急慢性MCMV感染对小鼠脾细胞Foxp3/T-bet/GATA-3蛋白表达水平的影响

目的：在整体水平研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠辅助性T细胞亚群Th1、Th2和调节性T细胞（Treg）分化特异性转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平的影响。方法：建立MCMV播散型感染模型,依据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28天为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种MCMV Smith株后第1、3、7、14、28、45天和60天各处死6只,分离脾细胞;另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。Western blot法检测脾细胞中特异转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平。结果：MCMV感染后第3天T-bet蛋白表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较有显著差异（P〈0.01）,随后下降,第28天后降至模拟感染对照组相当水平;而GATA-3蛋白表达在感染后第3天开始升高,第7天达峰值（P〈0.01）,第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于模拟感染对照组（P〈0.05）;Foxp3蛋白表达在感染后7天明显低于模拟感染对照组,第28天降至最低（P〈0.01）,第45天和60天表达明显上调,并显著高于模拟感染对照组水平（P〈0.05）。结论：感染急性期,MCMV上调Th1/Th2特异性转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期,MCMV诱导Treg特异性转录因子Foxp3蛋白表达上调,同时显著抑制T-bet和GATA-3蛋白表达,提示CMV诱导Foxp3表达增加可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因。     

1例CIITA新发突变致MHC-Ⅱ类分子缺陷病的临床与分子特征

目的探讨1例CIITA基因突变所致MHCⅡ类分子(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)缺陷病患儿临床与分子特征。方法分析1例在重庆医科大学附属儿童医院就诊的MHCⅡ类分子缺陷病患儿的临床资料、实验室检查,Sanger测序分析患儿CIITA基因序列、PCR法检测T细胞受体长度多样性,流式细胞术检测HLA-DR蛋白表达。结果患儿,男,2岁2月,3月起病,表现为反复腹泻、呼吸道感染、持续CMV感染、卡介苗病、重度营养不良,IgG、IgA下降、IgM升高,CD4~+T细胞比例下降但数量正常、CD4/CD8比例倒置。CIITA基因复合杂合突变,c.3223CT来源于父亲;c.1240delC来源于母亲,为未报道新发突变。患儿B细胞和单核细胞表面的HLA-DR表达明显降低,T细胞功能轻度受损。确诊后患儿行单倍体造血干细胞移植,因发生严重的移植物抗宿主病死亡。结论经临床、免疫学筛查、基因及流式细胞术检测,确诊MHCⅡ类分子缺陷患儿1例,其母源突变c.1240delC既往未见报道。反复多病原感染伴有CD4+细胞比例和(或)数量下降需警惕该病可能,综合临床与实验室检查行MHC-Ⅱ蛋白表达及基因测序可确诊该病,造血干细胞移植是目前根治的唯一办法,但成功率较其他联合免疫缺陷病低。     

miR-24靶向调控CARMA3抑制人结肠癌细胞系SW620增殖

目的探讨miR-24对人结肠癌SW620细胞CARMA3(含半胱天冬酶募集结构域的膜相关乌苷酸激酶蛋白3)的靶向调控作用及对细胞增殖的影响。方法培养SW620细胞,用生物信息学预测miR-24和CARMA3的靶向匹配关系,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。Lipo3000转染miR-24模拟物后,real-time PCR检测miR-24和CARMA3 m RNA表达; Western blot检测CARMA3蛋白表达; CCK8法检测SW620细胞增殖。结果 miR-24和CARMA3匹配良好,miR-24能够结合CARMA3 m RNA 3'UTR,并有效抑制其表达(P 0. 05)。miR-24能够负向调控CARMA3表达和SW620细胞增殖(P0. 05)。结论 miR-24通过靶向作用于CARMA3 m RNA 3'UTR能够负向调控CARMA3基因的表达及负向调控SW620细胞的增殖。     

中西医结合救治血栓性血小板减少性紫癜例析

病例介绍 庞某某,女,54岁.于2003年10月19日11时入院.该患在入院前7天右上肢近腕关节处发现一大块瘀斑,5天前出现头晕,2天前皮肤瘀斑增多,并出现头痛,继之神志不清,胡言乱语,躁动不安,伴呕吐,双下肢活动欠灵活,在当地医院行头CT扫描检查未见异常.既往无关节疼痛、明显脱发及反复口腔溃疡史;病前无服用药物史.查体：体温37.7℃,脉搏100次/分,呼吸20次/分,血压20.6/13.9 kPa.意识不清,躁动不安,中度贫血貌,周身皮肤散在瘀斑,浅表淋巴结不大,皮肤、巩膜黄染,光反射迟钝,无面瘫,颈软.心率100次/分,心音、心律正常.双肺未闻及干湿罗音.腹部稍膨隆,无压痛及肌紧张.     

