微小隐孢子虫20K亲环蛋白基因克隆及分析

目的 克隆微小隐孢子虫(Cp)南京株(NJ)的20K亲环蛋白(CyP)基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析.方法 采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据微小隐孢子虫Iowa Ⅱ株20K CyP基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增20K CyP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将阳性克隆重组质粒进行菌落PCR及双酶切鉴定;应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因与其他虫株核苷酸和氨基酸序列差异,并分析该基因蛋白结构域.结果 巢式PCR扩增得到特异的20K CyP基因,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-20K CyP重组质粒;测序结果显示,微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因全长519 bp,编码173个氨基酸,该基因已登录GenBank,登录号为JQ284431;氨基酸序列分析表明,微小隐孢子虫NJ株与Iowa Ⅱ株20K CyP基因编码的氨基酸序列具有100％同源性;对20K Cyp基因进行蛋白结构域分析,显示该基因序列所编码的蛋白具有特异性类亲环蛋白A、B、H的肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)区域,该区域与人的亲环蛋白A、B、H具有相似性.结论 成功克隆微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因,该基因具有高度保守性.     

微小隐孢子虫LDH基因的克隆与序列分析

目的克隆微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)南京株(NJ)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,测序并分析微小隐孢子虫NJ株CpLDH与其他隐孢子虫分离株LDH基因序列的差异。方法根据微小隐孢子虫已知LDH 基因序列设计合成2对引物, 应用巢式PCR 技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA 中扩增LDH 基因, 并将其克隆到pMD18 T 载体上,阳性克隆的重组质粒经PCR及双酶切鉴定后, 用双脱氧链终止法对重组质粒中的插入序列进行测序,应用生物信息学方法分析 CpLDH 基因序列和其他物种LDH序列的同源性。结果巢式PCR 扩增得到特异的CpLDH 基因序列,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18 T CpLDH 重组质粒。测序表明, NJ株微小隐孢子虫LDH 基因全长966 bp, 编码322个氨基酸,该基因序列已登录GenBank,登录号为 HM001298。序列分析表明, 我国微小隐孢子虫NJ株与国外分离的Iowa II株 LDH基因编码的氨基酸序列具有98%的同源性。结论成功克隆了微小隐孢子虫NJ株LDH 基因;序列测定及同源性分析表明, 微小隐孢子虫NJ株在LDH酶关键结构位点存在突变。     

微小隐孢子虫CRIP基因克隆与分析

目的 比对分析微小隐孢子虫南京(NJ)株亲环素-RNA相互作用蛋白(CRIP)与其他隐孢子虫株CRIP基因序列的差异.方法 根据GenBank微小隐孢子虫IowaⅡ株CRIP基因序列设计并合成2对引物,应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增CRIP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-CpCRIP进行PCR和双酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他种属的CRIP基因序列同源性.结果 巢式PCR扩增获得的特异性CRIP基因序列,经PCR及双酶切鉴定确为pMD18-T-CpCRIP重组质粒;测序结果显示,该序列有119 bp,微小隐孢子虫NJ株CRIP基因全长为909bp,编码302个氨基酸;测序结果和同源性分析显示,中国微小隐孢子虫NJ株CRIP基因序列与国外的微小隐孢子虫IowaⅡ株同源性为98％;该隐孢子虫NJ株CRIP基因序列获GenBank登录号JQ396883.结论 微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他微小隐孢子虫株存在基因变异.     

2004—2017年广州市女性乳腺癌发病趋势分析

摘 要：［目的］ 分析2004—2017年广州市女性乳腺癌发病特征及趋势。［方法］ 根据广州市肿瘤登记处收集的2004年1月至2017年12月女性乳腺癌发病病例资料,计算广州市女性乳腺癌粗发病率、年龄别发病率、中国人口标化率（中标率）、世界人口标化率（世标率）、平均年度变化百分比（AAPC）。［结果］ 2004—2017年广州市共报告女性乳腺癌病例28 873例,粗发病率为51.93/10万,中标率为39.97/10万,世标率为37.33/10万,城区、郊区和郊县世标率分别为48.96/10万、29.45/10万和17.54/10万,AAPC（95%CI）分别为-0.79%（-1.50%～-0.10%）、2.94%（2.00%～3.80%）和9.69%（8.10%～11.30%）,城区发病呈现下降趋势,郊区及郊县发病呈现上升趋势;三地区女性乳腺癌发病均于45～59岁年龄段达到高峰水平。［结论］ 广州市女性乳腺癌发病率较高,应加强45岁以上,尤其是郊区、郊县女性人群的筛查和宣教工作。     

