肿瘤抑制基因p16研究进展

1990年代初 ,随着肿瘤分子生物学研究的不断深入 ,人们克隆出了与癌基因相拮抗的另一类与肿瘤发生密切相关的基因—抑癌基因 ,并成为当今生命科学研究的热点。至今所发现的 1 2种抑癌基因中 ,p1 6基因以其独特的结构和抑癌功能为人们所重视。 p1 6基因与 p5 3基因相比 ,具有突变率高、分子量小、易于标定等特点 ,因而很快成为肿瘤分子生物学研究的热点。1　p1 6基因的发现与结构1 992年 ,Beach等注意在第 9号染色体存在一个黑色素瘤的易感基因 ,后来研究发现其他一些恶性肿瘤 (如淋巴细胞白血病、神经胶质瘤、间皮瘤等 )都有 9号染色体短臂 ( 9p)等位基因的缺失 [1-3 ] 。1 993年 ,Serrano等在研究与细胞周期蛋白依赖性激酶 4( CDK4)相作用的蛋白时 ,分离到了特异性 CDK4抑制蛋白 p1 6蛋白 ,并成功地克隆了其 c DNA[4]。 1 994年 ,Noborl等通过研究认为 p1 6在抑癌方面的作用远超过 p5 3,它的缺失或突变与多种肿瘤的发生有关 ,故引起学术界的广泛关注[5] 。p1 6基因定位于人第 9号染色体的 9p2 1区位 ,全长为 8.5 kb,...     

乙型肝炎与肝硬化和肝细胞癌的关系

近年来,应用免疫组织化学技术观察肝组织内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的研究屡有报导。大多数作者认为乙型肝炎在肝硬化、肝癌的发病中起重要作用;但有的流行病学研究则认为在某些地区,肝炎不是肝癌的病因。我省是肝癌高发区之一,关于这方面尚未见有报道。本文应用免疫酶法标记定位观察肝硬化、肝癌病人肝组织中HBsAg,以探讨本地区肝炎与肝硬化和肝细胞癌的关系。     

PCR-SSCP中聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法的探讨

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)是聚合酶链反应 -单链构象多态 (PCR- SSCP)分析中不可缺少的技术 ,多用于单链DNA碱基移位、插入或缺失等基因变异情况的筛查。电泳后的凝胶通常是用同位素标记 -放射自显影、溴化乙锭或银染色法染色处理 ,其中以敏感性高、操作简便、安全无毒的银染法广泛应用于各室验室 ,但在实践中发现各种不同的凝胶电泳法和银染法各有其优缺点 [1 ,2 ] ,在此基础上笔者摸索和总结一种结果明显、条带清楚的聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法用于 PCR- SSCP分析 ,使 PCR- SSCP分析结果敏感、可靠 ,可供同道参考。1　材料…     

食管鳞状细胞癌p16基因变异分析

目的:通过对p16基因变异在ESCC中的临床病理意义的研究,为ESCC的临床防治提供可靠指标.方法:采用PCR-SSCP及DNA序列分析,检测69例ESCC的p16基因第一、二外显子突变.结果:69例ESCC中p16基因变异者33例(M组)与未变异者36例(N组)在淋巴结转移率和远处转移率方面差异有显著性(P＜0.05),两组在患者年龄、性别、肿瘤长度和浸润深度方面差异无显著性(P＞0.05).结论:p16基因的变异可能是ESCC的晚期变化,它可作为判断ESCC恶性程度、发展及预后的一个重要指标,并且也为筛选高危临床病例提供客观依据.     

肿瘤细胞DNA图像分析技术探讨

肿瘤细胞ＤＮＡ图像分析技术探讨郑伟李一伟作者单位：福建医科大学病理学教研室，福州３５０００４从细胞ＤＮＡ含量的变化，可直接作为反映肿瘤增殖能力的重要生物学指标。作者应用ＶｉｄｅｏＰｒｏ３２彩色图像分析系统，对肿瘤细胞的ＤＮＡ含量进行定量分析，以提高对...     

