血流切应力变化导致颈总动脉重建及其对血管平滑肌细胞凋亡和分化的影响

目的　探讨动脉血流切应力变化对动脉壁形态结构、零应力状态以及血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)凋亡和去分化的影响。方法　结扎大鼠左侧颈总动脉的部分分支，使血液全部经由枕动脉流出，造成左颈总动脉(LCA)低血流和低切应力以及对侧右颈总动脉(RCA)高血流和高切应力状态，以假手术不结扎动脉的动物为正常对照。取LCA和RCA，光镜和透射电镜观察血管壁组织形态学变化；测量血管零应力状态下的张开角；TUNNEL法进行原位细胞凋亡检测；免疫印迹法检测VSMC表型分化标志分子hl-calponin的表达。结果　术后7d，低切应力LCA的内径减小了13%左右，壁厚内径比显著增加，张开角显著减小；内皮下层明显增厚，VSMC凋亡数量显著增加，VSMC表型分化标志分子hl-calponin的表达量显著降低。结论　血流切应力显著降低会在短期内引起血管重建，提示VSMC凋亡和去分化可能是低血流和低切应力导致血管重建的早期事件之一。     

机械张应变诱导蛋白激酶B活化对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的研究机械张应变诱导蛋白激酶B活化对大鼠血管平滑肌细胞迁移能力的影响。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对大鼠血管平滑肌细胞施加牵拉幅度为15%、频率为1Hz的张应变。以Transwell和Westernblot等方法观察张应变作用下蛋白激酶B磷酸化和血管平滑肌细胞迁移能力的变化,以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组。结果与对照组相比,机械张应变增加细胞中蛋白激酶B磷酸化水平,促进血管平滑肌细胞的迁移;PI3K的特异性抑制剂Wortmannin抑制张应变诱导的蛋白激酶B的磷酸化,降低了血管平滑肌细胞迁移能力。结论机械张应变通过上调蛋白激酶B磷酸化水平促进了血管平滑肌细胞迁移,提示蛋白激酶B信号通路参与机械张应变条件下血管平滑肌细胞迁移过程的信号传导。     

细胞联合培养杯膜的孔径对血小板源性生长因子通透的影响

目的 探讨细胞联合培养杯膜的孔径对生物大分子通透的影响,解决血管细胞分子力学生物学实验的关键技术问题。方法 以杯底PET膜孔径为0.4 μm和1.0 μm的两种型号细胞联合培养杯作为研究对象,将大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）和内皮细胞（endothelial cells, ECs）分别种植于联合培养杯底PET膜的内外侧面。实验分为EC/VSMC联合培养施加低切应力组、PET膜未接种细胞静止组、PET膜单侧接种细胞静止组和PET膜双侧接种细胞静止组。ELISA检测低切应力组ECs侧和VSMCs侧培养液中血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor BB, PDGFBB）含量,Western blotting检测重组PDGF-BB（rPDGF-BB）刺激后,各组细胞内信号转导分子p-ERK1/2和p-Akt以及核骨架蛋白Lamin A的表达变化。结果 EC/VSMC联合培养施加0.5 Pa层流低切应力12 h后,0.4 μm联合培养杯VSMCs侧PDGFBB浓度显著高于ECs侧。0.4 μm和1.0 μm两种孔径的PET膜未接种细胞时,rPDGF-BB上调了隔开培养细胞的pERK1/2和p-Akt表达,并下调Lamin A表达。PET膜外侧面接种单层细胞时,rPDGF-BB上调了对侧细胞的p-ERK1/2和p-Akt表达,并下调Lamin A表达。PET膜内外侧面均接种细胞时,rPDGF-BB仅能影响0.4 μm PET膜同侧细胞的pERK1/2、p-Akt和Lamin A表达,对对侧细胞无明显作用;而1.0 μm PET膜两侧细胞的p-ERK1/2、p-Akt和Lamin A表达无显著性差异。结论 两种有孔PET材料本身均允许生物大分子的通透,而细胞接种会影响有孔PET膜对生物大分子的通透。0.4 μm孔径PET膜两侧均接种细胞时,对生物大分子的通透明显减弱,更接近于在体情况。     

