小鼠白细胞介素23基因在毕赤酵母中的诱导表达及初步活性研究

目的:克隆小鼠白细胞介素23(mice interlecukin-23,mIL-23)基因,构建高效稳定的毕赤酵母表达菌株,并对得到的蛋白进行生物活性的初步测定。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-mIL-23上分别扩增获得IL-23的两亚基p19和p40,并通过重叠PCR(over-lap PCR)技术获得含有连接子的p1940,构建pPICZαA-IL-23重组质粒;采用甲醇诱导毕赤酵母表达重组蛋白,MTT方法检测诱导表达蛋白的促淋巴细胞增殖情况。结果:SDS-PAGE分析显示在诱导24小时和36小时后的上清及24～96小时的沉淀中均可以检测到约70 kD的诱导条带。Western blot印迹法证实了重组蛋白为特异性蛋白。上清和沉淀中表达的重组蛋白IL-23能促进外周血单个核细胞的增殖,OD570 nm分别达到(0.235±0.029)和(0.216±0.035),而未刺激的对照组只有(0.135±0.008)和(0.164±0.017)。结论:成功构建出mIL-23的酵母表达载体,诱导产生的蛋白可以明显地促进外周血单个核细胞的增殖。     

白细胞介素－23的研究进展

白细胞介素-23（interleukin-23,IL-23）是新近发现的一种细胞因子,与IL-12存在35％基因同源,功能与IL-12相近但更复杂的细胞因子。由于其特殊的生物学特性,近几年IL-23成为肿瘤基因治疗以及免疫治疗中最活跃的领域。本文就IL-23的分子结构、来源、受体、信号转导及其在肿瘤基因治疗、免疫治疗领域的研究进展作一综述。     

丙型肝炎病毒重组蛋白抗原联合免疫的免疫原性和保护性研究

目的 研究两个丙型肝炎病毒(HCV)多表位重组抗原联合免疫后诱导的细胞免疫和体液免疫应答,以及对小鼠的保护作用.方法 用两个多表位抗原HCV-T和HCV-E1联合免疫BALB/c小鼠3次,ELISA检测血清中抗体IgG、IgG1和IgG2a滴度;最后一次免疫后10 d杀死一半小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性;ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL4的细胞;最后一次免疫后2周,在免疫小鼠的背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞,考察联合免疫对小鼠的保护作用;另取BALB/c小鼠,先在背部皮下注射106个SP2/0-NS3细胞,7 d后开始联合免疫,免疫3次,考察免疫治疗作用.结果 用HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1特异性的IgG、IgG1和IgG2a抗体以及高水平的CTL活性;与单独免疫相比,联合免疫产生的分泌IFN-γ和IL-4的细胞数量有协同作用;而且联合免疫能有效预防和治疗SP2/0-NS3对小鼠的攻击.结论 HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答,有望进一步开发为一种有效的重组HCV疫苗.     

CD4+调节性T细胞与自身免疫性甲状腺疾病

调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)在调节机体免疫系统对自身抗原的免疫应答中起重要作用.在人类和动物实验中已发现Treg数量和功能缺陷与多种自身免疫病的发生有关,但目前对其作用机制尚未完全阐明.     

PR、Fasl与HSP90在子宫内膜息肉中的表达及作用

目的 研究子宫内膜息肉组织中孕激素受体(PR)、Fas配体(Fasl)及热休克蛋白90(HSP 90)的表达,并探讨其在本病发生中的作用.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来检测正常增生期内膜和子宫内膜息肉(包括置器和未置器患者)中PR、Fasl与HSP90的转录水平.结果 子宫内膜息肉中PR表达降低(P＜0.05),Fasl与HSP90表达升高(P<0.05);在放置不含激素和抗炎药物宫内节育器的息肉患者所检出的息肉组织中,HSP90表达高于未放置节育器的患者.结论 在子宫内膜息肉中PR表达降低,Fasl和HSP90表达增高,尤其在放置宫内节育器的息肉中HSP90呈高表达,说明炎症和内分泌因素共同参与了本病发生.     

丙型肝炎病毒重组联合疫苗的实验研究

目的:研究一种基于丙型肝炎病毒(HCV)多个抗原的重组联合疫苗.方法:将三种HCV重组抗原F4HVR1、HCV-T和HCV-E1混合,联合免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体滴度;第三次免疫后10天杀死一半小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性;用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞;最后一次免疫后2周,在免疫小鼠的背部皮下注射1.0×106个SP2/0-NS3细胞,考察联合免疫对小鼠的保护作用.结果:F4HVR1+HCV-T+HCV-E1联合免疫诱导了高滴度的HCV-E1和F4HVR1特异性的IgG抗体以及高水平的CTL活性;与单独免疫相比,联合免疫诱导了平衡的Th1/Th2免疫应答;而且联合免疫后能显著预防SP2/0-NS3对小鼠的攻击.结论:F4HVR1+HCV-T+HCV-E1诱导了保护性的体液免疫和细胞免疫应答,有望开发为一种有效的重组HCV联合疫苗.     

