全自动遗传分析系统的原理及其临床应用

全自动核酸测序分析系统具有遗传信息检测和分析功能,随其应用范围增加,开始进入临床。本文介绍了该仪器的工作原理、结构、功能、操作要点以及临床医学应用。     

安徽省常规生化项目室内不精密度现状分析

目的分析安徽省常规生化项目不精密度水平,为全省临床实际工作提供大数据支持。方法收集159家临床实验室常规生化室间比对计划中值水平室内质控的相关数据,分析21项常规生化项目[白蛋白(Alb)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、淀粉酶(Amy)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总钙(Ca)、肌酸激酶(CK)、氯(Cl)、肌酐(Cr)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、葡萄糖(Glu)、钾(K)、乳酸脱氢酶(LDH)、钠(Na)、无机磷(P)、总胆红素(TB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、尿酸(UA)、尿素]的总体变异系数,根据我国卫生行业标准WS/T 403—2012评估各项目的符合情况。结果除Cl、Ca项目外,其他项目的不精密度(中位数)均低于WS/T 403—2012的标准。Cl、Ca、TP、尿素4个项目的总体符合率60%,医疗机构分组统计,各组均可见较多极值数据,其中Ca项目的符合率三级医疗机构与二级医疗机构之间差异有统计学意义(χ2=5.12,P0.05),其他项目的符合率差异均无统计学意义(P0.05)。结论安徽省常规生化项目不精密度水平基本可以满足临床需求,个别项目的检测能力需加强。     

血清胃蛋白酶原对幽门螺杆菌感染的诊断价值

目的探讨血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)及胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值(PGR)对幽门螺杆菌(HP)感染的诊断价值。方法选取进行血清HP抗体和胃蛋白酶原检测并接受尿素呼气试验检查的住院患者88例,将尿素呼气试验和HP抗体同时阳性判定为HP感染组(56例),同时阴性判定为HP非感染组(32例)。检测所有患者的血清PGⅠ、PGⅡ水平,并计算PGR。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标判断HP感染的价值。结果 HP感染组血清PGⅠ、PGⅡ水平均高于HP非感染组(P值分别为0.021、0.000),PGR低于HP非感染组(P=0.000)。男性血清PGⅠ、PGⅡ水平均高于女性(P值分别为0.002、0.008),PGR男性、女性之间差异无统计学意义(P=0.601)。ROC曲线分析结果显示,PGⅠ、PGⅡ及PGR判断HP感染的曲线下面积(AUC)分别为0.648、0.785和0.789,PGⅡ和PGR的最佳临界值分别为15.57μg/L、9.27,敏感性分别为76.79%、75.00%,特异性分别为78.13%、68.75%;PGⅡ和PGR联合检测的AUC为0.829,敏感性为92.86%,特异性为65.63%。结论 PGⅡ和PGR对判断HP感染有一定价值,二者联合检测效果更佳。     

实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达

目的 建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGS mRNA表达的方法,研究MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异,并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGS mRNA表达水平的变化.方法 用SYBR Green Ⅰ为荧光染料,以β-actin作参照,建立检测FPGS mRNA的实时荧光定量PCR方法.根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价.并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA的表达.结果 建立的标准曲线Ct值与模板浓度有良好的线性关系,FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0.996 8和0.998 7,斜率分别为-3.595和-3.740,批内CV为1.27%～2.95%,批间CV为3.82%;熔解曲线均呈单个特异峰,扩增效率相似(斜率为0.021 7);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞中FPGS mRNA相对含量分别为(3.51±0.66)和(0.16±0.01),A549亲本细胞(S)中FPGS mRNA相对含量为(1.00±0.31),差异有统计学意义(F=64.45,P＜0.01);L-(+)-MTX耐药细胞和D-(-)-MTX耐药细胞间FPGS mRNA相对含量差异有统计学意义(q=9.29,P＜0.01).白血病患者应用MTX治疗耐药后,FPGS mRNA表达水平为(0.35±0.04),用药前为(1.00±0.44),差异有统计学意义(t=8.83,P＜0.01).结论 建立的实时荧光定量PCR检测FPGS mRNA的方法重复性好、特异度高,可用于FPGSmRNA含量分析.MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGS mRNA表达发生了变化,MTX 2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用.     

柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物

目的 建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链( MTXPG)的方法.方法 采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈( V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样...     

