血管生长抑制因子基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

目的;获得具有高活性的Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ表达,为进一步研究及应用奠定物质基础。方法：用ＰＣＲ法人纤维蛋白酶原ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ基因中,获得Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ｋｒｉｎｇｌｅｌ－４）基因,测序验证后,将正确的Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（Ｋ１－４）序列,插入Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统,转染昆虫细胞ｓｆ９,表达Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ。结果：获得了正确序列Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ ｃＤＮＡ     

人血管形成素cDNA克隆和序列分析

０　引言　人肿瘤的发生、转移和血管形成密不可分．近年来,已发现多种具有血管形成活性的因子,如纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）,转化生长因子（ＴＧＦ）,血管形成素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ）等．其中血管形成素是第一个肿瘤来源的具有血管形成活性蛋白,在体外可以诱导鸡胚绒毛尿囊膜及兔角膜血管形成［１］,因此可能在肿瘤发生中有重要作用．文献［２,３］报道,从人肝ｃＤＮＡ文库中获得人血管形成素的基因全长,并推导出氨基酸．我们利用ＲＴＰＣＲ从人肺癌细胞株Ａ５４９中提取总ＲＮＡ,成功克隆了人血管形成素ｃＤＮＡ,其序列…     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＵＳ－ＰＡＧＥ）显示小分子多肽的方法。方法 观察不同方法处理的样品，上样量对电流晰影响及对分子量标准（Ｍ，２５１２＝１６９４９）进行直线回归分析，结果 样品和不同处理条件未见有差异；在该实验系统条件下上样样品为每孔５～１０μｇ较佳；分子量标准直线回归系数ｒ＝－０．９６２。结论 样品处理方便，上样量少，在１６０ｇ．Ｌ＾－１Ｔ，６０ｇ．ｋｇ＾－１Ｃ较低的丙烯酰胺     

Angiostatin基因的克隆及在原核细胞中的表达

获得具有活性ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ的表达,为进一步开发应用奠定基础,方法：用ＰＣＲ方法从人纤维蛋白酶酶原基因中,获得ａｎｇｉｏｓｔａｉｎ（Ｋ１－３）的基因,用原核表达载体ｐＢＶ２２０,表达非融合ａｎｇｉｏｓｔａｉｎ（Ｋ１－３）。结果得到有抑制活性ａｎｇｉｏ－ｓｔａｉｎ（Ｋ１－３）的表达量较低。化：ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（Ｋ１－３）可在原核非融合蛋白表达载体中得到表达。     

EPO模拟肽基因4串联体的构建和表达

目的 克隆和表达EPO模拟肽基因4串联体,方法设计了特殊的基因串联方案,在人工合成EPO模拟肽全基因的基础上,将EPO模拟肽基因由单体逐步地连接成4串联体,继而将获得的正确EPO模拟肽4串联体插入PBV220表达载体诱导表达,结果 构建的EPO模拟肽基因4串联体经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同,EPO模拟肽4串联体插入PBV220载体后,重组菌经42度诱导4h,SDS－PAGE分析结果显示,该串联体得到较高水平的表达,凝胶扫描结果表明,其表达量约占菌体蛋白总量的20％。结论 EPO模拟肽基因4串联体的构建与表达均获得了成功。     

热休克蛋白CpkB对nrhTNF体外复性的促进作用

目的;探讨嗜热菌热休克蛋白ＣｐｋＢ在体外与新型重组人肿瘤坏死因子蛋白质复性的关系。方法：在原核细胞中表达并纯化ＯｐｋＢ蛋白;将ｎｒｈＴＮＦ在８ｍｏｌ／Ｌ脲中变民生,然后在不同浓度的ＣｐｋＢ存在下进行体外复性,以复性后ｎｒｈＴＮＦ的和活性检测指标进行分析。     

嗜热菌热休克蛋白基因的克隆与表达

克隆和在原核表达系统中表达超嗜热古球菌之热休克蛋白基因β亚基。方法：用ＰＣＲ技术从ＨＰＫ基因组ＤＮＡ中扩增ｃｐｋＢ基因片段，经克隆和核苷酸序列分析后再克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，升温诱导ｃｐｋＢ基因表达，利用ＣｐｋＢ蛋白的耐温特性纯化该蛋白。结果：扩增和克隆了１．６ｋｂ的ｃｐｋＢ基因，并经ＤＮＡ测序证实，实现了ｃｐｋＢ基因在原核系统ＰＬＰＲ启动子控制下的表达，建立了纯化ＣｐｋＢ蛋白的方法。结论     

胸腺素α1—硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α1（thymosin alpha1,Tα1)作为一种免疫增强剂,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因,克隆于pUC19的EcoRi和PstI位点,经测序证明序列正确后,串联为4串体（Tα1（4））,经再次确认后克隆入pThioHisA的EcoRI t PstI位点,转化大肠杆菌TOP10菌种,酶切鉴定证明正确后,经1mmol/L IPTG诱导4h,获得硫氧还蛋白与Tα1（4）的融合表达,并经Western blot分析证实,用离子交换柱层可纯化出硫氧还蛋白与Tα1（4）融合蛋白,利用3H－TdR掺入法证实,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。α     

经阴道子宫全切除术临床观察

目的探讨经阴道子宫切除术的可行性及临床应用价值。方法改良经阴道子宫切除手术步骤，对120例有子宫切除手术适应证者行经阴道子宫切除术，取同期经腹切除子宫120例作对比分析。结果阴式组较腹式维手术时间长，术中出血稍多（P〈0．05），而术后肛门排气时间、术后镇痛例数、术后住院时间阴式组少于腹式组（P〈0．01）；术后患者满意度阴式组明最高于腹式组（P〈0．01）；两者术后性生活满意度无差别。结论阴式全子宫切除术具有创伤小．术后疼痛轻．恢复快，住院日短，患者满意度高等优点，是一种安全、微创、手术效果好、副反应少的手术方式．     

胸腺素α1-硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

胸腺素α