2016—2017年连云港市流感监测分析

目的 监测连云港市2016—2017年流感病例,为制定流感防治策略提供科学依据。方法 每周从哨点医院采集流感样病例(ILI)咽拭子标本,通过实时荧光定量PCR方法进行流感病毒亚型鉴定,并对连云港市2016—2017年流感病例监测结果进行分析。结果 2016—2017年共检测流感样病例咽拭子2 556例,检出流感病毒阳性451例,阳性率为17.64%。其中新甲型H1N1 26份,季节性H3 144份,B(Victoria)107份,B(Yamagata)172份,H7共2份。2016—2017年各周ILI%、男女ILI的病毒核酸检出阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 2016—2017年连云港市秋冬季交替时出现2个流感流行高峰,应进一步加强对流感的监测。     

2013-2014年连云港市流感病毒分离结果分析

目的对2013—2014年度连云港市流行性感冒的病原学监测结果进行分析,了解连云港市流感流行动态,探索流行规律,为流感防治提供科学依据。方法采集流感样病例(ILI)的鼻咽拭子标本,用狗肾细胞(MDCK)进行病毒分离,采用血凝抑制方法(HI)进行流感病毒型别鉴定。结果 2013年4月—2014年3月共检测流感哨点医院ILI鼻咽拭子标本970份,分离到流感病毒44株,阳性分离率为4.54%,经分型鉴定新甲H1N1亚型35株(79.55%),A型H3亚型5株(11.36%),B型Yamagata亚型4株(9.10%)。结论 2013年流行的优势毒株为新甲H1N1亚型,2014年流行的优势毒株为B型Yamagata亚型,每年的3、4月份会出现流感亚型的转变。     

直饮水中分离的38株铜绿假单胞菌抗生素敏感性及24h生物膜形成能力分析

目的了解连云港市直饮水中分离的铜绿假单胞菌抗生素敏感性和24h生物膜形成能力,探究直饮水中铜绿假单胞菌的潜在致病风险。方法对分离铜绿假单胞菌菌株,采用纸片扩散法(K-B法)进行12种抗生素敏感性测定,利用半定量粘附试验检测在96孔聚苯乙烯板上的24h生物膜形成能力。结果 38株分离铜绿假单胞菌,对12种抗生素有耐药的5株(耐药率13.16%),1株为3重耐药、4株为单一耐药;其中多粘菌素B耐药率7.89%(3株),氨曲南、庆大霉素、阿米卡星、头孢吡肟耐药率均为2.63%(1株);对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、环丙沙星和诺氟沙星均敏感。24h生物膜生成阳性率为65.79%。结论直饮水中铜绿假单胞菌耐药形势不容乐观,24h生物膜形成能力相对较强,需要持续关注直饮水中铜绿假单胞菌污染状况。     

结核分枝杆菌甲硫腺苷核苷酶的原核表达及活性分析

目的 克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌(MTB) Rv0091基因编码蛋白,分析酶活性,初步鉴定其功能.方法 构建Rv0091基因原核表达质粒,在大肠杆菌BL21trxB进行表达,经IPTG诱导,Ni2+-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白,通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Western blot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性,分析酶学性质.结果 成功构建Rv0091基因原核表达质粒,建立了可溶性蛋白最佳表达体系,获得纯度在95％以上的可溶性蛋白,Western blot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白,质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致,酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5′-甲硫腺苷(MTA),酶学性质分析表明最适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes,酶的热稳定性较差,37℃为最适反应温度,最适pH为10 ～ 12.结论 初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA,发挥甲硫腺苷核苷酶(MTAN)的作用,可能在MTB的代谢中起关键作用.     

不同高温灭活方式对新型冠状病毒核酸检测结果的影响

目的研究不同高温灭活方式对新型冠状病毒核酸检测结果的影响。方法收集2020-01-03经连云港市疾病预防控制中心实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,且未灭活样本51份,分别进行56℃水浴30 min、70℃水浴15 min、100℃水浴2 min、56℃干烤30 min、70℃干烤15 min处理,用RT-PCR方法检测,并使用卡方检验和单因素方差分析比较结果差异,检验水准α=0.05。结果 56℃水浴30 min组阳性率最高(98.24%),100℃水浴2 min组阳性率最低(84.31%)。100℃水浴2 min组与未灭活组阳性率差异有统计学意义(χ²=6.646,P<0.05),而其他灭活组与未灭活组阳性率差异无统计学意义(P均>0.05)。各灭活组检测阳性标本靶基因Ct值与未灭活组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论不同高温灭活方式均对新型冠状病毒核酸检测结果有一定的影响,在新型冠状病毒核酸检测时应避免100℃水浴2 min灭活方式。     