高效毛细管电泳仪在临床微生物学检验中的应用

高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE）技术是一种新型高效液相分离技术，具有快速、高效、高灵敏度、重复性好、易定量、非同位素操作、可实时监测及全自动化等优点，广泛应用于化学、生物学、医学、环境卫生等各个方面，尤其是用于生物医学，如甄别人类遗传性基因缺陷、对基因进行定量分析、微生物学和病毒学分析、法医分析、基因治疗等。目前，在临床检验中HPCE主要用于检测糖、蛋白质、核酸等。     

临床化学质量控制方法的选择和设计

使用设计的质量控制选择格子来帮助临床化学实验室的检验人员选择和设计质量控制方法。格子是一个3×3分级表，其确定了与具有不同过程能力和测定过程稳定性相应的控制测定值个数和控制规则。在过程的能力基础上选择格子的行，在过程稳定性基础上选择格子列。格子相交的小方块即是具有之当误差检出和假失控概率的控制方法。为了提供过程能力的定量指数，可计算医学上重要系统误差的大小；以及从经验或从质控记录中定量地估计医学上重要误差的发生率（f）。建立了单规则固定限方法，其能在Levey－Jennings控制图上执行；以及在Westgard多规则控制方法上改编多规则控制方法。     

亲和毛细管电泳法测定甲氨蝶呤对映体与二氢叶酸还原酶反应动力学参数

目的 建立一种测定氨甲蝶呤(MTX)两种对映体与二氢叶酸还原酶(DHFR)结合反应动力学参数的方法.方法 建立DHFR反应体系,采取亲和毛细管电泳技术,以含0.2%Brij-35的pH 9.50的50mmol/L硼砂为电泳缓冲液,检测波长为254 nm,在25 kV的电压下,分离反应体系中各组分.观察酶反应前后的电泳图谱并根据反应生成物峰面积的变化计算相关反应动力学参数,将不同浓度的氨甲蝶呤两种对映体L-(+)-MTX和D-(-)-MTX分别作用于所建立的DHFR反应体系,测定两种对映体的半数抑制浓度(IC50).结果 建立了亲和毛细管电泳法对氨甲蝶呤对映体与DHFR反应动力学参数的测定方法,在30 min内实现DHFR反应体系中反应物和生成物的分离,并根据反应生成物峰面积的变化计算得出D-(-)-MTX的IC50为3.17×10-7mol/L,L-(+)-MTX的IC50为2.48×10-8mol/L,两者相差13倍左右.结论 亲和毛细管电泳的方法可以快速准确地用于DHFR反应动力学参数的研究,通过检测MTX对映体对DHFR的抑制能力的差异,首次发现MTX对映体对DHFR有立体选择性作用.     

荧光定量PCR检测Rh阴性孕妇外周血浆游离DNA中胎儿RhD血型

目的 探讨荧光定量PCR(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术对Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创性产前诊断胎儿RhD血型的可行性.方法 选取78份妊娠11～40周、B超确诊为单胎的Rh阴性孕妇血浆.采用9个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)多态性位点及Y染色体性别决定区基因(sex-determining region Y chromosome,SRY)确定胎儿DNA的存在;运用FQ-PCR技术对血浆中游离胎儿DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4定量分析,以确定胎儿RhD血型的基因型;其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析,回顾性评价胎儿基因定型结果的准确性.结果 78份标本中,41份检测到SRY基因,平均浓度为(214.7±120.9)拷贝/ml,产后证实皆为男性.70份FQ-PCR基因定型结果与血清学结果相符,另有5份确定为假阳性,3份基因定型结果不可确定,检测结果总符合率为90%(70/78).5份假阳性标本通过检测RHD1227A等位基因鉴定了4份RhD放散型,FQ-PCR最终结果准确率达到95%(74/78).结论应用FQ-PCR方法进行非创性胎儿RhD血型检测可用于新生儿溶血病的预防和诊断.     

氨甲蝶呤获得性耐药和DNA甲基化的相关性研究

目的 研究氨甲蝶呤(MTX)获得性耐药与DNA甲基化的相关性.方法 采用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法 诱导细胞发生MTX耐药.通过高效毛细管法检测非小细胞肺癌A549细胞和非小细胞肺癌A549/MTX细胞内整体DNA甲基化水平.结果 MTT法分析显示A549细胞对MTX发生耐药.A549细胞发生MTX耐药时,其甲基化水平明显降低,且随着MTX耐药浓度增加,耐药细胞株DNA甲基化程度依次降低.A549/MTX细胞和A549细胞整体DNA甲基化水平差异有统计学意义.结论 MTX获得性耐药引起细胞内整体DNA甲基化水平降低,MTX获得性耐药机制可能与DNA甲基化相关.