刚地弓形虫RH株速殖子外泌体的分离与鉴定

目的: 分离与鉴定刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株速殖子外泌体。方法: 收集弓形虫速殖子与人结肠癌SW480细胞共培养上清液,经离心、过滤,采用基于聚合物沉淀技术的试剂盒法分离外泌体;透射电镜观察外泌体形态特征,纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）检测外泌体粒径大小,蛋白质印迹法检测外泌体经典标志分子CD63、HSP70以及弓形虫特异蛋白表面抗原1（surface antigen 1,SAG1）、棒状体蛋白16（rhoptry protein 16,ROP16）、ROP18和致密颗粒蛋白1（dense granule protein 1,GRA1）。结果： 从弓形虫与细胞共培养上清液中分离出囊泡样物质,其外形为圆形,有完整的膜结构,直径为30~150 nm;表达外泌体特异性蛋白CD63、HSP70;检测出弓形虫特异性蛋白SAG1、ROP16、ROP18和GRA1。结论： 从弓形虫速殖子与SW480细胞共培养上清液中获得弓形虫外泌体。     

肺炎克雷伯菌、类肺炎克雷伯菌和变栖克雷伯菌的研究进展

肺炎克雷伯菌临床分离株是一种有荚膜的革兰阴性粗短杆菌,是临床上重要的机会致病菌。肺炎克雷伯菌临床分离株基因间存在差异,依据系统发育树可分为肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KpⅠ)、类肺炎克雷伯菌(Klebsiella quasipneumoniae, KpⅡ)和变栖克雷伯菌(Klebsiella variicola, KpⅢ),三者生态分布、基因型、耐药性、毒力特征以及致病性存在显著差异,为感染性疾病精准治疗带来新的挑战。本文对KpⅠ、KpⅡ、KpⅢ的鉴定、流行特点及致病特点的最新研究进展进行综述。     

阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子的原核表达及多克隆抗体制备

目的: 原核表达阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor of Trichomonas vaginalis,TvMIF）并制备多克隆抗体。方法: 采用PCR技术扩增TvMIF基因,并克隆至pTG19 T载体,酶切及测序鉴定后,再定向插入pET 30a(+)载体。将重组载体转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,用IPTG诱导蛋白表达。采用镍柱亲和层析法纯化TvMIF蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,蛋白质印迹法检测多克隆抗体。结果： 从阴道毛滴虫cDNA中扩增出TvMIF基因片段,测序结果与基因库收录序列一致。成功构建pET 30a TvMIF重组质粒,重组TvMIF蛋白约为15.5 kDa,以可溶性蛋白形式存在。获得TvMIF重组蛋白的多克隆抗体,蛋白印迹法检出TvMIF的特异性条带。 结论： 成功获得阴道毛滴虫MIF蛋白并制备了多克隆抗体,可用于后续研究阴道毛滴虫致病机制。     

敲低lincRNA-COX2抑制单核细胞增生李斯特菌感染相关的巨噬细胞的凋亡和M1型极化

目的 探讨长链基因间非编码RNA环加氧酶2(lincRNA-COX2)在单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染所致RAW264.7细胞凋亡和细胞极化中的作用。方法 体外培养RAW264.7细胞,分为未感染对照组、 Lm感染组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、 si-NC联合Lm组、 lincRNA-COX2小干扰RNA(si-lincRNA-COX2)组、 si-lincRNA-COX2联合Lm组。Lm感染复数(MOI)=10感染RAW264.7细胞,细菌感染6 h后收集细胞,倒置荧光显微镜和实时定量PCR检测siRNA转染抑制效率,Western blot法检测细胞中裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 caspase-3、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、精氨酸酶1(Arg1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平。结果 Lm感染RAW264.7细胞后,c-caspase-3/caspase-3、 BAX/Bcl2比值、 iNOS蛋白水平较对照组显著上调,而Arg1水平较对照组下调。敲低lincRNA-COX2可抑制Lm感染引起的RAW2...     

NLRP3炎症小体介导单核细胞增生李斯特菌感染小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡

目的:探讨单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)感染引起小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡作用机制.方法:体内实验,C57B/6小鼠分为Lm组和阴性对照组(NC组),分别经小鼠尾静脉注射Lm菌液5×104 CFU/鼠和无菌PBS,24 h后取脾脏、肝脏、脑组织,蛋白质印迹法检测焦亡及核苷酸结合...     

单核细胞增生李斯特菌感染对Bewo细胞炎症因子及迁移能力的影响

目的 研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染致Bewo细胞炎症因子表达及迁移能力的变化,并探讨其可能的机制。方法 Lm以MOI=10感染Bewo细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bewo细胞炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平;划痕试验及Transwell试验检测Bewo细胞的迁移能力;Western Blot检测Bewo细胞迁移相关蛋白(MMP2,MMP9,TIMP-1)以及MAPK家族蛋白(p-p38MAPK,p38MAPK,p-ERK1/2,ERK1/2)的表达水平。结果 Lm感染Bewo细胞后炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平与感染1 h相比均升高。Western Blot结果表明,随着感染时间的延长,迁移相关蛋白MMP2逐渐升高;MMP9和TIMP-1变化趋势一致,先上升后下降;Lm感染致MAPK家族p38MAPK及ERK1/2蛋白磷酸化水平升高。结论 Lm感染Bewo细胞后导致细胞迁移能力增强,MMP2在调控细胞迁移能力的变化中起主要作用,Lm感染可以激活Bewo细胞MAPK家族p38MAPK及ERK1/2信号通路。