布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达

目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组，得Omp25基因片段，T—A克隆后测定核苷酸序列，将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，经双酶切和DNA测序测定，将构建的重组质粒转化大肠杆菌（E．coli HB101，TOP10），经IPTG诱导后，用SDS—PAGE检测重组蛋白rOrap25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确，成功构建了重组质粒DGEX-4T-1-Omp25，经IPTG诱导，特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段，并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。     

广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况.方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析.结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%.结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs.     

广州地区非发酵革兰阴性杆菌的耐药性监测

目的：了解广州地区医院感染常见非发酵革兰阴性杆菌的分布变迁和耐药情况。方法：2001年7月-2003年6月．用Kirby-Bauer法检测了从广州地区13所医院分离获得的1072株非发酵革兰阴性杆菌对头孢哌酮-舒巴坦等19种抗菌药物的药敏结果，并按美国国家临床实验室标准委员会2001年标准进行判断，用WHONET5软件分析数据。结果：从广州地区13所医院中共分离出非发酵革兰阴性杆菌1072株，前3位细菌依次是：铜绿假单胞菌占56．3％、鲍曼不动杆菌占16．0％和嗜麦芽窄食单胞菌占15．0％。耐药性分析显示铜绿假单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦的敏感率最高(83．3％)、其次为哌拉西林-三唑巴坦(82．9％)，而敏感率低于10％的抗菌药物有：头孢泊肟(3．3％)、萘啶酸(4．2％)、头孢噻肟(4．8％)。嗜麦芽窄食单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦的敏感率最高(72．0％)，对亚胺培南(1．9％)、头孢噻肟(5．9％)和氨曲南(6．7％)的敏感率较低。而鲍曼不动杆菌对亚胺培南的敏感率却最高(93．6％)，其次为头孢哌酮-舒巴坦(78．6％)和阿米卡星(77．0％)。结论：非发酵菌耐药性仍是目前临床上的严重问题，需要各有关部门共同商讨有效对策。头孢哌酮-舒巴坦是临床分离非发酵菌的有效抗菌药物之一。     

CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及纯化

目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希菌ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符。结论成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础。     

强致病岛在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布及序列分析

目的探讨强致病岛（HPI）fyuA—irp2基因簇在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布及分子生物学特征。方法用多重聚合酶链式反应（PCR）技术扩增84株菌的fyuA—irp2基因簇,对产物进行DNA测序。结果irp1、irp2、irp3、irp4及,fyuA的总检出率分别是：40．48％、41．67％、5．95％、0％及16．67％;ECO6748、Kp7151及PAE7之fyuA蛋白质序列与YP_853080的相比有100％同源;克雷伯菌蜘49及Kp之irp2与AAA27636．1的同源性高（99％）,而大肠埃希菌ECO4、ECO7与1176840的相符率低（90％）,GenBank登陆号分别为：FJ211852及FJ211851;Kp51、Kp10及和49之irp1均与AL590842有99％同源;EC03、Kp51、Kp10及脚49之irp3与CAA73128相比有97％的同源。同种菌株突变的位点大致相同,不同种菌株间的突变差异较大。结论在多重耐药革兰阴性杆菌中检出HPI,fyuA-irp2基因簇有不同程度的突变和缺失。     

果酸对金免疫层析法检测粪便潜血试验的影响

目的探讨不同浓度的果酸对胶体金免疫层析法检测粪便潜血试验的影响.方法以蒸馏水为对照,用试带检测不同浓度的果酸.结果体外试验显示维生素C片剂、酒石酸、柠檬酸及柠檬酸钠浓度分别为：1.50、1.30、0.01及7.50g/L时与对照组相比,结果有显著性差异（P均＜0.01）,柠檬酸组的pH值越低,越容易出现假阳性.结论在体外,一定浓度的果酸会引起胶体金免疫层析检测粪便潜血试验的假阳性反应.     