TERT多表位疫苗的制备及其免疫原性初步研究

目的:制备端粒酶逆转录酶(TERT)的多表位(meTERT)肽疫苗和DNA疫苗,免疫小鼠,对其免疫原性进行初步研究。方法:用重叠延伸PCR将TERT的多个CD4+和CD8+T细胞表位串联连接,得meTERT的DNA片段;将该片段分别连接到真核表达载体pcDNA3.1及原核表达载体pGEX-4T中,制备DNA疫苗(PCT),并原核表达多表位肽疫苗(PCG);皮下/肌肉(50μg/100μg)免疫小鼠3次,取脾细胞,用ELISPOT法检测分泌IFN-γ和IL-4的细胞频率;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性脾细胞杀伤率(抗原刺激的SP2/0细胞为靶细胞)。结果:成功制备meTERT的PCT和PCG疫苗;动物实验表明:PCT+PCG联合免疫诱导的分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于其它各组(P0.01);另外,PCT+PCG诱导的分泌IFN-γ的淋巴细胞数显著高于分泌IL-4的数量;PCT+PCG联合免疫诱导了显著的脾细胞杀伤活性(67.8%)。结论:含多个CD4+和CD8+T细胞表位的meTERT的DNA疫苗PCT和多表位肽疫苗PCG联合免疫能够诱导强烈的Th1和CTL细胞免疫应答。     

白色念珠菌sap2基因真核表达质粒的构建及免疫原性研究

目的构建以白色念珠菌SAP2蛋白编码基因sap2为目的基因的真核重组表达质粒,并对其免疫原性进行分析。方法RT-PCR法自白色念珠菌标准菌株ATCC64550中获取sap2基因,插入真核表达载体pcDNA3.1中,将真核表达经质粒大抽提并定量后免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体产生水平,流式细胞仪检测细胞免疫。结果RT-PCR法克隆出全长为1 197 bp的sap2基因;用构建的pcDNA3.1-SAP2免疫小鼠,能诱导产生效价为1∶1 600的IgG抗体,同时CD4^＋T和CD8^＋T细胞百分比增高。结论成功获取了白色念珠菌sap2蛋白基因,真核表达质粒能够诱导动物的体液免疫和细胞免疫。     

儿科护士忍耐力与心理安全感的相关分析

目的:调查济南市儿科护士忍耐力水平,深入分析其中影响因素,以期为提高儿科护理岗位胜任力,加强护理管理的科学性提供参考。方法:2022年4月—5月以济南市儿科护士为调查对象进行线上调查,借助问卷星发放问卷。结果:共回收调查问卷252份,全部有效纳入进行数据分析,资料来自济南市5所三级甲等医院。结果显示儿科护士忍耐力得分为(78.35±13.77)分,多因素分析结果显示,心理安全感、工作性质以及生育状况为儿科护士忍耐力水平的影响因素(F=26.629,P<0.001),解释23.4%的变异。结论:济南市儿科护士忍耐力处于中上等水平,这可能与儿科护士高强度的工作环境有关;未育以及合同制护士忍耐力水平较低,管理者应引起重视,积极提高儿科护士的心理安全感水平     

有组织科研背景下的有组织医院科研平台建设

目的探讨我国在有组织科研背景下的大型医院科研平台的有组织建设路径及建设目标。方法通过查阅相关文献资料, 对国际及国内现有的有组织科研的科研平台建设进行分析, 阐述有组织科研背景下的临床医院科研平台建设的重要性与必要性, 并结合临床医院有组织科研平台的建设提出建议。结果有组织的科研需要有组织的建设科研平台。有组织的科研平台建设始终要围绕国家重大需求, 服务于重大科学计划, 在坚持跨学科、多层次协同创新发展的原则下, 进行有组织的人才培养和内部高效的有序组织运行。科研平台的建设逻辑应该是从线性思考到立体思维, 从静态单向的服务到动态共生的创新生态格局。结论应对"十四五"国家科技战略需求, 有组织地进行科研平台的升级、整合、扩容、完善, 形成多学科交叉立体的平台架构, 保障有组织科研的顺利推进。