丝虫性乳糜尿患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

[目的 ]研究乳糜尿现症病人和非现症病人的外周血 T-淋巴细胞亚群 (CD3+ 、 CD4+ 和 CD8+ )的变化。[方法 ]采用 SAP法检测待检人群的外周血 T-淋巴细胞亚群。 [结果 ]现症病人的 CD3+、CD4+比非现症病人及健康人对照组显著减少 ,CD8+ 显著升高 ,CD4+ / CD8+ 明显降低 (P<0 .0 0 1) ,而且 CD4+ / CD8+ 的减低与乳糜蛋白尿的轻重程度呈正相关。非现症病人与健康人对照组 CD3+ 、 CD4+ 、 CD8+ 及 CD4+ / CD8+ 均在正常范围 ,无显著差异。 [结论 ]丝虫性乳糜尿患者机体免疫系统的比例失衡 ,免疫调节机能出现异常 ,且呈抑制趋势。     

ROCK1及其相关信号分子参与张应变调控的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用。方法应用张应变加载系统对体外培养VSMCs施加牵张幅度10%、频率1.25 Hz生理性周向张应变;Brdu检测VSMCs增殖水平;Western blotting检测力学加载后VSMCs的ROCK1表达水平以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)α/βII、蛋白激酶D(protein kinase D,PKD)、胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化水平;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)检测ROCK1对VSMC增殖和PKCα/βII、PKD、ERK磷酸化的调控作用。结果 10%生理性张应变加载12、24 h显著抑制VSMCs的ROCK1表达,并显著抑制PKD和ERK的磷酸化;10%生理性张应变加载12 h显著抑制PKCα/βⅡ的磷酸化,但加载24 h PKCα/βⅡ的磷酸化与静止对照组相比无显著差异。RNAi抑制VSMCs的ROCK1表达后,VSMCs增殖水平显著降低,同时PKCα/βⅡ和PKD磷酸化水平显著降低,但ERK磷酸化无明显变化。结论 10%生理性张应变可能通过抑制ROCK1表达调控PKCα/βⅡ和PKD的磷酸化水平,从而影响VSMCs增殖,维持血管稳定性。探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络,对心血管生理和疾病病理机制研究具有一定意义。     

山东省苍山县丝虫性乳糜尿的纵向调查分析

丝虫病防治后,王培义等［１］在滕县发现丝虫性乳糜尿有增多的现象,为了进一步证明这种情况的可能性,山东省寄生虫病防治研究所于１９８５年对我县沂堂乡进行第１次调查发现,丝虫病防治后１０年内新出现的病人几乎占所有病人的一半以上［２］,而后山东省其它县以及江苏、湖南等省也有类似的报道［３～５］,为了进一步探索丝虫病防治后,丝虫性乳糜尿的流行病学特征、原有病人的归宿和临床表现等变化,我们于１９９８年对本县沂堂乡进行了第２次调查。内容和方法１　调查对象两次调查均为苍山县沂堂乡全体居民。２　调查方法２．１　首…     

Rho蛋白解离抑制因子α在高血压大鼠胸主动脉的表达

目的 研究高血压大鼠胸主动脉以及周期性张应变刺激下血管平滑肌细胞(VSMCs)的Rho蛋白解离抑制因子(RhoGDIα)的表达变化,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)信号通路对其表达的调控影响. 方法 应用实时PCR和Western blotting技术分别检测4周、12周和18周自发性高血压大鼠(SHR, n =4)和正常血压京都种鼠(WKY, n =4)胸主动脉RhoGDIα mRNA和蛋白的表达;免疫组织化学检测RhoGDIα在SHR和WKY胸主动脉的定位;Western blotting技术检测腹主动脉缩窄性高血压大鼠(ACR, n =6)胸主动脉RhoGDIα蛋白的表达;应用细胞应变加载系统对大鼠胸主动脉VSMCs施加1Hz、10%的周期性张应变,在有或无血管紧张素亚型Ⅰ(AT1)受体拮抗剂 L-158809的条件下观察周期性张应变刺激对VSMCs RhoGDIα蛋白表达的影响. 结果 4周与12周SHR和WKY胸主动脉RhoGDIα表达无显著性差异,而在18周组,SHR胸主动脉RhoGDIα表达显著高于WKY.RhoGDIα主要存在于血管中膜VSMCs.2周和4周ACR胸主动脉RhoGDIα表达较正常对照组显著上调,提示在高血压状态下的主动脉RhoGDIα的表达上调.10%周期性张应变加载抑制了VSMCs的RhoGDIα表达,加入ATI受体拮抗剂后RhoGDIα表达显著低于10%周期性张应变加载组. 结论 大鼠高血压时主动脉RhoGDIα表达上调;Ang Ⅱ信号通路在RhoGDIα表达调控中起重要作用.     

