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目的构建pCool—GST—ICAD/CAD的表达载体,并存大肠杆菌BL21(DE3)中表达具有生物学活性的CAD核酸酶?方法用PCR扩增CAD基因,将扩增产物克隆入pCool—GST—ICAD载体中构建出pCool—GST—ICAD/CAD表达载体。经酶切和电泳鉴定正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经亲和层析、离子交换层析及凝胶过滤等方法分离纯化。最后用SDS—PAGE和DNA降解实验进行鉴定。结果构建了pCool—GST—ICAD/CAD原核表达载体,重组载体转化后表达出毫克级水平的GST—ICAD/CAD蛋白复合体。经分离纯化后得到纯度很好的CAD—ICAD篮白复合体,在SDS—PAGE电泳上旱现清晰的两条蛋白带。经DNA降解实验证明纯化所得的CAD蛋白具有非特异性降解DNA的核酸酶作用。结论成功制备了具有生物学活性的CAD核酸酶,为进一步研究细胞凋亡的作用机制提供了有效的制剂。 相似文献
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目的研究积极情绪体验提升大学生积极心理品质的效果。方法采用积极情绪体验式心理健康课程对55名在校大学生进行干预,采用前后测的实验设计,验证积极情绪体验对大学生心理健康的影响。结果经过实验干预后,被试在生活满意度(t=3.035,P=0.004)、途径思维(t=3.491,P=0.001)、动力思维(t=2.154,P=0.036)以及总体希望水平(t=3.280,P=0.002)上均有显著提高,但是生活取向量表得分没有显著性提高。结论积极体验能有效改善大学生的生活满意度和希望感,提高大学生的心理健康水平。 相似文献
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生物化学PBL结合双语教学初探 总被引:1,自引:0,他引:1
生物化学是医学生一门重要的基础科目,为提高教学质量,尝试将PBL结合双语教学应用于生物化学教学,发现PBL结合双语教学可激发学生学习生物化学的兴趣、培养学生独立思考和解决问题的能力、加深学生对所学知识的理解和记忆、为临床工作打下牢固的基础.PBL结合双语教学是适合创新人才培养的较好教学模式之一,值得推广. 相似文献
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本文介绍了构建新型生物化学实验教学体系的研究与实践.新型生物化学实验教学体系具有如下特点:以创新性科研成果转变为实验教学内容;多形式教学方法与多元化教学手段相结合;课内实验与课外科研相结合;"第二课堂"教学等.经过历时7年多的实验教学的实践证明,新型实验教学体系对培养学生的创新素质、拓宽学生的知识视野和提高学生的基本技能等具有明显成效,为培养满足社会需求的医学人才迈出了成功的一步. 相似文献
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目的:研究自尊在心理安全感与生活满意度间的中介作用。方法:以随机抽样的方法,抽取广东省某大学511名大学生为被试,采用心理安全感量表、Rosenberg自尊量表、大学生生活满意度评定量表为工具进行测评。结果:中介效应检验提示,自尊可能在心理安全感与生活满意度间发挥部分中介的作用,进一步以Bootstrap法构建中介效应ab的95%置信区间,结果提示中介效应显著(95%置信区间0.083~0.145),采用结构方程模型进行拟合优度检验也证明模型拟合良好(χ2=197.192、df=24、GFI=0.916、AGFI=0.842、CFI=0.921、NFI=0.911、RMSEA=0.119、SRMR=0.050)。结论:自尊在心理安全感与生活满意度间发挥了不可或缺的中介作用,是心理安全感对生活满意度作用间的重要中介过程。 相似文献
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目的:探讨针对乙型肝炎病毒(HBV)S 基因翻译起始区反义锁核酸(LNA) 片段在HepG22.2.15 细胞内抗病毒效果及有效LNA 序列筛选. 方法:设计合成互补于HBV S 基因mRNA 翻译起始区同一位点的4条不同序列长度LNA 片段及无关对照序列,以阳离子脂质体介导,作用于HepG22.2.15 细胞,采用ELISA 法和FQPCR 法分别监测24 、48 和72 h 细胞培养上清液中HBsAg 和HBV DNA 的含量;MTT 法检测LNA 对细胞代谢的影响. 结果:4条不同序列长度(10 、15 、20 及25 个碱基)的反义LNA 对HBsAg 的表达和HBV DNA 的复制均有显著性抑制作用,72h 后的抑制率分别为46.58% 、54.38% 、72.43% 、69.92% 及27.09% 、28.77% 、34.71% 、32.68%,且抑制率随时间呈增高趋势. LNA 对细胞代谢无明显影响. 结论:针对HBV S 基因mRNA 翻译起始区的反义LNA 短序列体外能显著抑制HBV 基因的表达,且抑制作用最强的序列长度应在15-25 个碱基之间. 相似文献