结合学生满意度调查探讨教师在儿科多学科整合型PBL教学中的作用

目的　结合PBL教学后对学生的调查情况,探讨教师在儿科多学科整合型PBL教学中的作用。方法　重庆医科大学儿科学院构建了多学科整合型PBL,并在临床医学（儿科方向）五年制专业的部分示教课程中实施已逾2年。研究者从2016年9月28日至10月25日,针对该学院26名在专业课见习阶段接受PBL教学的本科生进行调查。在每次PBL课结束后,通过重庆医科大学网络教学平台,发放复旦大学钱睿哲等推荐的教学情况评价问卷;由学生无记名填写后回收;该调查共实施3次。用Excel 2007对问卷数据进行汇总。结果　共发放问卷77份,收回有效问卷77份。对多学科整合型PBL教学中教师应该达到的各项要求的评价方面,94.8%~97.4%的学生给予高分评价;针对教师的各项评价均达到“优”级。在对问卷开放式问题的回答中学生认为,教师在教学中能启发学生积极思考,鼓励学生发表不同的观点,为学生营造互相信任的环境,培养学生人际交流、沟通合作能力。结论　在儿科多学科整合型PBL教学中,教师应教会学生正确的学习方法,判断每名学生的知识和思维层次,针对每名学生存在问题与特点开展个性化施教。     

花椒水提取物HPLC指纹图谱研究

目的:建立花椒水提取物的HPLC指纹图谱分析方法,为其质量控制提供可靠的依据。方法:采用HPLC方法,色谱柱为COSMOSIL C18柱(4.6μm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长270 nm,流速0.8 mL/min,柱温25℃,进样量10μL。运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会2012 A版)进行相似度评价。结果:15批花椒水提取物指纹图谱中呈现6个共有峰,并指认出两个化学成分羟基-α-山椒素和羟基-β-山椒素,相似度为0.984～0.999,表明花椒水提取物指纹成分具有良好的一致性。结论:所建立的指纹图谱稳定可靠,可以为花椒药材指纹图谱的系统研究提供有益借鉴,同时有助于花椒药材的质量控制和评价。     

连梅饮中黄芩苷和小檗碱的含量测定

目的探讨连梅饮中黄芩苷和小檗碱的含量测定方法。方法采用RP—HPLC／UV法测定连梅饮中黄芩苷和小檗碱的含量;色谱柱：Agilent HC C18柱（250×4．6mm,5μm）;乙腈：0．05mol／L磷酸二氢钾溶液梯度洗脱;检测波长275nm;流速1ml／min。结果黄芩苷在0．448—112μg／ml的浓度范围,小檗碱在0．424～106μg／ml的浓度范围内线性良好：低和高浓度的黄芩苷和小檗碱的精密度（RSD）分别为3．88％、4．84％、4．63％、2．29％;加样回收率分别为（104．3±1.3）％、（97．7±6．9）％;连梅饮中黄芩苷的含量为（2．67±0．012）mg／ml,RSD为0．45％（n=3）;小檗碱的含量为（2．47±0．014）mg／ml,RSD为2．98％（n=3）。结论本方法快速、简便、准确,可用于测定制剂中黄芩苷和小檗碱的含量。     

多柔比星纳米载药系统逆转肿瘤多药耐药的研究进展

多柔比星是治疗乳腺癌、肺癌的1种有效的化疗药物。现存的主要问题是临床使用时肿瘤细胞产生多药耐药。为克服多药耐药,研究者们报道了一些利用纳米载药系统传递多柔比星的方法。纳米载药系统生物相容性好,稳定性高,具有药物控释和靶向性的优点,在药物传递中应用广泛。纳米载药系统可分为无机物纳米系统、基于脂质的纳米系统和聚合物纳米系统3种类型,在多柔比星载药中均有应用。综述近年来有关纳米载药系统最新研究文献,对其研究进展作了分析,并展望了其发展前景。     

桃红四物汤对大鼠损伤血淤证中TXB_2、6-keto-PGF_(1α)的影响

目的 从分子水平上阐释损伤血淤证的本质;揭示桃红四物汤治疗损伤血淤证的机制.方法 用定量化重力击打法制备损伤血淤证模型,造模后按要求灌胃,收集血液,检测血浆中TXB2、6-keto-PGF1α的含量.结果 模型组在2、8、24 h时,大鼠血浆中TXB2的含量先升后降,与正常对照组比较P<0.05;与模型组同时间点比较,治疗组2、8、24 h的大鼠血浆中TXB2的含量升高(P<0.01).与正常对照组比较,模型组2 h时的6-keto-PGF1α含量显著降低(P<0.01);与模型组同时间点比较,治疗组48 h时的6-keto-PGF1α含量降低(P<0.05),168 h的6-keto-PGF1α含量升高(P<0.05).结论 损伤血淤证模型大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α的含量呈现不同的时相性变化;桃红四物汤对损伤血淤证的模型大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α均具有调节作用,但其作用时相不同.     

GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 清洁级雄性C57BL/6小鼠18只,采用随机数字表法将其分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注+GRSF1过表达组,每组各6只。脑缺血再灌注组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型;脑缺血再灌注+GRSF1过表达组于造模前7天注射GRSF1过表达慢病毒。再灌注24h后行神经功能评分,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blot法检测GRSF1、GPX4、IRP2、TfR1和铁蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,脑缺血再灌注组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平升高,GRSF1、GPX4表达水平降低(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血再灌注+GRSF1过表达组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平降低,GRSF1、GPX4表达水平升高(P<0.05)。结论 过表达GRSF1通过上调GPX4抑制铁离子代谢紊乱进而减轻小鼠脑缺血再灌注损伤。