深圳地区结核分枝杆菌耐药及广泛耐药分离株的分子特征

目的 研究2007-2008年深圳地区MTB耐药和广泛耐药分离株的分子特征.方法 参照世界卫生组织和同际防痨与肺部疾病联盟的标准,使用改良罗氏药敏培养基,用1%比例法药敏试验,筛选出针对异烟肼、利福平、链霉素、氧氟沙星和卡那霉素5种药物耐药或敏感的临床分离株,通过PCR扩增筛选菌株的rpoB、katG、rpsL、rrs~((1))、gyrA/B和rrs~((2))基因的相关序列,运用DNAStar和Blastn进行序列分析.结果 筛选出实验菌株123株,其中耐药株73株,全敏感株50株.异烟肼耐药株katG基因突变率为44/52,突变位点全部为S315T或S315N.利福平耐药株rpoB基因突变率为44/47,突变位点主要集中在S531L(30/44)、H526D(9/44)和H526R(1/44).链霉素耐药株以rpsl基因突变为主,突变位点为K43R(19/28)和KS8Q(6/28);rrs(1)基因突变较少见,仪有491C→T(2/28)和513A→C(1/28),2个基因突变率合计为28/41.氧氟沙星耐药株突变率为11/11,以gyrA基因突变为主,突变位点包括D94A(2/11)、S91P(4/11)和A90V(3/11),3个突变位点总突变率为9/11;     

血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白水平与糖尿病胰岛素抵抗的相关性分析

目的探讨血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)水平与糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法随机选取2019年3月45例糖尿病患者及同期体检健康者26例作为研究对象,分别作为试验组和对照组,检测两组受检者空腹FABP4水平、空腹血糖(GLU)、空腹血糖胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感性。结果试验组血清A-FABP水平[(12.97±4.96)μg/L]显著高于对照组[(10.55±4.64)μg/L],差异有统计学意义(P0.05);相关性分析显示,试验组FABP4水平与GLU、INS、HOMA-IR、胰岛β细胞功能指数和胰岛素敏感性均无相关性(P0.05)。结论糖尿病患者FABP4水平显著高于健康人群,但是与糖尿病胰岛素抵抗的相关性有待研究。     

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的 研究乙肝血清学标志物（HBV-M）结果与HBV-DNA水平的关系，分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1102例HBV-DNA阳性。其中883例1．3．5阳性（俗称“大三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为96．15％；722例1．4．5阳性（俗称“小三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为24．38％；138例1．5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38．41％；22例1．3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90．91％；11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36．36％。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法，能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。     

环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的初步观察

目的建立1种用于结核分枝杆菌快速检测的LAMP技术平台,用于结核分枝杆菌的鉴定。方法使用了11株标准菌株,建立了一套用于结核分枝杆菌快速检测的平台,对灵敏度和特异性进行优化,随后使用47株临床分离株,和13株食源性致病菌对建立的方法进行了验证。结果经过标准菌株建立并优化检测平台,经过优化的LAMP反应体系检出限为1pg的模板DNA,在使用47株临床分离株,和13株食源性致病菌对方法进行验证,发现LAMP特异性为97.4%。结论通过这项研究发现LAMP应用于结核分枝杆菌的快速检测,具有检出浓度低、特异性强和检测周期短的优点。     

依据CNAS-GL039在Bio-rad CFX96荧光定量PCR仪进行SARS-CoV-2核酸检测的性能验证

目的 对本实验室实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SARS-CoV-2进行方法学评价,建立本实验室分子诊断定性检验程序性能验证的标准化方法,为日后性能验证工作提供参考.方法 依据CNAS-GL039和厂家说明对SARS-CoV-2核酸检测进行符合率、精密度、检测限、交叉反应和抗干扰能力的验证,实验结果在厂家声称的范围内或是满足本实验室的执行标准为性能验证通过.结果 国家临检中心室间质评10个质控样本的定性检测结果均符合,符合率验证通过;批内精密度变异系数(CV)为ORF1ab基因:1.11％、N基因:0.95％;批间精密度变异系数(CV)为ORF1ab基因:0.89％、N基因:1.99％、阴性内参:0.54％;变异系数满足厂家声明的≤5％;精密度验证通过;定值质控品S1(2.01×103 copies/mL)稀释至厂家声明的检测限500 copies/mL;靶基因检出率100％,检测限符合要求;病原体交叉反应检测结果均为阴性,干扰物质检测结果均为弱阳性,分析特异性符合要求.结论 SARS-CoV-2核酸检测的符合率、精密度、检测限、交叉反应和抗干扰能力的验证,结果均符合检测要求.     

逆转录-套式PCR检测汉坦病毒感染的实验研究

目的：探讨逆转录一套式聚合酶链反应（RT—nested—PCR）检测汉坦病毒（Hantavirus，HV）感染的准确性和敏感性。方法：用RT—nested—PCR和直接免疫荧光法（direct immunofluorescence，FA）分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的鼠类中HV的感染情况。结果：在76份特异性总抗体阳性的鼠肺标本中，用RT—nested—PCR检出61份抗原阳性，而FA仅检出47份阳性。结论：RT—nested—PCR是一种比较准确的检测汉坦病毒感染的方法，其敏感性高于FA。