微小隐孢子虫腺苷酸激酶基因克隆及分析

目的获得微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)南京(NJ)株的腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)基因的核苷酸和氨基酸序列,比对分析与其他隐孢子虫株AK基因序列的差异。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据GenBank微小隐孢子虫Iowa II株AK基因已知序列设计合成2对引物,应用巢式PCR方法从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增AK基因,并将其克隆入pMD18-T载体;对重组质粒pMD18-T-CpAK经PCR及酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株AK基因与其他虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的AK基因序列,酶切及PCR鉴定为正确的pMD18-T-CpAK重组质粒,扩增序列为903bp,含隐孢子虫AK全长基因663 bp;核苷酸序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK的同源性为99%,与微小隐孢子虫Iowa II株AK序列同源性为98%;进化树分析表明,微小隐孢子虫NJ株的AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK基因亲缘关系最近。结论成...     

基于AFM对蝙蝠葛碱诱导NB4细胞凋亡的研究

【目的】 探讨蝙蝠葛碱对急性早幼粒细胞白血病(APL) NB4细胞增殖的影响和可能的细胞凋亡机制。【方法】 采用CCK-8法检测NB4细胞的存活率,原子力显微镜(AFM)探测蝙蝠葛碱作用NB4细胞前后细胞形态及超微结构的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位和活性氧的变化。【结果】 蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞生长增殖,20~80 μmol/L 蝙蝠葛碱处理细胞24 h后,细胞存活率从(86.5±11.7)%下降到(4.1±0.5)%; 以10~40 μmol/L蝙蝠葛碱处理NB4细胞24 h,流式细胞术分析显示,细胞凋亡率和细胞内活性氧含量上升、线粒体膜电位下降。AFM 探测表明,正常NB4细胞呈圆形,细胞饱满,表面较光滑。蝙蝠葛碱处理组细胞皱缩,细胞表面的平均粗糙度增大。【结论】 蝙蝠葛碱能显著抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡。     

广州市居民癌症防治核心知识知晓情况分析

目的 了解广州市居民对癌症防治核心知识的认知情况,并探讨相关影响因素,为今后开展癌症防治健康宣教提供参考依据。方法 2020年全国肿瘤防治宣传周期间,通过广州市疾病预防控制中心的官方微信公众号,采用非随机抽样的方法,针对癌症防治核心知识,对广州市5 289名居民进行匿名问卷调查,并对调查结果进行描述性分析以及多元有序Logistic回归方法分析影响调查人群癌症防治知识知晓的因素。结果 本研究共纳入调查对象5 289人,其中男、女性分别为3 471人（65.63%）、1 818人（34.37%）;以25~44岁居多,为3 465人（65.51%）。调查对象癌症防治核心信息及知识总体知晓率为90.55%,女性（91.45%）略高于男性（90.07%）。25~44岁调查对象的知晓率最高,为92.27%,≥65岁知晓率最低,为80.00%。调查对象癌症防治知识平均成绩为14.49分。多因素分析结果显示,女性（OR=1.259）、25~44岁（OR=2.030）、45~64岁（OR=1.669）是防癌知识知晓的促进因素。结论 广州市居民对癌症防治核心知识的总体认知情况较好,应加强癌症防治宣传,尤其针对认知度较低的人群及防癌知识的科普宣传,不断提高广州市居民主动防癌的意识。     

2010—2019年广州市鼻咽癌发病率与空气污染物灰色关联分析

目的 探讨空气污染物与广州市鼻咽癌发病风险之间的关系。方法 收集广州市2010—2019年鼻咽癌发病数据与1999—2019年空气污染物(NO₂、SO₂和PM₁₀)数据，采用Joinpoint回归分析鼻咽癌发病率变化趋势。使用灰色关联分析计算灰色相对关联度、灰色绝对关联度和灰色综合关联度，并分析空气污染物诱发鼻咽癌的潜伏期。结果 广州市鼻咽癌中标率平均每年下降2.83%(AAPC=-2.83%,P<0.05),其中男性平均每年下降1.64%(AAPC=-1.64%,P=0.07),女性平均每年下降3.84%(AAPC=-3.84%,P<0.01)。广州市鼻咽癌中标率与NO₂、SO₂和PM₁₀的综合关联度分别为0.78、0.71和0.75,关联度排序为NO₂、PM₁₀、 SO₂。广州市鼻咽癌中标率与NO₂、SO₂和PM₁₀