产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的筛选和耐药性分析

目的以多重耐药革兰阴性菌为对象,检测β一内酰胺酶表型,了解其耐药特性和分布特点。方法采用纸片扩散初筛法、扩散确证法、头孢西丁三维试验、甘露聚糖结合凝集素（MBL）的协同试验进行确证;采用法国梅里埃API生化鉴定试条或经VITEK一2鉴定系统将细胞鉴定到种;药敏试验用琼脂纸片扩散（K—B）法,经wH0一NET5．0软件进行统计学分析,分析其耐药特性。结果多重耐药革兰阴性杆菌口一内酰胺酶总检出率为26．4％（80／302）,主要由产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起,占16．56％（50／302）;其次为ESBLs＋AmpC引起,占6．62％（zo／302）;ESBLs＋AmpC＋MOL引起,占1．66％（5／302）,单独由AmpC引起的仅占0．66％（2／302）,有3株未能定型占0．99％（3／30z）。多重耐药革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的总体耐药率最低的为阿米卡星（18．99％）、其次为亚胺培南（20．0％）,头孢哌酮／舒巴坦（21．7％）、哌拉西林／他唑巴坦（21．89％）;最高的为氨苄西林（98．33％）,其次为氨苄西林／舒巴坦（83．33％）、头孢曲松（76．25％）、头孢西丁（63．64％）及头孢噻肟（60．50％）等,大部分细菌呈多重耐药性。结论产多种6-内酰胺酶的革兰阴性菌具有多重耐药。     

广州地区3500株革兰阴性细菌的分布特征及耐药性特点

目的 了解广州地区医院感染常见革兰阴性细菌分布特征和耐药特点。方法 2001年7月~2003年8月,用Kirby-Bauer法检测了从广州地区13家医院分离获得的3500株革兰阴性细菌对临床常用15~21种抗生素的药敏结果,并按美国临床实验标准委员会2000年判断标准进行判断,用WHONET-5软件分析数据。结果 分离出的3500株革兰阴性菌中前3位细菌依次是大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)1244株(占35.5%)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)900株(占25.7%)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pae)547株(占15.6%)。广州地区临床分离革兰阴性菌中产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamases,ESBLs)菌株的总检出率为31.0%(1084/3500),在各种常见菌属中的检出率分别为:大肠埃希菌为38.7%(482/1244)、肺炎克雷伯菌为37.9%(341/900)、铜绿假单胞菌为5.3%(29/547)、阴沟肠杆菌为55.2%(117/212)、不动杆菌属为8.2%(17/208)、其他肠杆菌属为27.7%(53/191)、嗜麦芽窄食单胞菌为33.3%(37/117)、变形杆菌属为9.2%(8/87)。从呼吸道标本中分离获得革兰阴性细菌最多,为1463株(占41.8%);其次为泌尿道标本,为943株(占26.9%)。耐药性分析显示:革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的总体耐药率最低为亚胺培南(8.7%),其次为头孢哌酮/舒巴坦对广州地区临床分离的铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌的耐药率最低,分别为10.8%和15.9%,大部分细菌呈多重耐药.产ESBLs菌株对15～21种临床常用抗菌药物的耐药率均显著高于不产ESBLs菌株(P<0.05)。结论 细菌耐药性仍是目前广州地区临床用药最为严重的问题,尤其是产ESBLs菌株有上升趋势.亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦分别对临床分离革兰阴性菌株有较好的抗菌活性,可以作为广州地区临床经验用药的候选药物。     

H_3RTC型血细胞分析仪应用评价

目的　对H3 RTC型血细胞分析仪的主要性能进行评价 .方法　选用红细胞 (RBC)、白细胞 (WBC)、血红蛋白 (HGB)、红细胞比积 (HCT)、血小板 (PLT)从精密度、总重复性、互染性率、线性范围、可比性等方面进行评价 .结果　H3 RTC型精密度高、线性范围广、互染率均 <1%、与NE - 15 0 0血细胞分析仪密切相关 :(p均 >0 .0 0 5 ) .与人工白细胞分类在的中性粒细胞 (N)、淋巴细胞 (L)、单核细胞 (M)、嗜酸性粒细胞 (E)相关密切 :(p均 >0 .0 0 5 ) ;嗜碱性粒细胞(B) :相关良好 ,(0 .0 1

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