鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库的构建及鼻咽癌表达上调基因的筛选

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方常见的上皮源性恶性肿瘤,流行病学研究调查,鼻咽癌的发生与EB病毒感染、某些环境理化因素及遗传因素有关,但其分子机理仍不十分清楚.鼻咽癌的发生可能涉及到多个瘤基因的激活和抑瘤基因的失活,但目前国际上仍未获得鼻咽癌特异相关基因.为了进一步筛选与克隆鼻咽癌特异相关基因,我们构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库,以供进一步深入研究.     

泽漆汤对肺癌原位模型小鼠的抑制作用

目的:建立小鼠肺癌原位模型,用泽漆汤干预模型小鼠以观其抑瘤功效,并探索潜在作用机制。方法:通过肺内注射1×10~5个LLC-luc细胞建立非小细胞肺癌原位小鼠模型,用泽漆汤(0. 171 g·m L~(-1))或生理盐水对模型小鼠进行每日灌胃,连续35 d,观察小鼠的外观表现(精神、毛发、食欲等),生存期及泽漆汤抑瘤效果;每周活体成像检测小鼠肺内荧光信号强弱。流式细胞术检测模型小鼠脾脏中NK细胞数量,CD107α实验检测泽漆汤用药后小鼠脾脏中NK细胞脱颗粒情况。采用Kromasil 1005 C_(18)色谱柱,以0. 025%磷酸-乙腈梯度洗脱,流速1. 0 m L·min~(-1),柱温35℃,检测波长265 nm,建立泽漆汤指纹图谱并采用中国药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)对10批样品指纹图谱进行评价以完成对泽漆汤的质量控制。结果:泽漆汤能够明显抑制肺癌原位模型小鼠肺部荧光信号(P 0. 05,P 0. 01),延长小鼠生存期(P 0. 01);泽漆汤干预后小鼠体内肿瘤中NK细胞显著增多(P 0. 01),CD107α脱颗粒也显著增加(P 0. 01)。并且,对泽漆汤指纹图谱的相似度评价结果显示,10批泽漆汤水提液的指纹图谱相似度均≥0. 9,表明不同批次间差异较小。结论:泽漆汤可能通过上调小鼠体内NK细胞数量,增强其脱颗粒能力,从而达到抑制小鼠体内肿瘤生长,延长其生存期的作用。泽漆汤HPLC指纹图谱相似度评价可反映泽漆汤质量的稳定性,为后续研究提供用药基础。     

黔产莪术油对直肠癌SW1463细胞株分泌Toll样受体及相关免疫因子的影响

目的:通过研究黔产莪术油对直肠癌SW1463细胞中死亡因子受体(Fas)的蛋白表达及分泌的免疫因子Toll样受体2(TLR2),Toll样受体4(TLR4),白细胞介素-10(IL-10),癌基因C-Raf转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,探讨黔产莪术油对肿瘤细胞的免疫效应。方法:将水蒸气蒸馏提取的黔产莪术油,配置成空白组,黔产莪术油80,120,160,200 mg·L-1组,作用于直肠癌细胞SW1463细胞24 h后,采用免疫酶联免疫吸附测定(enzyme Linked immunosorbent assay,ELISA)检测不同质量浓度黔产莪术油对IL-10水平的影响,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Fas,TLR2,TLR4,C-Raf,TGF-β1蛋白表达对直肠癌细胞SW1463的增殖抑制作用。结果:ELISA检测发现,与空白组比较,莪术油组IL-10水平随着药物浓度的升高表达降低(F=23.11,P0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,莪术油组随着药物浓度的升高,TLR2,TLR4,C-Raf蛋白表达显著降低(P0.01);Fas,TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。结论:黔产莪术油抑制SW1463细胞的作用免疫作用机制可能与下调Fas/Fas L通路有关,使得Toll样受体TLR2,TLR4蛋白表达下调,导致相关因子TGF-β1的表达下调,从而使得细胞凋亡,起到免疫增强作用。     

