寨卡病毒感染人肝癌细胞HepG2后外泌体中差异miRNA分析

目的探索人肝癌细胞HepG2感染寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)后的外泌体miRNA的表达差异, 对其靶基因进行预测、分析。方法以感染复数0.5的ZIKV(ZJ03株)感染HepG2, 以超速离心法提取、纯化感染2 d与未感染细胞的外泌体(Exo-ZIKV与Exo-NC)。以透射电镜观察外泌体形态, 纳米粒径分析检测外泌体粒径分布, Western blot检测外泌体标志蛋白质等方法鉴定。提取纯化外泌体小RNA, 进行miRNA测序与分析, 对部分差异表达miRNA采用实时定量PCR验证。生物信息方法分析差异miRNA靶基因。结果在透射电镜下呈杯托状双层膜小囊泡结构;粒径大小分布几乎一致但Exo-ZIKV浓度(5.24×108颗粒/ml )较Exo-NC(3.06×108 paritcle/ml)增多。Western blot检测出Hsp70、CD63和CD9蛋白表达, 测序分析显示共20个差异表达miRNA, 其中12个miRNA表达上调8个miRNA表达下调, 上调miRNA多与抗病毒通路相关, 差异表达miRNA对应的靶基因主要富集在嘧啶与嘌呤代谢等途径中。结论 ZI...     

日本血吸虫纯净活虫卵制备方法的改进

为改进日本血吸虫无菌活虫卵的制备方法，将感染血吸虫尾蚴38～45d的家兔剖杀，于无菌条件下摘取肝脏，匀浆，以360目分样筛过筛，截留成熟及未成熟虫卵，用1．2％生理盐水反复洗涤数次后收集虫卵，置0.25％胰蛋白酶消化液中消化2h，当混杂组织被消化成单个细胞后，再用360目分样筛过滤去除杂质细胞，用含100μl／ml氨苄青霉素与硫酸链霉素双抗的Earle’s平衡盐溶液反复洗涤数次，获得大量纯净、活性高达（95.1-6.4）％的无菌虫卵。本法收集虫卵工作效率较高。     

加味菊花承气汤治疗天行赤眼

加味菊花承气汤治疗天行赤眼王衍海山东省肥城市安临站镇卫生院（２７１６０３）主题词％加味菊花承气汤／治疗应用天行赤眼／中药疗法天行赤眼亦称时行火眼，俗称红眼，系风热毒邪、时行疫气所致，常致暴发流行。轻者眼睑及白睛红赤浮肿，痛痒交作，怕热羞明，眵泪粘稠，...     

2020年冬季青岛肺炎患儿人鼻病毒毒株的分离与鉴定

目的:青岛地区2020年儿童肺炎住院患者人鼻病毒(human rhinovims,HRV)的分离与鉴定,为儿童肺炎的预防提供科学数据。方法:收集2020年儿童肺炎住院患者的咽拭子样本,共计98份。应用荧光定量RT-PCR方法进行常见呼吸道病毒筛查,鉴定出HRV阳性的样本接种于H1-HeLa细胞,观察细胞病变。荧光定量R...     

《内经》对对中风“偏枯”的论治

对《内经》中风“偏枯”的认识进行了探讨。在发病机制上,《内经》对中风有中外风立论的一面,同时强调过食肥甘,心胃内虚,本气不足,及情志失调,也是中风发病的重要因素。论述对中风治疗“益气活血通络法”治疗中风危重证的“豁痰开窍启闭法”,“益气回阳固脱法”的意义及方药运用。     

BSL-2实验室开展SARS-CoV-2核酸检测过程中的生物安全管理

目的:总结生物安全二级（bio-safety level 2,BSL-2）实验室开展新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）核酸检测过程中的生物安全管理经验与效果。方法:检测样本来源于2020年2月21日到2020年11月5日送...     

卡托普利致干咳5例临床分析

卡托普利口服有效的血管紧张素转化酶抑制,对多种类型高血压均有明显降压作用,并能改善充血性心力衰竭患者的心脏功能。但在其近几年的患者应用中,出现了较为剧烈咳嗽症状。笔者在近期患者用药调查中发现该药有此种不良反应的高血压5例,现报告如下。     

指环病毒7型、8型与10型实时荧光定量PCR检测体系的建立

目的:建立指环病毒7型(TTV7)、8型(TTV8)、10型(TTV10)实时荧光定量PCR检测体系并进行临床验证。方法:本研究根据GenBank已发布的TTV7、TTV8、TTV10基因序列设计特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-TTV7、pMD19-T-TTV8、pMD19-T-TTV10,以其作为阳性标准品建...     

日本血吸虫消减雌性成虫cDNA文库的建立及其特异表达基因的筛选

目的 筛选雌性日本血吸虫特异表达基因。方法 感染日本血吸虫6周的家兔,用静脉灌注法收集成虫,经核糖核酸固定液固定,分别提取雌、雄成虫总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为cDNA。用抑制性消减杂交技术(SSH)构建雌、雄成虫正向消减(雌虫消减雄虫)及反向消减(雄虫消减雌虫)cDNA文库。用斑点杂交法筛选差异表达基因,挑选目标基因片段(与正向消减探针杂交的信号明显高于与反向消减探针杂交信号的克隆)进行测序、同源性搜索及基因功能预测分析。以日本血吸虫肌动蛋白(actin)基因作内参照,用半定量PCR(semi-quantitative PCR)鉴定目标基因在雌、雄虫体内的表达。结果 得到正向消减及反向消减cDNA文库,斑点杂交筛选出50个雌虫特异性表达的克隆,经测序得到42个表达序列标签(EST),其中,有17个基因(占40.5%)与已知日本血吸虫卵壳蛋白基因高度同源;17个基因(占40.5%)与日本血吸虫未知基因高度同源、且有一小片段与卵壳蛋白基因高度同源;有8个基因(占19.0%)与日本血吸虫其他未知基因高度同源。半定量PCR结果,6个基因在雌虫体内的表达水平明显高于雄虫,分别与GenBank的血吸虫卵壳蛋白基因AY222885、AY222895、AB017097、AF519182、M32281及血吸虫其他基因AY813556高度同源。结论 构建了雌、雄成虫正向消减及反向消减cDNA文库。用SSH可筛选日本血吸虫雌性特异性表达基因。     

病原微生物实验室生物安全和质量管理的关系探讨

建国近60年来,虽然我国传染病防治取得了巨大成就,但传染病的威胁依然存在。除了艾滋病、乙型病毒性肝炎和结核病,近年来我国还面临着新发、突发传染病以及多发、常见传染病暴发、大流行的威胁,新发、突发传染病不断出现,严重威胁我国社会稳定和经济发展。这就对从事疾病预防与控制相关的实验研究和教学工作的病原微生物实验室提出了更