白细胞介素-23基因的克隆及真核双表达载体的构建

[目的]通过分别克隆白细胞介素-23（IL-23）基因的双亚基p19和p40,构建pcDNA3-IL-23真核双表达载体,为通过IL-23基因转染树突状细胞（dendritic cell,DC）增强其介导的免疫抗肿瘤作用提供基础。[方法]一步法从小鼠脾脏及胸腺中提取p19和p40总RNA,RT—PCR法扩增p19和p40的cDNA,扩增产物与pMD18-Tvector连接并热转化至大肠杆菌JM109,PCR法筛选阳性克隆,提取质粒并进行DNA的测序鉴定,将pMD18-p19和DMD18-p40分别限制性酶切,在对pcDNA3表达载体限制性酶切后将切胶回收的p19和p40片段分别克隆至pcDNA3．0表达载体,对阳性质粒进行XhoI/KpnI双酶切检测,琼脂糖凝胶电泳分析。[结果]脾脏及胸腺中提取p19和p40总RNA电泳鉴定是完整的,克隆的p19和p40 cDNA经测序鉴定与Genebank中序列完全一致。构建的pcDNA3．0-p19和pcDNA3．0-p40质粒分别限制性酶切后得到了593bp和1028bp的基因片段;构建的pcD．NA3．0-IL-23表达载体限制性酶切后得到了1．62kbD的p19＋p40片段。[结论]成功克隆了小鼠IL-23基因,并分别构建了pcDNA3-p19、pcDNA3-p40和pcDNA3-IL-23真核表达载体,为IL-23基因转染DC来增强其免疫活性创造了条件。     

pLNCX-SOD基因转染大鼠肝细胞对梗阻性黄疸损害的保护

目的 探讨pLNCX-SOD基因转染大鼠肝细胞对梗阻性黄疸(梗黄)损害的保护作用。方法 转染培养的大鼠肝细胞,克隆、筛选及鉴定阳性克隆,PCR法、western-blot印迹分析检测SOD基因表达,MTT比色法检测pLNCX-SOD基因转染肝细胞对胆汁、梗黄大鼠血清毒性损害的保护。结果2％浓度胆汁SOD转染的肝细胞抑制率由12h的78.80％±12.35％下降到43.35％±9.69％,24 h由82.55％±11.27％下降到-39.54％±15.13％,48 h由83.83％±18.69％下降到-48.32％±15.25％,P<0.01;对2.5％浓度的梗黄血清对抗作用明显,抑制率由12 h的89.72％±1.53％下降到14.68％±14.33％,24 h由92.2％±11.27％下降到41.39％±7.66％,48 h由94.25％±8.96％下降到22.71％±4.38％,P<0.01。结论 pLNCXS-SOD基因转染肝细胞对梗黄损害具有保护作用。     

腹腔镜胆囊切除术中出血的处理体会（附52例报告）

目的 总结腹腔镜胆囊切除术中出血的处理体会。方法 1999年3月至2002年11月收治实施腹腔镜胆囊切除术术中有52例出现术中出血。结果 胆囊动脉出血在压迫出血点视野清晰时上钛夹夹闭止血，胆囊床出血在用电弧光烧灼止血无效后用大纱布，或用热盐水肾上腺纱布压迫止血。结论 腹腔镜胆囊切除术术中胆囊动脉出血可以用钛夹止血，胆囊床顽固性出血可以用纱布压迫止血，术前超声检查可以明确肝中静脉较大属支是否临近胆囊床。术中可避免损伤。     

