云南省2021年手足口病病例8株埃可病毒18型分离株基因特征

目的 分析云南省2021年手足口病(Hand, foot, and mouth disease, HFMD)病例埃可病毒18型(Echovirus 18,E18)分离株基因特征。方法 从2021年云南省2个市州HFMD病例粪便标本中分离E18;对VP1区基因进行扩增、测序和拼接,获得全序列;构建E18分离株与GenBank中参考株的系统进化树,分析基因特征。结果 从HFMD病例中获得8株E18分离株,其完整VP1区序列的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.75%-99.77%、97.21%-100%;与原型株Metcalf相比的核苷酸、氨基酸同源性分别为77.24%-78.63%、91.99%-93.73%。基于VP1区分型,8株分离株均属于基因型5分支2,且在VP1区存在特有的氨基酸位点变异(T80A、I240V、T274S和H281R)。结论 本研究E18分离株属于基因型5,可能在环境中循环了一段时间。需进一步加强HFMD病例E18监测和分子生物学特征研究。     

超声提取羟基红花黄色素A的工艺条件筛选

目的:筛选超声提取纯化羟基红花黄色素A(HSYA)的最佳工艺条件.方法:用超声提取法,以羟基红花黄色素HSYA百分含量为指标+,考查提取时间,提取次数,提取液用量,提取温度对HSYA纯化的影响.结果:红花黄色素A的最佳提取工艺为:加水8倍量,提取温度为30℃,提取次数为3次,时间为1h/次.结论:通过6次验证试验红花黄色素A含量平均值为16157mg/g,表明该工艺稳定,重现性好.     

BD MAX全自动工作站在肠道病毒检测中的优势

目的 比较常规检测方法与BD MAX全自动工作站在手足口病病原学检测中的差异,探讨应用BD MAX全自动工作站检测肠道病毒的可行性。 方法 收集2017年1月—2020年9月昆明市临床诊断为手足口病病例的标本,随机选择136份,以实验室常规采用的实时荧光PCR检测方法和BD MAX全自动工作站方法,对结果进行Cohen′s kappa一致性分析;用无酶水对检测试剂盒提供的U/CA16/EV71假病毒阳性对照做10倍梯度稀释,记录各稀释度检测结果;随机取两份阳性标本,分别用两种方法平行重复检测10次,计算 Ct值的平均值和变异系数,进行重复性分析。 结果 两种方法对肠道病毒U/CA16/EV71的检测结果一致性好,Cohen′s kappa值为0.889,95%置信区间（95%CI）为0.803~0.976;两种方法检测CA16的敏感性一致,常规方法检测EV71和U的敏感性略高于BD MAX方法;在CA16标本的检测中,常规检测方法变异系数CV（通用型）=1.07%、 CV CA16=0.62%,BD MAX方法CV（通用型）=1.63%、CV CA16=2.19%;在EV71标本的检测中,常规检测方法变异系数CV（通用型）=1.28%、 CV EV71=1.20%,BD MAX方法CV（通用型）=2.37%、CV EV71=1.73%。 结论 BD MAX全自动工作站检测结果较为准确,敏感性、重复性好,人工操作少,便于标准化推广,且耗时短,在小批量标本的病原检测及暴发疫情或应急检测中具备较好优势。     

2021年云南省手足口病病例中柯萨奇病毒A2型的测序定型和基因特征分析

目的对2021年云南省昆明市及曲靖市手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)病例中非肠道病毒A组71型(enterovirus A71, EVA71)和非柯萨奇病毒A组16型(coxsackie-virus A16, CVA16)的其他肠道病毒进行VP4/VP2区及VP1区基因测序检测, 并对检测到的CVA2 VP1区基因进行基因进化分析, 为CVA2的预防及控制提供实验室证据。方法按《手足口病实验室手册(2018年版)》, 对2021年昆明市和曲靖市送到云南省疾病预防控制中心HFMD实验室的标本进行前处理, 提取病毒RNA后, 先用MD91/OL68-1引物扩增肠道病毒VP4/VP2结合区基因并测序, 编辑后的序列在GenBank上搜索确定病毒型别, 再用肠道病毒A组引物分两段扩增CVA2 VP1区基因完整序列并测序, 通过肠道病毒在线定型工具(Enterovirus Genotyping tool Version 0.1)进行病毒型别确认。按文献下载CVA2 VP1区基因型/亚型代表株序列, Mega5.2软件构建基因进化树, 分析病毒基因特...