三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR与ELISA检测弓形虫的比较

目的 选取弓形虫基因组中高度保守的多拷贝基因529 bp重复序列、ITS-1序列和B1基因作为real-timePCR检测的靶基因,建立检测弓形虫的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法并且与ELISA检测方法进行比较。方法 将529 bp重复序列、B1基因、ITS-1序列的选定扩增序列进行克隆、测序构建标准品;将构建的3个标准品放在一个体系中进行扩增,进行三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR。结果 529 bp、ITS-1和B1的标准曲线的相关系数(R²)均为0.998,并且扩增效率均为96.724%,扩增片段的Tm值分别为 86.5±0.5 ℃ 、78.8±0.5 ℃、83.1±0.5 ℃;构建的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR特异性试验表明,529 bp、ITS-1和B1有特异性的溶解曲线峰值分别是86.2 ℃、78.9 ℃和83.3 ℃,阴性对照无扩增曲线;敏感性试验表明,529 bp、ITS-1和B1序列最低检出限分别为 173copies/μL、123copies/μL、和135 copies/μL;Tm值的批内、批间重复试验的变异系数均小于0.13%;ELISA检测猪弓形虫IgG抗体的阳性率41.72%,ELISA与荧光定量PCR检测核酸阳性符合率为53.44%(P＜0.01)。结论 建立弓形虫三重SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测技术具有高特异性和敏感性,可为临床弓形虫的诊断提供科学依据     

不同药物与消毒剂对免球虫卵囊孢子化的影响

目的 对比研究不同抗兔球虫药物与消毒剂对兔球虫卵囊孢子化过程的抑杀效果,为兔球虫病的防治提供参考.方法 分别选取5种抗球虫药物和消毒剂进行抑制试验,观察它们对兔球虫卵囊体外孢子化过程的影响.结果 (1)5种抗球虫药物对兔球虫卵囊孢子化抑制率大小依次为:百球清＞优求乐＞球抑＞球肠清＞肠球双效,半数效量(EC5o)大小依次为:肠球双效＞球肠清＞球抑＞优求乐＞百球清;(2)5种消毒剂对兔卵囊孢子化抑制率大小依次为:二硫化碳＞苯酚＞氨水＞三氯异氰尿酸＞碘酊,半数效量大小依次为:碘酊＞三氯异氰尿酸＞氨水＞苯酚＞二硫化碳;半数孢子化时间依次为:二硫化碳＞氨水＞苯酚＞三氯异氰尿酸＞碘酊.(3)毒力较强的几种兔球虫卵囊耐药性大小依次为:大型艾美耳球虫＞斯氏艾美耳球虫＞无残艾美耳球虫＞肠型艾美耳球虫.结论 15 mL/L百球清体外作用8h对兔球虫卵囊孢子化抑制效果最强.体积分数6％二硫化碳作用于卵囊4h,抑制兔球虫卵囊孢子化效果最好.兔球虫卵囊耐药性与虫体大小相关,较大虫体对药物敏感性高.     

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展北大核心CSCD

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole,PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane,PVM)的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。     

PCR检测螺类感染广州管圆线虫方法的建立与应用

目的建立灵敏度高和特异性强的PCR方法检测广州管圆线虫几种中间宿主的感染。方法根据广州管圆线虫大亚基rRNA基因的序列特点,设计合成特异性引物,建立广州管圆线虫PCR检测方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行验证。结果经琼脂糖凝胶电泳和DNA序列测定证实,建立的PCR检测方法具有极高的灵敏度和较好的特异性。结论初步建立的PCR检测方法可用于中间宿主——螺类携带广州管圆线虫的检测和野外疫情监测,具有良好的推广价值。     

RACE:一种研究新基因的有效方法

RACE（rapid amplificationofc DNA ends）技术是以PCR和RNA反转录为基础,通过部分已知基因序列（如EST）快速扩增cDNA的3′端或5′端未知序列区域,获得全长cDNA,研究新基因的一种有效方法。本文针对该项技术自身存在的优缺点,同时结合国内外的最新研究改进方案,对该技术作一概述。     

次睾吸虫在家鸭宿主种群中的空间分布格局研究

对在５３６６只鸭胆囊中检获的东方次睾吸虫和台湾次睾吸虫进行的统计生态学分析表明：台湾次睾吸虫的总感染率、强度和密度均高于东方次睾吸虫（Ｐ＜０．０１）。台湾次睾吸虫是家鸭次睾吸虫中的优势种。两种吸虫的分布型经两种方法计算和拟合，符合聚集分布中的负二项分布。两种次睾吸虫亲和性极小，而呈显著负关联（Ｐ＜０．０１）。相关分析表明在混合感染时，两种吸虫感染强度间的相互关系在多数范围内呈显著负相关（Ｐ＜０．０５）。     

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins, GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole, PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane, PVM) 的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。