Isolation of tumor diferentially expressed genes by mixing probes library screen

Morbid alterations of human diseases, whether caused by the mutations of single gene or polygenic damnifications are determined mainly by the abnormity of gene expression. Therefore, the genetic causation of the morbid alterations may be explored through comparison of the gene expression of the pathologic cells to normal cells. At present, the methods such as differential display of messenger RNA(mRNA DD)[1], cDNA representational difference analysis (cDNA RDA)[2] and suppression subtrac…     

BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨鼻咽癌负相关基因BRD7对鼻咽癌细胞系HNE1生长的影响。方法：构建BRD7基因真核表达载体pcDNA3.1( )/BRD7重组体,采用脂质体介导转染技术,将BRD7真核表达重组粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系HNE1,Southern杂交和RT－PCR分别检测外源性DNA的整合和BRD7基因的表达,并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染BRD7基因的HNE1生长倍增时间为53h,较HNE1（23．9h)和空载体转染HNE1（24．1h）明显延长,流式细胞仪表明,BRD7表达升高延缓细胞由G0－G1期进入S期,BRD7转染HNE1在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（P＜0．01）,裸鼠接种试验显示BRD7基因转染细胞HNE1生长速度受到抑制。结论：BRD7基因重表达有助于HNE1的恶性表型的逆转;BRD7是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。     

RNA干涉的研究进展

ds RNA介导的有效的和特异性的基因封闭现象已在线虫、果蝇、斑马鱼等多种生物体中发现和证实。许多研究者对 RNA干涉 (RNAi)现象的分子机制、生理功能和应用等进行了探索。预示 RNAi技术体系的建立和完善将在基因功能研究、信号转导研究及基因治疗等方面发挥重大作用     

医用纳米材料及其标记物的电镜制样方法探讨

随着纳米技术的飞速发展及向医学领域的日益渗透 ,医用纳米材料及其相关技术的应用将在医学领域发挥巨大作用。目前 ,以纳米颗粒为基础的医用载体系统的研究与开发正蓬勃兴起 ,并取得了可喜的成绩[1] 。由于纳米材料特殊的理化性质 ,可望解决药物靶向性、控释性及病毒载体免疫性等长期困扰医学界的难题[2 ] ,这必将为医学的发展提供新的契机。纳米颗粒是一种直径 0 .1～ 10 0nm之间的超微粒子 ,需放大数万倍才可见 ,因此电镜正成为除扫描隧道显微镜、原子力显微镜、扫描探针显微镜外另一常规检测工具 ,且较后三者更价廉、方便、实用。近 1年…     

小鼠肿瘤肺转移模型及其应用进展

尽管肿瘤的早期诊断和治疗手段不断提高,转移依然是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因。肺由于独特的生理、病理特征,是恶性肿瘤最容易发生远端转移的器官。肿瘤肺转移具有难以预测性,并且可能导致无法逆转的损伤。目前尚未发现肿瘤转移的确切机制和针对其有效的靶向防治手段。中医药凭借独特的辨证论治理论体系,在肿瘤肺转移的防治方面已有显著进展,但其应用方法和具体作用机制等仍待深入的研究和探索。为此,需要更精准、更符合临床疾病发生发展规律的动物模型作为研究媒介,故建立模拟肿瘤患者肺转移的动物模型已成为肿瘤肺转移研究的关键。通过介绍尾静脉注射法、乳垫注射法、皮下注射法、骨髓注射法、组织块原位移植法和基因工程小鼠等常用的肺转移模型的构建方法、应用以及评价,以期能够为研究肺转移小鼠模型的选择提供参考,为肿瘤肺转移的早期诊断、预防治疗及其发病原因、内在分子机制探索等提供更好的研究平台。此外,小鼠肺转移模型的发展还需思维广度及深度的拓展,对现有的模型合理、灵活的叠加运用及多学科的交叉合作,以建立更符合临床实际的动物模型,获得更可靠的研究结果。