等位基因特异性PCR检测脂联素基因SNP位点方法的建立

目的:建立等位基因特异性PCR检测脂联素基因与2型糖尿病相关SNP位点的方法.方法:针对脂联素基因G531A,G545C,G11963T,T12194G和T13320C 5个SNP位点设计野生型和突变型特异性引物,第一轮PCR的上游引物或下游引物与等位基因特异性引物进行半巢式PCR.在同一SNP位点如果野生型引物出现扩...     

桂林地区乙肝患者HBV基因型分布及S基因变异研究

目的研究桂林地区HBV基因型分布、S基因突变类型以及基因型与乙肝患者血清标志物、DNA载量和S基因突变位点的相关性。方法用巢式PCR方法扩增乙肝患者HBV的S基因,经测序后与标准序列比对,构建系统树进行基因分型,分析S基因的突变位点并通过对相关氨基酸的分析判断血清型,采用t检验和χ2检验统计分析相关性。结果 84例乙肝患者HBV基因型有B型(59.5%)、C型(40.5%)。B基因型中的血清型有adw1型(84%)、ayw1型(4%)、adrq+型(10%)。C基因型中有adrq+型(88.2%),adw1型(8.8%)。S基因突变位点主要为T126I和T143M/S,突变率分别达34.1%和40.0%。基因型与患者年龄及DNA载量具相关性(P<0.05),与乙肝患者血清标志物及S基因突变位点无相关性(P>0.05)。结论桂林地区HBV基因型主要为B型,其次为C型。血清型主要为adw1型和adrq+型。S基因变异点集中,有形成优势变异株的趋势。     

脐带血有核细胞不同提取和保存方法的比较

目的:通过对脐带血有核细胞(CBNC)的提取和保存方法探讨,为脐带血有核细胞分离、储存和应用提供科学依据.方法:采用3种方法(Ficoll-Paque分离液法、1%甲基纤维素法、红细胞裂解法)分离CBNC,并应用不同储存液在不同时间对细胞进行冷冻和复苏培养.结果:红细胞裂解液法分离所获得的有核细胞数分别是Ficoll-Paque分离液方法的2.9倍(P＜0.05)和1%甲基纤维素分离方法的10倍(P＜0.01);且红细胞裂解液法所得有核细胞种类(包括淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞)也明显增多;细胞集落形成率与前两种方法比较亦有显著性差异.H3-TdR掺入的细胞活力观察发现,在4℃和20℃条件下存放24h,不同温度下细胞活力没有明显改变.以人脐血血清 DMSO为保护液在液氮储存CBNC 1年,复苏后仍有很强的细胞集落形成能力.结论:应用红细胞裂解液分离提取CBNC获得的细胞数量和种类优于其他两种方法.CBNC冻存时适当加入人脐血清,复苏后克隆形成能力明显增强.     

基于DNA损伤应答的肝细胞癌预后基因筛选和预后模型构建

目的 筛选差异表达的DDR相关基因(differential expressed-DNA damage response associated genes, DEDDR)构建肝细胞癌(HCC)预后模型。方法 使用limma R软件包从TCGA-LIHC数据集中筛选HCC样本和正常样本之间的差异表达基因(DEGs),将其与276个DDR基因取交集获得差异表达DEDDR。通过单因素Cox分析和Lasso回归分析以确定DEDDR预后模型,ROC曲线评估模型的准确性。单因素、多因素Cox回归分析DEDDR预后模型风险评分是否为HCC的预后独立危险因素,并采用国际癌症基因组联盟(ICGC)中LIHC数据作为外部数据进行验证。最后对low-DEDDR组和high-DEDDR组进行GSEA和免疫浸润分析。结果 1 361个DEGs与276个DDR基因取交集获得25个DEDDR,Lasso回归分析得到4个DEDDR(TTK、NSMCE2、NUDT1、NEIL3)用于构建预后模型。low-DEDDR组比high-DEDDR组患者具有更高的生存率。ROC曲线显示该模型预测HCC患者1年、2年和3年生存率的...     

MIN6细胞中亲磷酸酯酶A1基因表达与胰岛素分泌关系的初步研究

目的 研究亲磷酸酯酶A1(PA-PLA1)基因在小鼠分泌胰岛素细胞株MIN6中的表达及其与胰岛素分泌的关系.方法 对MIN6细胞进行不同浓度和不同时间的葡萄糖刺激胰岛素分泌的实验,酶联免疫吸附法测定细胞上清液中胰岛素分泌量,实时荧光定量PCR检测相应条件下PA-PLA1 mRNA的表达水平,线性相关分析PA-PLA1 mRNA表达水平与胰岛素分泌的相关性.结果 在一定葡萄糖浓度范围内,PA-PLA1mRNA水平随着葡萄糖浓度的升高和刺激时间的延长而升高,并与细胞胰岛素分泌量呈明显的正相关.不同葡萄糖浓度和不同刺激时间的PA-PLA1 mRNA水平与胰岛素水平的相关系数r分别为0.89(P＜0.01)和0.98(P ＜0.01).结论 小鼠分泌胰岛素细胞株MIN6中PA-PLA1基因的表达与胰岛素分泌之间具有高度的正相关性.     

