卵巢子宫内膜异位囊肿对体外受精-胚胎移植的影响

目的探讨卵巢子宫内膜异位囊肿对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法对2002年1月至2006年12月在广州医学院第三附属医院行IVF-ET的120例(148周期)卵巢子宫内膜异位囊肿患者作回顾性分析。120例分别在降调节日和控制性超促排卵(COH)启动日行经阴道超声引导下卵巢子宫内膜异位囊肿穿刺术,将取卵日仍有卵巢子宫内膜异位囊肿患者46例(55周期)作为观察组,取卵日无卵巢子宫内膜异位囊肿患者74例(93周期)作为对照组。比较两组IVF-ET的结局。结果两组人绒毛膜促性腺激素(HCG)日雌二醇(E2)水平、移植胚胎数相似;观察组受精率[(61.5±23.6)%]、妊娠率(34.5%)稍低于对照组[(69.2±25.0)%,36.6%],但差异无显著性意义(P>0.05);观察组获卵数[(8.3±5.2)个]、优质胚胎数[(4.9±3.8)个]明显低于对照组[(10.5±7.6)个,(7.2±4.3)个](P<0.05);促性腺激素(Gn)总量明显高于对照组(P<0.05),取卵时间明显长于对照组(P<0.05)。结论卵巢子宫内膜异位囊肿对IVF-ET有一定的不良影响,导致Gn用量增加,取卵时间延长,获卵数和优质胚胎数减少。     

顶体酶活性对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨精子顶体酶活性对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法:选择909对在本院生殖中心就诊的不孕夫妇,其中女方检查为正常或仅为输卵管因素不孕。采用改良巴氏法染色和Na-苯甲酰-DL-精胺酸-P-硝酰基苯胺(BAPNA)法分别对丈夫的精液进行精子形态学分析和精子顶体酶活性测定。结果:顶体酶异常组中各项精液参数,包括正常形态精子百分率、精子活动率、活动力、快速前向运动精子百分率及精子密度均显著低于顶体酶正常组(P<0.01);顶体酶活性与精液常规分析上述各参数之间存在非常显著的正相关(P<0.01);两组间取卵数、卵裂率、优质胚胎率、胚胎冷冻率、无可移植胚胎周期百分率、胚胎移植数和流产率均无显著性差异(P>0.05);顶体酶正常组的受精率、仅一个胚胎移植的周期百分率、着床率及临床妊娠率均明显高于顶体酶异常组(P<0.01)。结论:顶体酶活性异常与精液常规分析各主要参数的异常密切相关,可导致体外受精率显著下降。顶体酶活性检测在IVF结局预测中起着重要作用。     

孕晚期人未成熟卵母细胞的体外成熟:一种新的卵母细胞来源

目的 探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响.方法 共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC 633枚和DO 453枚.其中OCC分为孕晚期组、自然周期组和IVM周期组;DO分为孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组;孕晚期来源的未成熟卵母细胞分为OCC组和DO组.所有未成熟卵母细胞体外成熟后,ICSI受精序贯培养,除IVM周期组行胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段.分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组的囊胚形成率,统计IVM周期组的移植周期妊娠率;比较孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率.结果 OCC:孕晚期组、自然周期组及IVM周期组的体外成熟率分别为74.3%、76.9%和82.2%,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;三组受精率、卵裂率相比,孕晚期组和自然周期组囊胚形成率相比均未见统计学差异,IVM周期组移植周期妊娠率为20%.DO:超促排卵周期组体外成熟率最高(86.0%),明显高于自然周期组(72.5%)和孕晚期组(72.7%),P<0.01;孕晚期组受精率、卵裂率、囊胚形成率分别为65.0%、83.3%和38.5%,与其他两组相比均亦未见统计学差异.孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差别.结论 孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外具有同样的发育潜能,孕晚期捐献的卵母细胞可作为一种供卵来源:有无颗粒细胞并不影响孕晚期卵母细胞的发育能力.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro maturation of human oocytes (IVM)from pregnant late term,natural cycles and Gn stimulating cycles and the effect of granulose cells on IVM from pregnant late term.Methods A total of 1086 immature oocytes were obtained including 633 oocyte-cumulus complexes(OCCs)and 453 denuded oocytes(DOs).OCCs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and IVM group,and DOs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and controlled ovarian hyperstimulation(COH) group.All the oocytes were matured in IVM culture system and fertilized by ICSI.The embyos were cultured to blastcyst stage except that those in IVM group were transferred into the utems.The main outcomes were assessed including maturation rate(MR), fertilization rate(FR),cleaverage rate(CR),and blastulation rate(BR)(natural cycle group,pregnant late term group and COH group)and pregnancy rate per transfer cycle(PR) of IVM group.ReslIIts MR of OCCs in pregnant late term group,natural cycle group and COH group was 74.3%,76.9%and 82.2%,respectively,showing statistical difference between pregnant late term cycle group and IVM group.No statistical difference was observed in FR,CR or BR between the three groups.For IVM cycle group,clinical pregnancy rate of 20%per aspiration was achieved.For DOs,MR of COH group(86.0%)was significantly higher than that of the natural cycle group(72.5%)and pregnant late term group(72.7%) (P<0.01).FR,CR and BR showed no statistical difference among the 3 groups.No difference was found in MR,FR,CR and BR between OCCs group and DOs group from pregnant late term.Conclusions The oocytes from pregnant late term have the same development potential as those from natural cycles or Gn stimulating cycles in vitro,and provide a new source of donor oocytes.Granulose ceils do not affect the IVM from pregnant late term.     

