人乳头瘤病毒基因分型方法的建立和应用

目的 建立一种简便快捷、灵敏度高、经济实用的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的低密度基因芯片技术,并对该方法进行评价.方法 用低密度基因芯片技术对355例疑似HPV感染女患者检测HPV并分型;用杂交捕获Ⅱ代(HCⅡ)法进行评价.并用该法对珠江三角洲地区的730例标本进行HPV分型检测.结果 355例疑似样本中,低密度基因芯片技术和HCⅡ法分别检出211例(59.4%)和222例(62.5%)阳性标本,符合率达94.1%(334/355).低密度基因芯片技术共检测出15种常见高危型和5种低危型,其中16、52、58、56型检出率较高.结论 低密度基因芯片技术能具体分型和检测混合感染,HPV检测与细胞学检测结合.对宫颈癌筛查有重要意义.     

消化道症状儿童白细胞介素-1基因簇多态性与幽门螺杆菌感染的研究

目的 分析探讨儿童白细胞介素-1(IL-1)基因簇多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染间的相关性.方法 随机选取128例消化道疾病患儿的胃黏膜标本.IL-1B-31,IL-18-511 SNP位点多态性使用实时定量聚合酶链(real-time PCR) 双色荧光探针法检测,IL-IRN的可变重复序列使用传统PCR方法检测.Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用Real-time PCR检测,用PCR扩增另-高毒力基因cagA羧基端EPIYA基因序列所在区,然后测序确定其亚型.结果 所研究的患儿中IL-1B-31T与IL-1B-511C完全连锁.未检测到H.pylori及其高毒力亚型感染与IL-1-511/-31SNP及IL-1RN基因多态性之间的相关性.结论 IL-1基因簇多态性不是广州地区儿童H.pylori感染的独立影响因素,它可能与其他因素共同影响着儿童H.pylori的感染.     

低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型

 [目的]利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒（HPV）进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法.[方法]利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型.[结果]被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别.其中单型感染51例（89%）,混合感染6例（11%）,16,31,18,58型检出率较高.[结论]低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值.     

食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测

目的利用荧光定量PCR技术，建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒，研究其灵敏度、特异性，并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中，8株副溶血弧菌结果均为阳性，而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性；纯菌条件下定量检测低限10cfu／ml；对模拟样本直接进行，检测低限为10^3cfu／g，经培养增菌后，检测低限则达到2cfu／g。结论该方法特异性强、敏感性高，操作简便快速，检验周期仅需36h，扩增与检测在封闭单管进行，可避免常规PCR方法易污染缺陷，具有很好的推广应用前景。     

套式荧光实时RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中CRD-BP mRNA

目的　研究结直肠癌患者外周血中CRD BPmRNA的表达,探讨其作为结直肠癌标志物的可行性。方法　用套式荧光实时PCR对 64例结直肠癌患者、20例胃肠道良性疾病患者和 25例健康成人进行外周血CRD -BPmRNA的检测,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果　结直癌患者中, 28(43 8% )例检测到CRD BPmRNA表达,在良性病和健康人均无表达,两组差异显著(χ2 =26. 493,P<0. 001)。CRD -BPmRNA的表达与结直肠癌的Dukes分期有显著相关性(χ2 =8. 195,P<0. 05)。结论　在结直肠癌患者的外周血中,能够检测到CRD- BPmRNA的表达,CRD- BPmRNA可作为外周血中结直肠癌细胞的肿瘤标志物用于临床诊断。     

RNA干扰及其应用研究进展

RNA干扰(RNAi)现象是生物界的一种保守行为,能特异性地抑制同源基因表达,在基因功能研究和基因治疗上显示巨大潜力.现综述RNAi的基本原理及其应用的最新进展.     

多发性结直肠癌中抑癌基因p53的表达与突变

目的探讨抑癌基因p53与多发性结直肠癌的关系。方法实验组为同时多发性结直肠癌19个癌灶和结直肠再发癌12个癌灶,对照组为散发性结直肠癌17个癌灶。分别采用免疫组织化学抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物(ABC)方法和单链DNA构像多态性(PCRSSCP)方法对癌组织和癌旁正常组织进行p53蛋白以及p53基因第5、7、8外显子突变的检测,比较各组蛋白表达和基因突变的不同。结果在同时多发癌组、再发癌组以及对照组中p53蛋白阳性表达率分别为73.7%、75%、35.3%,3组比较差异有统计学意义(χ2=6.952,P<0.05);突变率3组分别为52.6%、41.7%、29.4%,差异均无统计学意义。癌旁正常组织均未检出突变;但蛋白表达在同时性三发性癌患者中为阳性。结论多发性结直肠癌中p53基因突变率和蛋白表达高于散发性结直肠癌。p53过度表达的结直肠癌患者要警惕多发癌的发生。     

人端粒酶逆转录酶基因siRNA表达框架的构建和体外表达研究

目的 探讨靶向小干扰RNA表达框架（SEC）对舌癌细胞内源性人端粒酶逆转录酶基因（hTERT）的特异性抑制作用。方法利用两步法PCR技术构建多条SEC，采用第5代聚酰胺-胺型树枝状高聚物（G5 PAMAM-D）纳米微球介导SEC转染Tca8113细胞，应用实时荧光定量RT-PCR技术和Western-blot等检测内源性hTERT的表达水平，并进一步筛选出最有效的小干扰RNA靶序列。结果针对不同靶位点设计的SEC干扰效果有显著差异，SEC-A的干扰效果最强，并且能以高度序列特异性方式沉默hTERT基因的表达；此外，转染次数与载体理化特性亦可影响SEC的干扰效应（P〈0．05）。结论RNA干扰效应主要取决于靶序列；G5 PAMAM-D纳米载体能够介导SEC-A高效抑制内源性hTERT基因的表达；hTERT基因有望成为舌癌基因治疗的理想靶点。     

儿童胃黏膜白细胞介素mRNA水平与幽门螺旋杆菌感染的研究

目的分析儿童胃黏膜白细胞介素(IL-1β)水平与幽门螺旋杆菌(H.pylori)及其高毒力亚型感染间的相关性。方法实时定量聚合酶链(real-time PCR)检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用real-time PCR检测,用PCR扩增另一高毒力基因cagA羧基端EPIYA基序所在区,然后测序确定其亚型。IL-1βmRNA使用PCR-荧光探针法检测,比较循环CT法分析。结果患儿中无论是低毒力还是高毒力的H.pylori感染都与胃黏膜IL-1βmRNA水平无显著相关性。结论 H.pylori对儿童胃黏膜IL-1β表达的影响作用并不明显,可能还有其他一些环境、遗传因素如IL-1基因簇多态性与H.pylori共同作用调节胃黏膜IL-1β的表达。     

微量胃黏膜IL-1β mRNA水平Real-time PCR检测方法的建立

目的建立微量IL-1βmRNA表达水平的Real-time PCR检测法。方法 20例消化道疾病患儿的胃粘膜用来做本次研究。IL-1βmRNA水平检测使用Real-time PCR荧光探针法,保守基因GAPDH做内参,采用比较循环CT法分析IL-1βmRNA的表达量。结果运用IL-1βmRNA Real-time PCR荧光探针法检测出了20例消化道疾病患儿胃粘膜IL-1βmRNA的表达量。结论成功建立了微量胃粘膜IL-1βmRNA水平Real-time PCR检测法,为IL-1β在胃肠道疾病发生发展过程中的研究提供了有力工具。