66例阴性血清，与ELISA的总符合率为98．48％。结论：滴金免疫法同步检测乙型肝炎2项指标是快速，简便的诊断方法。     

抗生物素蛋白——生物素系统在免疫检测技术中的应用

抗生物素蛋白(Avidin)是对生物素(Bi-otin)有极强亲和性的一种糖蛋白。近几年,国外文献屡有报道将Avidin-Biotin系统引入酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中,改善了这些检测方法的稳定性和特异性,大大提高了灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新的途径,受到国内外免疫工作者     

抗生物素蛋白——生物素系统在免疫学中的应用

抗生物素蛋白(Avidin)是与生物素(Biotin)有极强亲和性的一种糖蛋白。自七十年代末起,抗生物素蛋白—生物素系统(ABS)开始引入酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中,改善了这些方法的稳定性和特异性,大大提高了方法的灵敏度,为微量抗原和抗体的检测开辟了新途径,日益受到国内外免疫学工作者的普遍重视。抗生物素蛋白是由鸡、鸟、蜥蜴等动物输卵管中分泌的一种硷性糖蛋白,鸡蛋中含量比较丰富,占总蛋白的0.05%。早在1927年,Boas用生鸡蛋清饲养大白鼠,结果引起了大鼠皮炎。1936年,Kogl从鸡蛋黄中分离出一种小分子物质,因能促进培养液中酵母菌的生长,故取名为酵母菌生长因子。1939年,Gyngy证明这种因子能治疗喂饲蛋清引起的大鼠皮炎,又将其改名为     

乙型肝炎前S1蛋白的融合表达

研究发现 ,肝炎病毒前 S1和前 S2蛋白与 HBV的复制密切相关 ,而前 S1蛋白较前 S2蛋白在 HBV的致病机制上可能起着更为重要的作用。现在越来越多的医院将检测前 S1蛋白做为 HBV复制的指标和判断 HBV活动性的一个重要依据。我国是肝炎高发区 ,HBVs Ag携带者为 1 .2亿以上 (全世界 3亿 ) ,为提高对 HBV的诊断、治疗和预防水平 ,我们克隆并对前 S1蛋白 1 2 9个氨基酸进行了融合表达、纯化和实验应用。现将实验结果报道如下。1　材料和方法1 .1　材料　 HBV由上海长海医院杜风鸣教授提供。PCR kit、限制性内切酶 ,T4DNA连接酶购自…     

乙肝两对半指标一孔检测法

目的 :建立方便的乙肝指标检测法。方法 :将乙肝五项指标集中在一个大孔中 ,通过一次加样得到五项结果。结果 :用本方法对 196份血清进行检测 ,并和科华试剂公司产品比较 ,符合率为 92 .3%～ 97.4% ;对 5 76份血清检测并和上海传染病医院试剂比较 ,符合率为 93.1%～ 96 .5 % ,P >0 .0 5。结论 :对大批血清检测比较 ,本法和其它常规试剂结果相近。     

人天然及重组IFN-γ免疫-PCR方法的建立及其敏感性

人天然及重组ＩＦＮ－γ免疫－ＰＣＲ方法的建立及其敏感性额尔敦方建华郭美香刘士山程振球本文通过生物素标记抗ＩＦＮ－γ单抗－链亲和素－生物素标记ＤＮＡ连接方法建立了ＩＦＮ－γ免疫ＰＣＲ方法。用１００μｌ兔抗ＩＦＮ－γＩｇＧ２０μｇ／ｍｌ包被液包被酶联板，...     

链霉亲和素的特性及其应用(文献综述)

链霉亲和素(SA)是streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。在检测SEA的ELISA中,SA法灵敏度是AV法的16倍。免疫组化法中,SA的背景显色明显低于AV法,检测HPV的DNA分子杂交试验,SA生物素法阳性率为37%,而~15S法只有30%。SA应用于TRFIA中,使检测AFP的灵敏度达到0.2ng/ml。