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目的 获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中核因子[NF-κB(p65)]表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3 3条针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH Ⅰ)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19 bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将合成的序列插入空载体pSI H1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time聚合酶链反应(PCR)检测不同序列片段对p65的mRNA抑制效果,通过Western blot检测对p65蛋白表达的抑制效果.从而获得可以稳定高效抑制前列腺癌细胞中p65表达的shRNA序列.结果 设计的3条针对p65的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于p65(NM_021975)的1096~1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中p65的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中p65表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体. 相似文献
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<正>甲状腺结节是较常见的临床疾病,检出率高达50%[1],然而甲状腺癌的患病率仅5%~10%[2-3]。超声检查是国内外权威指南推荐的甲状腺良恶性结节诊断与鉴别诊断的主要影像学方法。随着高频超声技术的发展,越来越多的甲状腺结节被及时发现[4],但高频超声诊断甲状腺结节的敏感度及特异度均较低,无法满足临床鉴别诊断的要求。近年来超声弹性成像技术广泛应用于浅表器官的检查,并被认为可提高常规超声检查鉴别诊断甲状腺良恶性结节的能力。 相似文献
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目的 探讨大鼠膀胱组织中三型酸敏感离子通道(ASIC3)的表达与大鼠膀胱过度活动症(OAB)的关系。方法 成年雌性大鼠膀胱造瘘后,随机分为对照组(0.9%氯化钠盐水腹腔注射)、OAB组(环磷酰胺腹腔注射)、干预组(OAB组基础上加入ASIC3抑制剂阿米洛利),每组20只。24 h后对各组大鼠进行尿流动力学检测;取3组大鼠的膀胱组织,进行病理学检查;并通过免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot方法检测其ASIC3的表达。结果 尿流动力学检测结果显示:对照组大鼠储尿期及排尿期未见明显不稳定收缩;与对照组相比,OAB组及干预组在储尿期可见不稳定收缩,即排尿间隔缩短( P<0.01),排尿次数增加( P<0.01)。干预组与OAB组相比,排尿间隔延长( P<0.05),排尿次数减少( P<0.05)。病理学检测提示:OAB组、干预组中大鼠膀胱黏膜破坏;免疫组化染色提示:大鼠膀胱组织有ASIC3表达,主要分布于膀胱黏膜;RT-PCR及Western blot提示:OAB组中膀胱黏膜上 ASIC3基因及蛋白表达较对照组升高( P<0.01),加入ASIC3抑制剂后,干预组 ASIC3基因及蛋白表达低于OAB组( P<0.05),但仍高于正常组( P<0.01)。结论 大鼠膀胱组织有 ASIC3基因及蛋白表达, OAB大鼠膀胱组织 ASIC3基因及蛋白表达增高, ASIC抑制剂可抑制其表达,干预后,大鼠OAB症状减轻,说明膀胱组织ASIC3表达升高与膀胱逼尿肌反射亢进相关。 相似文献
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目的:研究如何使山楂茶饮料达到更好的口感和较好的保健效果。方法:以茯苓、山药、山楂3种中药材为原料,甜蜜素、木糖醇、多聚果糖为甜味剂,在单因素实验的基础上,应用响应面分析法研究该茶饮料配方的最佳方案。结果:优化后的山楂茶饮料配方的最佳方案为:山楂9.89 g,甜蜜素0.05 g,木糖醇9.05 g,多聚果糖0.50 g(注:饮料规格为300 mL)。优化后的配方做出的茶饮料为淡黄色,澄清透明,无沉淀和异味,有淡淡的药香味,酸甜可口,口感清爽,醇厚回甘,不涩。结论:该配方山楂茶饮料符合现代人对保健饮料天然、安全、健康、美味的要求。 相似文献
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目的:探讨右美托咪定辅助臂丛神经阻滞的适宜剂量和安全性。方法将80例ASAⅠ-Ⅱ上肢手术患者分为A、B、C、D组各20例,患者在臂丛神经阻滞成功后微泵分别注射0.25、0.5、0.8和1.0μg/kg右美托咪定,另选取对照组30例,注射生理盐水。观察镇静效果、手术遗忘程度及泵药后30min血流动力学的变化。结果 A、B、C、D四组的Ramsay评分和遗忘程度均明显优于对照组,且泵药后30min心率和平均动脉压均明显低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05);而B组和C组的镇静效果(Ramsay评分)、遗忘程度和心率及平均动脉压变化最为显著,与A、D组比较差异有统计学意义(P<0.05);各组间呼吸频率比较无统计学差异(P>0.05)。结论右美托咪定辅助臂丛神经阻滞的适宜剂量为0.5-0.8μg/kg,可达到最为显著的镇静效果,稳定患者的血流动力学且不引起呼吸抑制,临床价值显著。 相似文献
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目的 探讨逆行尿路造影及CT检查在骨盆骨折合并盆腔脏器损伤诊断中的价值。方法 98例骨盆骨折的患者,对其中58例怀疑合并有尿道或膀胱损伤患者进行了逆行尿道造影,其中5例做了造影后螺旋CT检查;对所有患者进行定期随访。结果 58例术前作逆行尿道造影显示:后尿道断裂19例,膀胱破裂39例。5例注入对比剂后行螺旋CT扫描均显示膀胱破裂及对比剂的分布情况。34例尿道断裂术后随访显示:12例后尿道有不同程度狭窄,1例后尿道仍存在断裂、错位,1例后尿道狭窄并憩室形成,20例尿道通畅。64例膀胱破裂术后行逆行造影检查,未见对比剂外漏。结论 逆行尿道造影是术前明确诊断尿道或膀胱损伤的可靠方法,且为术后评价尿路通畅程度提供信息;注入对比剂后行CT扫描能好的显示膀胱破裂程度以及对比剂在盆腔的分布情况。 相似文献
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