连云港市2009—2020年流感病原学监测分析

目的 监测流感病原学特点及流行趋势,为连云港市流感防控提供科学参考。方法 对送检本中心的流感样病例（ILI）标本进行核酸检测及病毒培养,并用统计学方法分析连云港市流感监测数据。结果 2009年7月—2020年12月,哨点医院在流感监测系统中上报的流感样病例就诊率（ILI%）呈逐年上升趋势,连云港市疾控中心流感网络实验室在此监测期间共收集哨点医院送检的流感样病例鼻咽拭子13 410份,检测出流感病毒核酸阳性标本2 408份,总核酸阳性率为17.96%;流感病毒核酸阳性高峰集中在冬春季和秋冬季的换季期间。0～4岁年龄段病例占比最大（52.65%）,流感样病例（ILI）在各年龄段占比差异有统计学意义（P＜0.001）。流感毒株分离率最高在2011年（60.78%）,主要为新甲H1亚型和乙型。2020年2月开始,随着新冠防控措施的实施,本市流感网络实验室再未在哨点医院送检ILI标本中检测出流感核酸阳性标本。结论 连云港市存在春季和秋季两个流感流行高峰,不同流感监测年度各流感亚型交替流行,应进一步加强对流感的监测,注意流感优势流行株的变化情况,探索各项防控措施对流感流行的影响。     

两例输入性新冠肺炎患者核酸检测结果分析

目的:对连云港市两例确诊新型冠状病(SARS-CoV-2)毒感染者的核酸检测结果进行分析,探讨新型冠状病毒患者核酸检测与病毒传染性因素的相关性.方法:对连云港市收治的两例境外输入性新冠感染病例住院期间及出院后随访核酸检测结果进行比较,回顾性分析在疾病初期诊断、治疗出院、出院后居家隔离、追踪观察过程中患者临床病例及其核酸检测结果.结果:两例患者自发病后核酸检测阳性天数明显不同,核酸检测Ct值随病程延长,数值明显升高.结论:两例患者症状严重程度不同,排毒时间长短不同,这为新冠防控提供一定的数据参考.     

结核分枝杆菌H37Rv结合肽的筛选研究

目的 应用噬菌体展示随机7肽文库,筛选MTB标准株H37Rv的结合肽,并初步鉴定其与MTB的结合能力.方法 以H37Rv灭活菌体为靶分子,应用噬菌体展示随机7肽文库进行筛选,并于第2～4轮的筛选中加入耻垢分枝杆菌灭活菌体进行反筛,经4轮生物淘选后,随机选取单噬菌体进行测序,间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法鉴定阳性克隆.将亲和性最强的阳性单噬菌体所展示的短肽进行体外合成及荧光标记,观察其与16种分枝杆菌标准株及3种非分枝杆菌(铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌)的结合活性.结果 通过4轮生物淘选,能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集.单噬菌体测序分析共获得5种共同序列.间接ELISA检测出5个单噬菌体均为阳性克隆,其中单噬菌体H8与H37Rv及耻垢分枝杆菌的亲和性均较强.荧光显微镜下观察到,荧光标记H8可与H37Rv结合,与包括耻垢分枝杆菌在内的其他15种分枝杆菌有一定亲和力,而与3种非分枝杆菌均不结合.结论 利用噬菌体展示随机肽库技术淘选可获得MTB标准株H37 Rv 的结合肽,与MTB的结合活性及特异度较高,这为以标记肽为基础探索新的MTB体外检测方法提供了思路.

Abstract：

Objective To screen the Mycobacterium tuberculosis H37Rv binding peptide using phagedisplayed random peptide libraries, and to analyze the binding capacity of the peptide with Mycobacterium tuberculosis. Methods lnactive Mycobacterium tuberculosis H37 Rv was used for screening of the binding peptide from the Ph. D. -7 peptide library, and Mycobacterium smegmatis was used for reverse screening during the 2nd to 4th rounds of screening. After 4 rounds of screening, single phages were randomly selected for DNA sequencing. The selected clones were tested by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The peptide of positive clone, which showed the highest affinity, was synthesized in vitro with fluorescent markers. The specific combination of the peptide with 16 mycobacterium standard strains and 3 other microbes ( Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Candida albicans) were observed by fluorescence microscopy. Results After 4 rounds of biopanning, remarkable enrichment of the phages that specifically bind with target molecules were observed. Single phages were randomly selected for sequencing analysis and 5 sequences were obtained. Five phages with different sequences were detected using indirect ELISA and all of them were found to be positive clones. Phage 8 showed the highest affinity with target molecule. The peptide of phage H8 was synthesized in vitro with fluorescent markers, and it was confirmed that the peptide could bind with H37Rv and other 15 mycobacterium including Mycobacterium smegmatis, but not with 3 other microbes. Conclusions By using phage-displayed random peptide libraries, we obtained the binding peptide of H37 Rv. It was shown that the peptide could bind with Mycobacterium tuberculosis specifically, which provided a new way for the detection of Mycobacterium tuberculosis in vitro.