基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定

目的：获得戊型肝炎病毒(HEV)中和表位p166的编码基因，构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法：应用RT-PCR方法从粪便标本中扩增获得HEV VOF2中G6461～G7035片段，通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型，PCR方法扩增该片段中HEV中和表位p166的编码基因，经酶切后克隆于真核表达载体pTR421质粒，并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果：成功克隆了p166的编码基因，其基因型别为Ⅳ型；经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR421质粒，且核酸序列、读码框架正确结论：成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒，为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。     

5'-非编码区型特异性引物检测HCV基因型

我们探索建立一种HCV基因分型方法,用5'非编码区(5'NCR)1,2,3,1b型特异性引物,应用逆转录套式PCR,对HCV RNA阳性血清进行分型 .对65份HCV RNA阳性血清的分型率为90.8%(59/65).59例中混合感染7例,1型50例,其中1b亚型46例;3型2例.从而认为:所用的型特异性引物可成功地对HCV基因分型,分型结果证实南京市HCV流行优势株为1b亚型.     

HCV结构区DNA疫苗诱发小鼠特异性细胞免疫反应的研究

目的通过 HCV结构区 DNA疫苗直接免疫小鼠 ,诱发其体内特异性细胞介导的免疫反应的研究 ,为 HCVDNA疫苗的研制打下基础。方法用重组的 p BK- CMV质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞 SP2 / 0 ,建立了能体外表达 HCV结构区蛋白的 SP2 / 0 D细胞系 ,分别用 SP2 / 0和 SP2 / 0 D细胞攻击用空质粒或 p BK- CMV质粒免疫过的 Balb/ c小鼠 ,通过肿瘤形成、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润以及不同免疫组小鼠血清中 IL - 2和 IFN -γ含量来观察小鼠体内 T淋巴细胞的活性。结果用 SP2 / 0和 SP2 / 0 D攻击空质粒或 p BK- CMV质粒免疫过的小鼠 15 d后 ,SP2 / 0 D攻击的 p BK- CMV质粒免疫鼠肿瘤重量 ( 0 .9± 0 .12 ) g明显低于空白质粒免疫组和 SP2 / 0接种组 ( P<0 .0 0 1) ,且该免疫组小鼠血清中 IL- 2和 IFN- γ的浓度明显高于其它免疫组 ;此外 ,用 SP2 / 0 D攻击的 p BK- CMV免疫鼠 ,肿瘤病理切片中可见明显的 T淋巴细胞浸润。结论重组的 HCV结构区 DNA疫苗 ( p BK- CMV)能诱导小鼠体内特异性 T淋巴细胞反应 ,HCV DNA疫苗可能为临床疾病的治疗和预防提供一种新的途径。     

悬系康复治疗对小儿步态异常的临床疗效分析

目的探究悬系康复治疗对小儿步态异常的临床疗效。方法选取惠州市第二妇幼保健院2017年1月—2018年6月收治的150例步态异常患儿作为研究对象,将其随机分为常规组和试验组,每组各75例。常规组采用常规康复治疗,试验组采用悬系康复治疗,比较两组的治疗效果。结果在步频、步速、跨步长、站立相时间等时空参数比较中,治疗前常规组和试验组差异无统计学意义(P>0.05),治疗后试验组步速、跨步长均明显优于常规组,差异有统计学意义(P<0.05),但步频、站立相时间差异无统计学意义(P>0.05);在膝关节最大/最小角度、踝关节最大/最小角度等运动学参数比较中,治疗前常规组和试验组差异无统计学意义(P>0.05),治疗后试验组均明显优于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论悬系康复治疗应用在小儿步态异常治疗中效果明显,值得推广。     

人源抗丙型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建、筛选及表达

用常规RT PCR法 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增抗体重链Fd基因和κ轻链基因 ,构建噬菌体抗体Fab库。对抗体库进行 5轮吸附 洗脱 扩增的亲和选择后 ,以ELISA法鉴定抗HCV噬菌体抗体。 5轮亲和选择使特异性噬菌体抗体得到高度富集 ,抗HCV噬菌体抗体阳性克隆达 96 %。对一阳性克隆在大肠杆菌中表达 ,经ELISA及Westernblot分析鉴定 ,证实成功表达出人源可溶性Fab。对抗体基因VH和VκDNA序列进行测定 ,证实所获基因为抗体可变区基因。抗HCV噬菌体抗体库的构建和人源抗HCV单克隆抗体Fab段的制备 ,为HCV感染的诊断、治疗和发病机制的研究提供有效的分子工具。     