蛋白三维构象模拟与食管鳞状细胞癌p16基因变异的功能意义评估

目的通过对人类食管鳞状细胞癌（esophagecal squamous cell carcinoma，ESCC）P16蛋白三维空间结构改变与临床病理意义的研究，为ESCC的临床防治提供可靠的指标。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性、DNA序列分析、计算机蛋白三维空间构象分析等技术检测了69例ESCC和36份癌旁正常组织标本的p16基因变异和P16蛋白三维空间结构的改变。结果（1）69例ESCC中p16基因变异33例，其中26例氨基酸残基变异位于P16蛋白功能域（M2组）；7例的氨基酸残基变异位于功能域之外（M1组）。统计分析，M2组的淋巴结转移率、远处转移率明显高于M1组（P〈0．05），M2组中临床Ⅳ期的患者显著多于前Ⅰ-Ⅲ（P〈0．05）。但在患者年龄、性别和浸润深度等方面差异无统计学意义（P〉0．05）。结论P16蛋白的4个锚蛋白重复序列是决定P16蛋白功能的关键结构，发生在4个锚蛋白重复序列内的变异将改变P16蛋白的三维空间构象而影响P16蛋白的抑癌功能，使得ESCC淋巴结和远处转移及临床晚期患者显著增多。本研究结果为筛选高危临床病例提供确实的论证和客观的分子病理学指标。     

P53,Ras基因突变及HPV感染与膀胱癌的关系

应用分子生物学方法检测３２例膀胱移行上皮癌中Ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ＨＰＶ基因，发现有３４．４％的膀胱癌Ｐ５３基因突变，２１．９％膀胱癌Ｋ－ｒａｓ基因突变，６．３％膀胱癌ＨＰＶ阳性。说明膀胱移行上皮癌的发生与Ｐ５３、Ｒａｓ基因突变及ＨＰＶ感染有关。膀胱癌的发生是多种基因的变化通过多种途径引起的。     

琼脂糖凝胶电泳法的探讨

琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化 DNA或 RNA片段常用的方法。传统的琼脂糖凝胶电泳方法不但倒胶繁琐、费时 ,而且时有 DNA扩散等非特异现象。笔者为此进行改良并应用于 32种探针的鉴定和纯化 ,结果报告如下。1　材料与方法1.1　材料　标准分子量的 DNA及待测探针 32种。仪器 :稳压稳流电泳仪 (DYY 型 ,上海医用分析仪器厂 ) ;琼脂糖电泳仪 (FD2 0 1型 ,北京六一仪器厂 ) ;紫外线核酸检测仪 (2 DJ型 ,上海顾村电光仪器厂 )。试剂的配制见参考文献 [1,2 ]。1.2　方法　 (1)用胶带将电泳床两端开口封好 ,形成一模 ,水平放置台面 (用…     

图像处理技术在血管形态定量分析中的应用

血管腔狭窄和血管壁增厚的分级，血管收缩或舒张时管腔和管壁的变化，传统的病理观察常用定性或半定量描述，这种描述方法易受主观因素影响。本室用“ＶｉｄｅｏＰｒｏ３２”彩色图像分析系统，对小白鼠的肾小动脉，肠系膜下小动脉进行了定量分析，兹介绍如下。１　材料和方法１．１　材料　１０７例小白鼠之肾小动脉，肠系膜下小动脉，经１０％福尔马林固定、脱水、浸蜡、包埋后，进行连续切片４ｍｍ厚，ＨＥ常规染色。１．２　方法　将染色后的切片置于（４Ｘ）倍数的显微镜下，对所测血管进行定位后，由彩色摄像机提取整个血管横断面图像…     

p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状瘤p21^WAF1/CIP1蛋白定量表达关系的研究

目的：从结构分子生物学深度探讨p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状癌（PTC）及甲状腺滤泡性腺瘤（TFA）中p21^WAF1/CIP1。蛋白定量表达的关系。方法：采用PCR-SSCP、DNA序列分析、计算机重构p53蛋白三维空间结构和有关分析软件、免疫组织化学和图像分析等技术进行研究。根据p53基因Exon5—8突变与否把PTC划分为Ⅰ组（p53基因突变组）和Ⅱ组（无p53基因突变组），再根据突变型p53蛋白三维构象改变的空间位点不同，把Ⅰ组分为ⅠA和ⅠB组。结果：Ⅱ组和ⅠA组的阳性细胞的平均积分光密度值（MOD）差异无统计学意义，两者均数差1．26，P〉0．05。Ⅲ组（TFA组）和Ⅱ组、Ⅲ组和ⅠB组、Ⅲ组和ⅠA组之间，尤其是ⅠB组和ⅠA组之间的MOD的差异有统计学意义，均数差分别为12．57、25．80、13．84和-1．96，P〈0．01。结论：p53蛋白空间构象的改变与p21^WAF1/CIP1蛋白定量表达的变化之间存在着质变与量变的关系。