海带多糖对紫外线辐射小鼠皮肤胶原蛋白及微血管内皮细胞的影响

目的 探讨海带多糖对紫外线辐射小鼠皮肤胶原蛋白及微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVEC)的影响.方法 昆明小鼠背部剃毛,随机分为对照组、模型组、海带多糖低剂量组(1 mg/kg)、海带多糖高剂量组(5 mg/kg)、维生素E(Vit E)组(100 mg/kg).除对照组外,其他各组每日予以紫外线照射1h,每周5次,连续8周.造模后,各组小鼠取背部暴露皮肤,检测皮肤组织过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、羟脯氨酸(Hyp)的含量及皮肤组织Ⅰ型胶原蛋白mRNA的相对定量,同时检测血清NO水平,行透射电镜观察皮肤MVEC的超微结构.结果 与模型组比较,海带多糖高剂量组及Vit E组皮肤组织MDA、H2O2水平降低(P＜0.01),皮肤组织SO、GSH-Px、CAT、Hyp、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及血清NO水平均升高(P＜0.05).超微电镜显示,模型组MVEC细胞膜模糊,胞质内出现大小不等的空泡,线粒体嵴模糊不清;海带多糖高剂量组MVEC细胞膜完整,线粒体嵴清晰.结论 海带多糖可以增强受紫外线辐射皮肤的抗氧化能力,保护皮肤MVEC,调节皮肤胶原蛋白的合成.     

NDY1shRNA真核表达质粒构建及其在卵巢癌A2780细胞中的稳定表达

目的：构建NDY1 shRNA真核表达载体,并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据Gen‐Bank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列,设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA（shRNA）序列,插入表达载体获得重组质粒pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后,脂质体介导转染A2780细胞,经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞,采用实时定量聚合酶链反应法（RT‐qPCR）和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1 mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确,转染shNDY1后,A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降（72．89±4．83）％及（55．85±4．84）％,与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论成功构建 pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1真核表达质粒,并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞,为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。