Pure Sperm梯度离心法和上游法处理精液效果的比较

目的　比较PureSperm(硅烷化硅胶悬浮液)梯度密度离心法和Earel’s液上游法处理精液在体外受精-胚胎移植(IVF -ET)中的应用情况。方法　4 5例丈夫精液密度(2 0～4 0 )×10 6/ml,a级精子比例<15 %或精液量少于1ml者用PureSperm处理,其余用Earel’s液上游法处理。结果　处理后两种方法均可以显著性提高精子的总活力、a级精子率。梯离组和上游组畸形精子率分别为:6 8 8% ,75 1% ,与处理前81 2 %比显著降低,但两种方法之间的降低程度无差别(P >0 0 5 )。梯离法在总活动精子回收率及a级精子的获得方面优于上游法(P <0 0 5 )。PureSperm组与上游组的受精率分别为6 8% ,70 1% (P均>0 0 5 ) ,无统计学差异,胚胎发育潜能:卵裂率、优胚率、着床率、临床妊娠率、流产率也均无统计学差异。结论　相对于稍差者的精液来说,用PureSperm梯度密度离心处理效果更佳;PureSperm对胚胎的毒性作用极小,不影响IVF -ET的结局,在IVF -ET技术中可以安全使用。     

未成熟卵母细胞在TCM199与P1培养体系体外成熟的比较

目的 探讨人未成熟卵母细胞适宜的培养体系及培养时间.方法 将卵母细胞-卵丘复合体(0CC)332枚和裸卵(DO)393枚随机置入TCM199和P1两种培养体系体外成熟.OCC体外培养48 h,观察其成熟情况.DO分别在24、30、48 h观察第1极体排出情况,计算体外成熟率.OCC和DO成熟后称为成熟的卵母细胞,成熟的卵母细胞行精子卵浆内注射技术(ICSI)受精,比较其在两种培养体系的受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 在TCM199和P1培养体系中,OCC的成熟率、成熟后成为成熟的卵母细胞的受精率和卵裂率的差异无统计学意义(P均>0.05),但成熟的卵母细胞的囊胚形成率为53.7%比37.8%(P<0.05).DO在TCM199和P1培养体系中体外培养24、30、48 h时成熟率的差异无统计学意义;由DO成熟后形成的成熟的卵母细胞在P1培养体系中的受精率、卵裂率和囊胚形成率高于其在TCM199培养体系中,但只有受精率差异具有统计学意义(73.5%比62.9%,P<0.05);DO在两种培养体系中体外培养48 h和30 h的成熟率均明显高于24 h(P<0.05),但48 h与30 h的成熟率相比无差异.结论 OCC适宜在TCM199培养体系的培养;DO适官在P1培养体系的培养.DO体外成熟形成成熟的卵母细胞的时间可以缩短至30 h.     