腹腔巨噬细胞对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血清细胞因子的影响

目的研究腹腔巨噬细胞对急性出血坏死性胰腺炎大鼠血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（inter leucocyte-6,IL-6）的影响。方法96只大鼠随机分为PMs（＋）组、PMs（-）组和S0组。采用胰胆管逆行注射2％去氧胆酸钠制作大鼠出血坏死性胰腺炎模型。使用氯屈磷酸二钠脂质体腹腔注射特异性清除PMs（-）组大鼠腹腔巨噬细胞。造模后1h、3h、6h、12h取标本,做胰腺病理学检查、血清淀粉酶检测,血浆内毒素测定,腹水和血清细胞因子测定。结果PMs（＋1组和PMs（-）组之间胰腺病理评分、血清淀粉酶水平无显著差异,两组间血浆内毒素水平,腹水和血清细胞因子水平差异显著。结论出血坏死性胰腺炎过程中腹腔巨噬细胞的活化对实验大鼠血清细胞因子水平有显著影响。     

人胃癌细胞体外抗癌药物敏感性测定的初步研究

本文采用体外短期培养法，结合Ｈ３－ＴｄＲ掺入技术对２８例进展期胃癌进行了体外抗癌药物敏感性测定研究。结果表明：ＭＭＣ、ＡＤＭ，５－Ｆｕ、ＰＤＤ，ＥＬ－ＡＩ对体外培养的人胃癌细胞的抑制率分别为１４．１％、２１．４％、２８．６％，１４．１％和３２．１％，与临床单一药物治疗胃癌的疗效比较接近。笔者认为在现今尚缺乏更为有效的抗胃癌药物前提下，采用体外测定方法，选出敏感药物用于临床对胃癌的个体化抗癌药物治疗很有必要。     

树突细胞联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗的实验研究

背景与目的：树突细胞（Dendritic cells，DC）是目前发现的功能最强大的肿瘤抗原专职免疫递呈细胞，DC疫苗是目前最具临床应用潜能的治疗性疫苗。肿瘤细胞凋亡小体被DC的MHC—1分子提呈并诱导的特异性CTL免疫反应抗癌作用显著。本研究探讨了DC负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌治疗作用。方法：制备C57BL／6小鼠骨髓源性DC并鉴定，负载肿瘤抗原后制备成疫苗。分别观察DC诱导的CTL和β-榄香烯对胰腺癌细胞的杀伤作用。体内观察DC疫苗联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌的抑制作用。结果1经电镜及流式细胞鉴定可获得典型的具有抗原加工及递呈作用的DC，利用TNF-α可使成熟的树突状细胞比例增加，MHC-Ⅱ、CD83、CD86等表面分子的表达较单纯DC组显著增强。负载凋亡抗原后DC诱导的特异性CTL体外对胰腺癌细胞有显著杀伤作用，效靶比30：1时，诱导的CTL对胰腺癌细胞抑制率达93％。β-榄香烯对癌细胞增殖抑制明显，DC疫苗与β-榄香烯联合治疗可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，使其生存期延长，联合治疗组生存期为49．4天，与单纯β-榄香烯组（24．8天）、DC疫苗（38．5天）、DC组（20．7天）及对照组（17．5天）相比有显著差异（P〈0．05）。结论：经凋亡肿瘤细胞致敏的DC回输荷瘤小鼠可激发宿主针对特异肿瘤的Th1及CTL免疫应答，以DC、介导的免疫反应联合中药的治疗方法可成为抗肿瘤的崭新且有效手段。     

大肠癌致肠梗阻的外科处理(附52例报告)

目的　探讨大肠癌致肠梗阻的外科处理方法。方法　分析 1995 1999年间 5 2例大肠癌致肠梗阻的外科治疗资料。结果　 5 2例病人 ,Ⅰ期行右半结肠切除 9例 ;Ⅰ期行横结肠癌切除 4例 ;Ⅰ期行左半结肠或直肠上段癌切除 ,近端结肠造口 ,关闭远端结肠或直肠备Ⅱ期吻合 37例。肿瘤无法切除行乙状结肠造口 2例 (直肠癌 )。术后并发症发生率 15 3 % (8/5 2 ) ,围手术期病死率 3 8% (2 /5 2 )。结论　重视对结肠癌致肠梗阻的认识。合理选择手术方式 ,做好围手术期处理是减少并发症 ,提高疗效的重要措施。