双相情感性和分裂情感性精神病患者血小板5-HT2A受体结合力变化及锂盐治疗效果观察

目的研究双相情感性和分裂情感性精神病患者血小板5-HT2A受体结合力的变化及锂盐治疗的效果。方法选取双相情感性精神病患者23例和分裂情感性精神病患者23例作为观察组,另选取住院精神分裂症患者46例作为对照组。用同位素配基结合技术测定2组血小板5-HT2A受体结合力,用汉密顿抑郁量表(HAMD)和汉密顿焦虑量表(HAMA)分别评定患者的抑郁程度和焦虑程度,区分患者是否有自杀倾向和自杀行为,并判断双相躁狂型、双相抑郁型、分裂躁狂型和分裂抑郁型。观察患者采用锂盐治疗的效果。结果观察组血小板5-HT2A受体结合力明显比对照组强(P0.05);有自杀倾向和自杀行为的患者、双相抑郁型和分裂抑郁型患者的血小板5-HT2A受体结合力比无自杀倾向和自杀行为的患者、双相躁狂型和分裂躁狂型患者强(P均0.05);观察组有自杀倾向和自杀行为型及抑郁型患者锂盐治疗效果均显著低于没有无自杀倾向和自杀行为及抑郁型患者(P均0.05)。结论双相情感性和分裂情感性精神病患者的血小板5-HT2A受体结合力要比正常者强,而有自杀倾向和自杀行为的患者血小板5-HT2A受体结合力又要比无自杀倾向和自杀行为的患者强,而且血小板5-HT2A受体结合力强的患者锂盐治疗效果不及血小板5-HT2A受体结合力弱的患者。     

规范开放实验室管理 提高实验教学质量

开放实验室是培养学生创新精神和实践能力的重要场所。通过开放实验室,可以培养学生学习的主动性,进一步提高其实践能力和科研技能,对于全面提高学生的动手能力、观察能力、分析能力、综合判断能力大有益处,同时开放实验室也为学生提供了有利的创新能力培养的实验环境。本文总结了几年来桂林医学院树立科学发展观、从事开放实验室管理的经验,并结合桂林医学院实践教学的实际情况,深入探讨如何提高实践教学质量和进一步实行导师制。     

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Val158Met多态性与阿立哌唑治疗精神分裂症患者疗效的相关性研究

目的探讨儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因Val158Met多态性与阿立哌唑治疗精神分裂症患者疗效的相关性。方法选取接受阿立哌唑治疗的精神分裂症患者80例作为治疗组,选取同期愿意充当精神疾病志愿者的健康人70例作为对照组。应用即聚合酶链式反应-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)与即阳性、阴性症状评定表(PANSS)进行基因分型与精神症状评定,同时观察应用阿立哌唑治疗的临床效果。结果 2组的基因型及等位基因频率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。经阿立哌唑治疗后,患者PANSS评分明显降低(P<0.05)。3种基因型应用阿立哌唑治疗后疗效比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 COMT基因Val158Met多态性并不关联于临床症状的改善,阿立哌唑治疗精神分裂,能够有效改善患者精神状况及部分认知状况。     

教学实验室建设与管理模式改革的体会

提高实验教学水平和实验室的管理水平，培养适应现代医学发展的高素质人才，是当前高等医学院校亟待解决的问题。根据教学实验室存在的一些实际问题，桂林医学院生物技术学院在实验室建设、实验技术队伍建设、实验室管理模式等方面进行了不断的改革尝试，取得了一定成效。     

地蚕化学成分的分离鉴定

目的:对地蚕(Stachys geobombycis)乙酸乙酯部位和正丁醇部位进行系统的化学成分进行研究。方法:将干燥的地蚕块茎粗粉10 kg用95%乙醇回流提取3次,合并提取液,减压浓缩得到浸膏,将浸膏加适量水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇分别进行萃取,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。对其乙酸乙酯部分和正丁醇部分通过硅胶色谱法,LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱和半制备HPLC等技术手段进行分离纯化,分离得到单体化合物。依据各化合物的理化性质和谱学数据鉴定其化学结构。结果:从地蚕的乙酸乙酯和正丁醇提取物中分离得到12个化合物,分别为麦角甾苷(1),异类叶升麻苷(2),对羟基苯甲酸(3),latifolicinin C(4),papuline(5),亚油酸甲酯(6),α-亚麻酸(7),3,4-二羟基苯甲醛(8),尿嘧啶核苷(9),methyl 3,4-dihydroxy-benzoate(10),β-谷甾醇(11),豆甾醇(12)。结论:化合物5,10,11为首次从该属中分离得到,化合物1~4,6~9,12为首次从地蚕中分离得到。