乙肝病毒S蛋白诱导人精子凋亡的分子机制

目的： 探讨乙肝病毒S蛋白(HBs)诱导人精子凋亡的分子机制。方法：人精子与不同浓度(0、25、50、100 μg/mL)HBs共孵育3 h后,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测HBs对精子早期凋亡指标磷脂酰丝氨酸外翻情况,用流式细胞术检测精子细胞内半胱氨酸蛋白酶-3、-8、-9(Caspase-3、-8、-9)活化,用TUNEL结合流式细胞术检测精子DNA的损伤。结果：人精子与25~100 μg/mL HBs共孵育3 h后,Annexin V-FITC＋/PI－精子,Caspase-3、-8、-9阳性精子,TUNEL阳性精子的比率均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),且均呈剂量依赖趋势。结论：25~100 μg/mL HBs可诱发人精子胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,胞内Caspase-3、-8、-9激活和DNA损伤,从而致使人精子凋亡以影响精子的功能。     

乙肝病毒S蛋白对人精子氧化应激的影响

目的:乙肝病毒(HBV)可通过血睾屏障将病毒DNA整合到男性生殖细胞的基因组中,诱发多种染色体畸变,而且还能破坏精子线粒体功能,导致精子活力受损,受精率和受精指数下降,但其机制未明。本研究主要考察乙肝病毒S蛋白(HBs)对人精子氧化应激的影响。方法:人精子与不同浓度(0、25、50、100 μg/mL)HBs共孵育3 h后,用流式细胞术检测精子内活性氧(ROS)的变化情况,应用酶标仪检测精子细胞内丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(TAC)。结果:人精子与25~100 μg/mL HBs共孵育3 h后,ROS阳性精子比率、人精子细胞膜MDA水平显著高于对照组,而TAC 水平显著低于对照组(P<0.05或0.01)。MDA水平以及ROS阳性精子比率的升高与HBs呈剂量依赖关系(r0.62,r0.75;P均<0.01)。TAC水平的降低与HBs呈剂量依赖关系(r-0.89;P<0.01)。结论:HBs可诱导人精子内ROS升高、TAC降低,从而产生氧化应激,使细胞膜脂质过氧化进而影响人精子的功能。     

长方案超排卵获卵数对胞浆内单精子注射治疗结局的影响

目的：比较常规长方案超排卵周期中,获取不同卵母细胞数对胞浆内单精子注射（ICSI）治疗结局的影响。方法：回顾分析广州医科大学附属第三医院生殖医学中心2007年1月—2013年6月因单纯男性因素采用常规长方案超排卵行ICSI治疗的患者资料。根据获卵数目分成4组,获卵数≤4个为G1组（90个周期）,获卵数5~10个为G2组（368个周期）,获卵数11～20个为G3组（449个周期）,获卵数≥21个为G4组（135个周期）。结果：在ICSI治疗中,G1组女方平均年龄高于其他3组（P＜0.01）,但其中＜35岁的患者占57.8%。G1组患者完全受精失败发生率、G4组的卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率以及这2组的移植周期取消率均高于G2组和G3组（P＜0.01）;G1组的临床妊娠率在4组中最低（31.3%,P＜0.05）;4组中G3组的临床妊娠率、胚胎种植率和移植胚胎活产率最高,且后两者差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：在ICSI治疗周期中,获卵数≤4个影响ICSI受精结局,完全受精失败发生率升高;获卵数在11～20个时ICSI临床结局最好。     

冻融液的温度对人未成熟卵母细胞玻璃化冻融效果的影响

目的探讨冻融液的操作温度对未成熟人卵母细胞（GV、MI）玻璃化冻融效果的影响。方法收集卵胞浆内单精子注射（ICSI）患者的GV、MI卵母细胞,根据冻融液操作温度的不同分为A、B、C组。冻融后存活及未冷冻对照组（D组）卵母细胞体外成熟（IVM）培养,成熟的M11卵母细胞固定后进行免疫荧光染色,然后用NikonCISI激光扫描共聚焦显微镜观察纺锤体、染色体形态。结果实验组GA、GB、GC卵母细胞冻融后的存活率和体外成熟率分别为100％、81．3％、68．8％和33．3％、83．3％、72．7％,仅GC组的存活率与对照比较存在显著性的差异（P〈70．05）;实验组中只有GB组获得了纺锤体（20％）和染色体（10％）形态正常卵母细胞。实验组MA、MB、MC卵母细胞冻融后的存活率分别为71．4％、100％、83．3％,各实验组与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;MA组体外成熟率与对照组比较存在极显著性的差异（0％比57．1％,P〈0．01）,MB、MC与对照组的体外成熟率比较无显著性的差异（66．7％、80％比57．1％,P〉0．05）;仅MC获得1个正常纺锤体和染色体形态卵子。结论冻融液的合适操作温度可以提高未成熟卵子的冻融效果。