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锁核酸核酶(LNAzyme)是在脱氧核酶(DNAzyme)的两个结合臂上引入1个或多个锁核酸单体构建而成的新型核酸酶[1].锁核酸(LNA)是一种新型的带双环状结构的寡核苷酸衍生物,具有稳定性好、分子杂交能力强、抗核酸酶降解能力强和无毒性等优势[2-3].LNA的引入极大增加了LNAzyme与底物RNA的杂交亲和力,增强了切割反应的酶促活力,使LNAzyme较相应的DNAzyme切割效率明显提高.针对HBV S基因的反义LNA能有效抑制病毒的表达[4].本研究针对HCV 5'非编码区(NCR)内部核糖体进入位点(IPES)设计合成LNAzyme,以HepG2.9706为对象,观察LNAzyme对病毒复制与表达的抑制作用,旨在为丙型肝炎治疗寻找专一性强、高效的新型分子药物. 相似文献
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目的:构建pCool-GST-ICAD/CAD的表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达具有生物学活性的CAD核酸酶。方法:用PCR扩增CAD核酸酶基因,将扩增产物克隆入pCool-GST-ICAD载体中构建出pCool-GST-ICAD/CAD表达质粒。经酶切和电泳鉴定正确后,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经亲和层析、离子交换层析及凝胶过滤等方法分离纯化,最后用SDS-PAGE和DNA降解实验进行鉴定。结果:构建了pCool-GST-ICAD/CAD原核表达质粒,重组载体转化后表达出毫克级水平的GST-ICAD/CAD蛋白复合体,经分离纯化后得到纯度很好的CAD/ICAD蛋白复合体,在SDS-PAGE电泳上呈现清晰的两条蛋白带,经DNA降解实验证明纯化所得的CAD蛋白具有非特异性降解DNA的核酸酶活性。结论:成功构建具有生物学活性的CAD核酸酶,有助于进一步研究细胞凋亡的作用机制。 相似文献
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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染具有明显的种属特异性,是目前知道的最小的嗜肝DNA病毒,在易感宿主细胞内易于附着、侵入和复制,并可长期持续感染。然而,HBV的易感宿主范围很狭窄,仅限于人、黑猩猩等灵长类动物,故很难在普通实验动物中建立疾病模型。因此,建立适合于HBV研究、简单易得的实验模型一直是研究者们追求的目标。在过去的20多年间,国内外学者陆续建立了多种相应的嗜肝DNA病毒模型,但尚无一个理想的模型可准确地代表人HBV感染的所有特征。自转基因技术出现以后,HBV转基因小鼠的研制使HBV研究取得了很大的发展。近年来,人-鼠嵌合模型的研究成为热点。本文将从细胞模型和动物模型两方面对模型在HBV研究中的应用作系统综述。 相似文献
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阳离子脂质体介导双靶区反义锁核酸抗病毒疗效研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨HBV S、C双靶区反义锁核酸(LNA)的抗病毒疗效.方法 设计合成互补于HBV S、C基因翻译起始区的反义LNA与脂质体混合,经尾静脉注入小鼠体内,用时间分辨免疫荧光分析法定量检测小鼠血清HBsAg;荧光PCR定量检测血清HBV DNA含量;RT-PCR检测肝组织HBV C-mRNA的表达;免疫组化法检测肝细胞HBsAg、HBcAg的表达;自动生化分析仪检测血清白蛋白(Alb)、ALT、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等指标;小鼠肝脏、肾脏进行常规病理切片并HE染色,观察反义LNA对小鼠脏器的影响.结果 血清HBsAg的表达,注射后第1、3、5天,单靶区S组的抑制率分别为23.3%、37.9%和48.7%;单靶区C组分别为21.2%、32.6%和40.7%;双靶区SC组分别为30.6%、61.2%和72.8%.血清HBV DNA,注射后第1天开始下降,双靶区SC组的DNA下降最明显,其第1、3、5天分别下降了18.5%、36.1%和52.9%.5 d后,单靶区S组、单靶区C组和双靶区SC组小鼠肝细胞HBsAg、HBcAg的表达显著低于对照组.小鼠肝肾功能及组织学未见异常.结论 HBV S、C双靶区反义LNA对HBV转基因鼠抗病毒有显著作用,且抑制作用优于单靶区反义LNA. 相似文献