NRP1基因敲除对放射性肺纤维化进程的影响及其作用机制

目的：观察神经菌毛蛋白1（NRP1）基因对放射性肺纤维化（RIPF）进程的影响,并探讨其在Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads通路介导的上皮间质转化（EMT）发生发展过程和细胞外基质（ECM）沉积中的作用。方法：利用Cre-LoxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT-Ⅱ）特异性敲除NRP1基因的转基因C57BL/6J小鼠并进行鼠尾鉴定,将160只小鼠按照射后不同时间点随机分为4周组、8周组、16周组和24周组,每组小鼠按随机数字表法分为野生型（Con）组、野生型单纯照射（IR）组、NRP1基因特异性敲除（KO-Con）组和NRP1基因特异性敲除+照射（KO+IR）组,每亚组10只。KO-Con和KO+IR组小鼠腹腔注射他莫昔芬特异性敲除AT-Ⅱ细胞NRP1基因,IR组和KO+IR组小鼠采用20 Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型构建完成后,利用HE染色法和Masson染色法验证模型是否构建成功;利用免疫组织化学（IHC）法检测小鼠肺组织中Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平;Western blotting法检测小鼠肺组织中NRP1、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测小鼠肺组织中NRP1、Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA表达水平。结果：HE染色和Masson染色显示RIPF小鼠模型构建成功,IR组小鼠肺部主要为放射性肺炎病理形态表现。与Con组比较,随时间的延长,IR组小鼠肺组织中NRP1蛋白和mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05）,24周时达到最高（P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长IR组和KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白及mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05或P<0.01）;与IR组比较,随时间的延长,KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,但仍高于Con组（P<0.05或P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长,IR组和KO+IR组小鼠肺组织中上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA表达水平逐渐降低（P<0.05）,间质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但KO+IR组小鼠肺组织中E-CadherinmRNA表达水平明显高于IR组（P<0.05或P<0.01）,N-Cadherin和Vimentin mRNA表达水平均明显低于IR组（P<0.05或P<0.01）。结论：NRP1基因敲除可抑制RIPF的发生发展,其机制可能与调节小鼠肺组织中Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smads信号通路的表达进而抑制EMT进程有关。     

浅谈岭南湿秘治疗体会

介绍笔者对岭南地区常见病湿秘的治疗体会.认为湿邪内外交困为岭南湿秘的主要特点,常兼有气机受遏、正气亏虚,多为虚实夹杂之象,治疗湿秘应以运脾化湿为主,佐以行气导滞,辅以扶益正气,注重摄生调护.并附验案1则.     

山蜡梅叶挥发油抗急性肺损伤的分子作用机制分析

目的 基于网络药理学和分子对接技术对山蜡梅叶挥发油（CLO）治疗急性肺损伤（ALI）的作用机制进行预测,并通过建立ALI模型对其作用通路进行初步验证。方法 采用气相色谱-质谱法（GC-MS）对CLO进行成分分析;从PharmMapper和SwissTargetPrediction数据库中获取其成分靶点,GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）和DisGeNET获取ALI相关靶点,与高通量基因表达数据库（GEO）获取的ALI差异表达基因（DEGs）在Venny 2.1.0平台上交集分析获得CLO抗ALI的潜在靶点;利用STRING 11.5对潜在靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析;从美国国家生物技术信息中心（NCBI）获取潜在靶点的组织表达情况并构建靶点组织分布图;运用RStudio 4.0.0软件对潜在靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;利用Cytoscape 3.9.1软件构建“成分-靶点-通路”网络图,筛选出关键成分和重点通路并进行分子对接验证;通过脂多糖（LPS）诱导建立ALI模型,测定大鼠血清中白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达水平,免疫组化分析IL-17蛋白在ALI大鼠肺组织中的表达水平。结果 通过GC-MS鉴定出CLO的19个成分,经靶点筛选得到18个潜在靶点,PPI分析后得到15个具有相互作用关系的靶蛋白,进一步分析发现其在肺和胸腺等组织上高度表达,通过分析“成分-靶点-通路”网络图得到关键成分乙酸龙脑酯、芳樟醇、榄香醇、异丁酸香叶酯和核心靶点基质金属蛋白酶13（MMP13）、S100钙结合蛋白A9（S100A9）、脾酪氨酸激酶（SYK）及主要通路IL-17、TNF等;分子对接结果显示,CLO关键成分与IL-17信号通路的MMP13、S100A9结合稳定。药理实验结果证实CLO可以显著降低ALI大鼠血清中的IL-6和TNF-α含量,同时抑制大鼠肺组织中IL-17蛋白的表达水平。结论 CLO可以实现对ALI的治疗作用,保护肺组织,其作用机制可能与降低ALI大鼠血清中的IL-6和TNF-α表达水平、抑制肺组织中IL-17信号通路的活化有关。     

基于"SHA 2011"的湖南省经常性卫生费用核算分析

目的:核算2018年湖南省经常性卫生费用,为有关部门制定卫生政策提供参考。方法:根据"卫生费用核算体系 2011",核算湖南省经常性卫生费用总量、服务功能、筹资方案、机构流向和受益人群费用分布。结果:2018年湖南省经常性卫生费用总量为2 028.49亿元,占GDP的比重为5.57%。其中,治疗服务费用占74.36%,预防服务费用占6.84%。经常性卫生费用中由居民家庭承担44.96%,61.02%的经常性卫生费用发生在医院,62.70%的治疗费用用于非传染性疾病,在各年龄组人群中65～69岁年龄组卫生费用最高。结论:公共筹资水平较低;应优化卫生资金配置结构;控制医院住院费用过快上涨;完善社会医疗保险制度。     

湖南省公立医院经济运行分析

[目的]了解湖南省公立医院2014-2018年经济运行状况,为湖南省公立医院改革提供政策建议和参考.[方法]通过卫生统计年报、卫生财务年报等资料收集相关数据,采用描述性统计和对比分析方法进行分析.[结果] 2014-2018年,湖南省公立医院医疗服务量稳步增长,医师人均每日负担小幅下降,病床使用率也呈下降趋势,但病床使...     

湖南省疾病预防控制机构经济运行现状分析

[目的]了解湖南省疾控机构2014-2020年经济运行状况,为疾控机构运行机制改革提供参考。[方法]通过卫生健康统计年鉴、卫生财务年报等资料收集相关数据,运用描述性分析和对比分析方法对疾控机构数量、人员情况、资产负债情况、收支状况等指标进行综合分析。[结果]2020年湖南省疾控机构数量减少至200个,在职职工人数年均增长率为-0.58%,卫生技术人员数年均增长率为-0.94%,有17.93%的员工没有编制。2014-2020年总资产年平均增速为11.62%,负债年平均增速为15.34%,资产负债率基本保持在30%左右;总收入和总支出6年间持续增长,年均增长速度分别为14.92%和13.23%。[结论]湖南省疾控机构数量严重不足,卫生人员队伍数量有待提高,资金运行状况较为严峻,财政投入机制有待优化。