替硝唑注射液治疗厌氧菌与兼性菌混合感染的动物实验研究

目的：比较替硝唑注射液与甲硝唑注射液对混合感染小鼠的体内保护作用。方法：选用临床上厌氧菌感染中最常见的脆弱拟杆菌、消化链球菌与兼性菌中最常见的大肠杆菌，建立厌氧菌与兼性菌混合感染的小鼠模型，比较替硝唑注射液与甲硝唑注射液治疗小鼠混合感染的半数有效量（ＥＤ５０）。结果：替硝唑注射液对脆弱拟杆菌和大肠杆菌混合感染小鼠有明显的保护作用，ＥＤ５０值为２３．０２ｍｇ·ｋｇ－１；对消化链球菌和大肠杆菌混合感染的小鼠也有明显保护作用，ＥＤ５０值为１９．８１ｍｇ·ｋｇ１。结论：替硝唑注射液对上述混合感染的保护作用强于甲硝唑注射液     

协同凝集试验检测轮状病毒抗原的研究

作者收集346份粪便标本,进行协同凝集试验(CoA)检测轮状病毒(RV)抗原的研究,结果表明建立的 RV-CoA 有较好的特异性、敏感性和重复性,粪便标本用氯仿抽提、10%SPA 稳定液吸收、再与1%白蛋白0.1%吐温20混匀后进行 RV-CoA 检测,能有效控制非特异性凝集。RV-CoA 的阳性率与电镜法和 PAGE 法相比,无显著差异,但明显高于 ELISA 法。在 RV 流行季节,应用 RV-CoA 进行婴幼儿 RV 腹泻的快速诊断,可在40min 内出结果,阳性率为68.91%。RV-CoA 简便、快速、经济,适用于基层医院开展实验诊断和现场流行病学调查。     

核酸电泳同时检测粪便中的轮状病毒和腺病毒

报告用聚丙酰凝胶电泳同时检测225份腹泻粪便标本中的轮状病毒(RV)和腺病毒(Ad)的结果。在秋冬季收集的婴幼儿腹泻标本中,以检出 RV 为主,且流行优势株在不同年份出现明显变化,但 Ad 的检出率也高达11.2%;在夏季收集的成人腹泻标本中,以检出 Ad 为主,检出率为39.4%,且发现有核酸分子量不同的 Ad 同时流行。结果表明,除 RV 外,Ad 也是我国病毒性腹泻的重要病原。     

戊型肝炎患者粪便中病毒RNA的半定量检测

目的探讨戊型肝炎病毒(HEV)RNA半定量检测的意义和可行性,为HEVRNA的定量PCR(多聚酶链反应)检测提供科学依据。方法在逆转录-套式PCR基础上,采用样品倍比稀释法对戊型肝炎患者粪便中病毒RNA作半定量检测。结果20份粪便标本中有14份检测结果阳性,其中病毒RNA拷贝水平为8×105、8×107、8×108、8×109PCR单位·ml-1的分别为2、10、1、1份。对同一标本而言,在不同稀释度时,其PCR产物在量上无显著差异。结论定量PCR技术检测戊型肝炎病毒RNA是可行的,但应以起始模板来定量而不是以终产物定量。     

抗菌新药甲磺酸加替沙星的药效学实验研究

目的：研究抗菌新药甲磺酸加替沙星粉剂的体外抗菌效果和体内保护作用，并与国家药品监督管理局已批准进入临床研究的加替沙星分剂进行比较。方法：按照我国二类新药抗生素类药效学实验指导原则，选用试管对倍稀释法作体外抗菌实验及KM小白鼠作体内保护实验。结果：甲磺酸加替沙星和阳性对照药加替沙星对14种（232株）临床菌株和质控菌株的最小抑菌浓度（MIC）值，最小杀菌浓度（MBC）值及杀菌速率均无显著差异。不同细菌接种量和不同培养基pH值对两药MIC值的影响也基本一致。体内保护实验显示，两药对金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌感染的小鼠均具有很强的保护作用，且两者的ED50及95％可信限基本相同。结论：甲磺酸加替沙星的药效作用基本一致。