接种乙型肝炎疫苗无应答儿童复种后5年效果观察

目的评价乙型肝炎（乙肝）疫苗无应答儿童复种远期效果并比较小剂量皮内与常规剂量肌肉复种效果。方法自2000年10月开始，40名经筛检获得的无应答健康儿童随机接受3针肌肉（17人，10μg/针）或皮内（23人，2μg/针）复种，定期采血检测至复种后5年；80名应答儿童不复种，作为同期观察对照。在第5年，评价HB-sAg特异性淋巴细胞免疫水平；对抗-HBs阴转者加强1针（5μg），12-14d评价抗体回忆应答。结果仅1名皮内复种者抗-HBs未达到10IU／L；在第5年，50％的肌肉复种者仍保持着抗-HBs≥10IU／L（尽管该指标显著低于应答对照者的85％）。抗-HBs阴转者（肌肉，皮内复种和应答对照分别为8、18和11人）再加强1针后，除2名皮内复种者外，均产生了强劲的抗体回忆应答（抗-HBs滴度分别平均上升至208、105和549IU／L）；超过70％的无应答儿童外周血单个核细胞可检测到HBsAg特异性白细胞介素（IL）-2和IL-5的分泌。用抗-HBc阳转作为感染指标计算乙肝病毒人年感染率，皮内复种者为8．9％（8／89．9人年），高于应答对照者的3．6％（12／337．2人年），而肌肉复种者为4．3％（3／70、2人年），与应答对照者接近。结论无应答儿童3针肌肉复种效果虽达不到应答儿童初种的水平，但确能发挥重要的免疫保护作用。小剂量皮内复种效果不如相同针次常规剂量肌肉复种。     

尫痹片治疗类风湿性关节炎的研究

目的 :观察癇痹片治疗类风湿性关节炎(RA)的临床疗效和作用机理。方法 :观察组100例采用癇痹片治疗 ,对照组50例采用风湿马钱片治疗。另做药理实验。结果 :观察组在总有效率、治愈率、ESR复常率、RF转阴率等方面与对照组比较 ,均P<0 05(或P<0 01)。观察组总有效率为94 00 %。药理显示 :癇痹片在消炎镇痛方面作用显著 ,能提高细胞免疫功能 ,抑制病情发展。结论 :癇痹片治疗早、中期RA具有较好疗效 ,有一定的药理基础。     

活化激酶C受体1在切应力调控血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨活化激酶C受体1（receptor for actived C kinase 1, RACK1）在内皮细胞（endothelial cells, ECs）感受切应力刺激调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用及其机制。方法 应用平行平板流动腔系统,对联合培养的大鼠ECs和VSMCs施加1.5 Pa正常切应力（normal shear stress, NSS）和0.5 Pa低切应力（low shear stress,LowSS）,应用BrdU ELISA方法检测VSMCs增殖水平,对蛋白质组学研究发现的力学响应分子RACK1表达以及Akt磷酸化,应用Western blot技术进行检测。静态条件下,应用RNA干扰技术特异性抑制VSMCs的RACK1表达,检测其对细胞增殖和Akt磷酸化的作用。应用ECs与VSMCs隔开培养和联合培养模型,检测ECs对VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化水平的影响。结果 血管差异蛋白质组学的结果发现,与NSS组相比,RACK1在LowSS组血管组织的表达水平明显升高。细胞实验结果显示,LowSS诱导了与ECs联合培养的VSMCs增殖,上调VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化。静态条件下,特异性抑制VSMCs的RACK1表达后,VSMCs的增殖水平和Akt磷酸化水平均显著下降。与ECs联合培养VSMCs,其RACK1表达和Akt磷酸化水平较隔开培养组均上调。结论 VSMCs的RACK1表达受细胞接触与切应力的影响,并可能通过PI3K/Akt信号通路参与LowSS诱导的VSMCs增殖的调控。探讨VSMCs增殖功能变化及其力学生物学机制对于认识动脉粥样硬化等疾病发病机理和疾病防治有重要意义。