靶向下调Cav3.1诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡

目的 探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法检测30例喉癌患者中Cav3.1在喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况;siRNA瞬转技术构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用Western blot检测各组细胞BAX、Cleaved-caspase-3、BCL-2的表达情况,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的情况,Annexin V-PI染色技术检测喉癌Hep-2细胞凋亡的情况.结果 相对癌旁组织,Cav3.1在喉癌组织中高表达(P＜0.05);下调组Cav3.1在喉癌细胞中mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05);下调Cav3.1可抑制喉癌细胞的增殖(P＜0.05),促进喉癌细胞的凋亡(P＜0.05),Western blot验证下调Cav3.1,BAX、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,BCL-2表达明显下降(P＜0.05).结论 Cav3.1在喉癌组织和喉癌细胞系中高表达,下调Cav3.1抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞凋亡.     

淋巴细胞主动免疫治疗对不明原因复发流产患者 Treg/Th17平衡的影响

目的：探讨淋巴细胞主动免疫治疗（LIT）对不明原因复发流产（URSA）患者的 Treg／Th17免疫平衡的影响。方法应用流式细胞学技术及 ELISA 法测量 URSA 患者 LIT 治疗前、后外周血 Treg、Th17细胞所占淋巴细胞比例和血清 IL-10、IL-17、TGF-β1水平,并对比及分析关联性。结果40例 URSA 患者 LIT 治疗后外周血CD4＋CD25＋Treg、CD4＋CD25＋CD127 low Treg 细胞所占比例高于治疗前,CD8-CD3＋IL-17A ＋Th17细胞所占比例低于治疗前,且与前两者的改变分别呈负相关（r ＝－0.724,P ＜0.01;r ＝－0.571,P ＜0.01）,Treg／Th17比例高于治疗前,差异有统计学意义。LIT 治疗后血清 IL-10、TGF-β1水平较治疗前升高,且分别与 CD4＋CD25＋Treg 细胞比例的改变呈正相关（r ＝0.654,P ＜0.01;r ＝0.658,P ＜0.01）,IL-17水平降低,且与 CD8-CD3＋IL-17A ＋ Th17细胞比例的改变呈正相关（r ＝0.693,P ＜0.01）,差异有统计学意义。结论 LIT 可能影响 URSA 患者的 Treg／Th17免疫平衡,提高 Treg 细胞亚群的数量、功能,降低 Th17细胞亚群的数量、功能,以此发挥治疗作用。     

基于单精子SNP单体型的1例遗传性球形红细胞增多症患者植入前遗传学检测

目的 探讨单精子单核苷酸多态性(SNP)单体型在植入前遗传学检测(PGT)中的应用价值。方法 收集1例ANK1基因c.3641delC杂合突变导致的常染色体显性遗传性球形红细胞增多症患者的精液样本,用机械制动法分离单精子样本并进行全基因组扩增,通过ASA基因芯片分析基因上下游1 Mb范围内SNP位点,确定未携带以及携带致病变异的染色体单体型。将获得的4份胚胎滋养层细胞活检样本作为研究对象,在完成全基因组扩增后,通过高通量测序检测判断胚胎携带致病变异的情况,选取可用囊胚进行移植,于孕18周抽取羊水样本,确认胎儿是否携带致病变异。结果 通过单精子SNP位点检测共筛选出30个SNP位点,成功构建突变型及野生型单精子SNP单体型,植入前单体型分析提示2枚胚胎携带致病变异,2枚未携带;妊娠中期羊水基因检测证实胎儿未携带ANK1基因c.3641delC杂合突变。结论 对于携带新发致病变异的男性,通过单精子SNP单体型构建连锁分析,可为患者夫妇提供准确有效的单基因病植入前遗传学检测(PGT-M),筛选正常胚胎进行移植,从而阻断致病基因垂直传递。