乙型肝炎病毒感染HepG2细胞模型的构建

目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)感染的细胞模型.方法:将携带1.2拷贝HBV基因的重组腺病毒感染HEK293细胞进行包装、扩增并分离纯化.将扩增得到的HBV感染HepG2细胞,用ELISA法检测感染后第4天培养上清中的HBsAg,Real-time RT-PCR检测HBV mRNA.结果:ELISA检测结果显示,HepG2细胞感染HBV后上清液中HBsAg呈阳性.Real-time RT-PCR可以检测到HBV mRNA.结论:HBV能在HepG2细胞中表达复制和表达.HBV感染的HepG2细胞模型构建成功.     

Sanger测序法和突变扩增阻滞系统法检测非小细胞肺癌EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值比较

目的比较Sanger测序法和突变扩增阻滞系统（ARMS）法检测非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值。方法收集经病理组织学确诊的NSCLC患者肺部原发或转移癌标本102例,其中石蜡包埋组织75例,病理活检标本27例;采用Sanger测序法和ARMS法检测上述标本EGFR基因19、21号外显子突变情况,分析其与患者临床病理学特征的关系。结果ARMS法突变检出率为48.0%（49/102）,高于Sanger测序法的32.3%（31/96）,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。病理活检组织ARMS法突变检出率为57.1%（12/21）,明显高于Sanger测序法的23.8%（5/21）,差异有统计学意义（P＜0.05）;石蜡包埋组织ARMS法和Sanger测序法突变检出率分别为49.3%（37/75）和34.7%（26/75）,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。女性患者EGFR基因突变检出率68.0%高于男性患者的28.8%,未吸烟患者突变检出率65.5%高于吸烟患者的27.7%,腺癌患者突变检出率62.3%高于鳞癌患者的26.8%,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;但EGFR基因突变检出率和有无淋巴结转移及年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论EGFR基因19、21号外显子突变好发于女性、未吸烟患者和腺癌患者,Sanger测序法对大组织样本及未知突变检测更有优势,ARMS法对病理活检、微小样本及要求灵敏度高的样本检测更为适合,结合2种方法检测结果更为全面可靠。     

多参数流式细胞术检测91例急性白血病免疫表型分析

目的探讨多参数流式细胞术检测急性白血病（AL）免疫表型的特点,同时与形态学分型对比以提高急性白血病实验室诊断水平。方法对就诊91例AL采用骨髓细胞形态学、骨髓细胞化学染色和细胞免疫表型分型检测方法。结果 91例AL中,59例急性髓系白血病（AML）表达CD13、CD33、CD15、MPO、CD117、CD34和HLA-DR阳性率分别为93.2%、76.2%、55.9%、79.6%、89.8%、61%和62.7%;32例急性淋巴细胞白血病（ALL）中8例T-ALL表达CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8、cCD3、CD34和HLA-DR阳性率分别为75%、50%、75%、100%、25%、37.5%、100%,50%和62.5%;24例B-ALL表达CD10、CD19、CD20、CD22、CyCD79a、CD34和HLA-DR阳性率分别为45.8%、100%、33.3%、70.8%、75%、100%和62.5%。FAB分型有54例AML、29例ALL和8例AL不能分型。8例AL经免疫分型确诊为5例AML,1例T-ALL,2例B-ALL;另证实1例T/B混合型急性白血病和1例双表型急性白血病。结论 AL免疫表型分析能进一步明确AL诊断,并可获得白血病细胞不同分化阶段的参数,对AL的诊断和预后判断具有重要意义,对形态学分型具有补充和修正。     

脂质体疫苗在抗感染免疫中的应用

脂质体是脂质双分子层组成的囊泡结构,包裹的可溶性药物在体内可释放,具有无毒性和生物可降解性等优点.脂质体可将亚单位疫苗或核酸疫苗转运入细胞,同时具有佐剂功能,提高机体体液免疫应答和细胞免疫应答.因而在抗感染免疫研究中,脂质体作为表位疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗的载体和佐剂的应用越趋成熟.     

登革病毒感染C57BL/6j小鼠动物模型建立

目的建立登革病毒2型(DEN-2)感染C57BL/6j小鼠模型,测定小鼠血液中的登革病毒含量。方法构建标准品质粒;用2种不同剂量(2×108copies/只;2×109copies/只)的DEN-2国际标准(NGC)株腹腔感染C57BL/6j小鼠;绝对定量荧光PCR法测定感染后小鼠外周全血病毒含量。结果C57BL/6j小鼠经腹腔感染病毒后,2×108copies/只感染组和2×109copies/只感染组测得第1,3,5 d的病毒含量分别为1.05×103.5～1.05×103.7,1.05×103.8～1.05×103.9,1.05×103.5～1.05×103.7;1.4×103.5～1.4×104.4,1.4×106.9～1.4×107.32,1.4×103.8～1.4×104.8copies/mL。结论成功建立登革病毒感染小鼠模型,外周血液中病毒含量呈峰状,于感染后第1 d病毒含量增加,第3 d达到高峰,第5 d呈下降趋势。