榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELK1及其靶基因的影响

目的观察中药榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELK1及其靶基因的影响，以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，双荧光素酶报告系统检测药物对转录因子ELK1的影响，Western Blot检测磷酸化ELK1及其靶基因c-fos表达。结果榄香烯乳能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，其半数生长抑制剂量为80．6μg／mL；榄香烯乳处理组荧光素酶活性下降，磷酸化的ELK1及其靶基因c—fos的表达均下调。结论榄香烯乳可能通过下调转录因子ELK1的磷酸化水平，抑制c—fos的表达，从而抑制人宫颈癌Hela细胞的生长。     

阿魏菇粗提物对稳定转染OLC1基因肺癌H1299细胞的抗增殖作用

<正>阿魏菇(Pleurotas sapidus)是新疆特有的一种食用真菌,含有丰富的蛋白质、碳水化合物、多种维生素、矿物质、皂甙、有机酸、生物碱、挥发油、三萜或甾醇等成分[1,2],对S180荷瘤鼠肿瘤生长有明显的抵制作用[3]。阿魏菇粗提物对体     

检测T-bet表达活性的荧光素酶报告基因质粒的构建和鉴定

目的 构建一个能应用于T-bet转录活性研究和大规模筛选的报告基因质粒.方法 以IFN-γ基因的CNS-22 T box结合位点序列为基础,人工合成顺式元件DNA(TbRE),重组连接到报告基因载体pLUC-MCS中.经测序验证后,转染293T细胞检测报告基因对T-bet的响应,并通过电泳迁移率检测(EMSA)证实T-bet与TbRE元件的特异结合.结果 成功构建了TbRE-LUC报告基因质粒.经荧光素酶活性检测证实外源表达的T-bet对报告基因的表达可以有20倍左右的激活,并且存在剂量效应,T-bet的表达量与报告基因的表达水平呈正相关.经电泳迁移率检测验证,T-bet可以与TbRE顺式反应元件特异性结合.结论 成功构建了T-bet转录活性相关的报告基因质粒TbRE-Luc,该报告基因系统反应灵敏,特异性强,可用于大规模筛选T-bet转录调控相关基因.     

10％甲醛酒精治疗三叉神经痛的疗效观察

三叉神经痛，又称痛性抽搐，是以面部三叉神经分布区周期性发作，阵发性剧烈疼痛为特征的神经系统疾病。现代医学对本病诊断是据其疼痛部位、性质、发作次数、时间及诱因等，在排除颅脑占位性病变之后，其诊断并不困难。就其发病学说而言，有诸如病毒感染学说、病灶学说、缺血学说、颈神经学说、遗传学说、变态反应学说等。其治疗多针对病因进行，辅以止痛，现将我院20年来收治的患者总结报告如下。     

新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探

背景与目的 RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一.作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知.本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制.方法 应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响.结果 RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路.结论 RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用.     

针对药靶基因PDCD10和MST4抑制剂体外筛选方法的建立及化合物的筛选

目的:以人程序性细胞死亡分子10(homo sapiens programmed cell death 10, PDCD10)和Ste20激酶家族成员MST4(Mst3 and SOK1-related kinase)为靶标,建立体外小分子抑制剂筛选方法?方法:将PDCD10和MST4的开放读码框插入到原核表达载体pGEX4T-2,采用亲和层析纯化法纯化重组人GST-PDCD10和GST-MST4蛋白并通过Western blot进行鉴定?利用ELISA方法对重组蛋白进行活性检测?利用该ELISA方法对825个小分子化合物进行筛选,并通过其对Elk1通路的作用进行验证?结果:成功建立了针对药靶基因PDCD10和MST4抑制剂的体外筛选方法,筛选得到1个对PDCD10和MST4活性有抑制作用的化合物?结论:该方法具有较好的平行性和可重复性?筛选得到的化合物可以抑制PDCD10和MST4对Elk1通路的活化作用?     

PIK31P1与其新剪切体PIK31P1-v1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡

目的：发现和克隆人类基因PIK3IP1的新变异体并鉴定其功能，研究其对细胞活力的影响和亚细胞定位，分析PIK31P1在细胞系中的表达情况。方法：利用GenBank中的数据，从人的混合组织cDNA中通过PCR克隆PIK31P1和它的新剪切体PIK31P1-v1，运用生物信息学分析其结构特性。经萤光素酶活性检测、细胞形态观察和流式细胞检测研究PIK31P1和PIK3IPI-v1对细胞存活力的影响，使用荧光显微镜观察其亚细胞定位。最后通过RTPCR分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况。结果：获得PIK3IP1和新剪切体PIK3IP1-v1的真核表达质粒和融合绿色荧光蛋白表达质粒。生物信息学分析显示，PIK3IP1和PIK31PI-v1均有信号肽并包含跨膜结构域，但后者胞外缺失一个Kringle结构域。功能分析发现，PIK31P1和PIK3IP1-v1均可诱导细胞凋亡。荧光显微观察证实，PIK3IP1的两种剪切体均定位于细胞膜。RT—PCR证明PIK3IP1在多种细胞中转录水平较低。结论：新剪切体PIK3IP1-v1和PIK3IP1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡，而且在多种细胞中低水平转录。     

异亚丙基莽草酸抗炎作用机制研究

目的观察异亚丙基莽草酸（ISA）对人宫颈癌Hela细胞转录因子STAT1、STAT3、NF-κ B表达作用的影响，探讨其抗炎作用机制。方法用MTT法体外检测ISA不同浓度对Hela细胞生长的抑制作用，采用双荧光素酶报告系统检测不同浓度药物对转录因子STAT1、STAT3、NF-κ B表达活性的影响。结果ISA对人宫颈癌Hela细胞的生长没有明显的抑制作用；ISA处理组NF-κ B-luc荧光素酶活性下降，而GAS-luc、STAT3-luc荧光素酶活性无明显改变。结论ISA可能通过下调转录因子NF-κ B的活性，抑制炎症因子的表达，对炎症反应起到抑制作用。     

PIK3IP1与其新剪切体PIK3IP1-v1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡

目的:发现和克隆人类基因PIK3IP1的新变异体并鉴定其功能,研究其对细胞活力的影响和亚细胞定位,分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况.方法:利用GenBank中的数据,从人的混合组织cDNA中通过PCR克隆PIK3IP1和它的新剪切体PIK3IP1-v1,运用生物信息学分析其结构特性.经萤光素酶活性检测、细胞形态观察和流式细胞检测研究PIK3IP1和PIK31P1-v1对细胞存活力的影响,使用荧光显微镜观察其亚细胞定位.最后通过RT-PCR分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况.结果:获得PIK3IP1和新剪切体PIK3IP1-v1的真核表达质粒和融合绿色荧光蛋白表达质粒.生物信息学分析显示,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均有信号肽并包含跨膜结构域,但后者胞外缺失一个Kringle结构域.功能分析发现,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均可诱导细胞凋亡.荧光显微观察证实,PIK3IP1的两种剪切体均定位于细胞膜.RT-PCR证明PIK3IP1在多种细胞中转录水平较低.结论:新剪切体PIK3IP1-v1和PIK3IP1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡,而且在多种细胞中低水平转录.