H2S通过调节铁死亡中Xc-/GPX4通路减轻脓毒症心肌损伤

目的 探讨硫化氢供体NaHS能否通过抑制氧化应激,激活铁死亡中Xc-/GPX4信号通路改善脓毒症心肌损伤。方法 脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞H9c2形成脓毒症心肌损伤体外模型,分为Control组、LPS组、LPS+NaHS组。采用试剂盒检测心肌细胞活力、Fe²⁺、LDH、CK-MB变化,测定氧化应激指标GSH、MDA水平,荧光探针检测细胞ROS、线粒体膜电位水平变化,Western blot检测铁死亡调控蛋白SLC7A11、GPX4表达水平。结果 与Control组相比,LPS刺激后H9c2细胞活力下降,Fe²⁺浓度升高,GSH、MDA、ROS水平升高,线粒体JC-1单体增多,铁死亡调控蛋白SLC7A11、GPX4的表达水平下降,细胞损伤增加(P<0.05)。与LPS组相比,NaHS可减轻LPS诱导的H9c2细胞损伤和Fe²⁺浓度升高,降低LPS诱导的H9c2细胞氧化应激的水平,增加了铁死亡调控蛋白SLC7A11、GPX4的表达水平(P<0.05)。结论 硫化氢供体NaHS减轻脓毒症心肌损伤的机制可能与...     

穿心莲内酯减轻脂多糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡机制

目的 探讨穿心莲内酯(AG)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肾小管上皮细胞(HK-2细胞)铁死亡的影响及其作用机制。 方法 采用LPS处理HK-2细胞, 模拟脓毒症HK-2损伤体外模型, 进一步用5、10、20、40 μmol/L的AG进行干预, 将细胞随机分为对照组(Control)、LPS组、LPS+二甲亚砜(DMSO)组、AG组。采用CCK-8法检测细胞活力, 筛选出最适LPS和AG浓度; 比较各组中细胞形态变化, 肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平, 以及铁死亡调控蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白(Ferritin)的表达水平, 评估AG处理对细胞的保护作用。 结果 与Control组相比, 10 μg/mL LPS诱导的HK-2细胞中细胞活力及GSH含量下降, 细胞皱缩、贴壁能力差, 氧化产物MDA和ROS含量以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平明显升高, SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低, Ferritin蛋白表达水平增高, 差异均有统计学意义(均P＜0.05)。而在使用AG干预后, 与LPS组相比, 细胞活力升高, GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平升高, 而Ferritin蛋白表达水平降低, 差异均有统计学意义(均P＜0.05);MDA含量和ROS荧光强度以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平下降, 差异均有统计学意义(均P＜0.05)。 结论 AG对LPS诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用, 其机制可能是激活SLC7A11/GPX4通路, 减少氧化应激, 上调抗氧化酶活性, 减轻细胞铁死亡。     

白藜芦醇对大鼠脓毒症心肌病铁死亡的影响及机制

目的 探讨白藜芦醇对大鼠脓毒症心肌病铁死亡的影响及作用机制。方法 采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症心肌病模型,将48只6～8周龄健康SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、白藜芦醇组、Ex527(SIRT1抑制剂)组。在不同组别中,通过心肌苏木精-伊红(HE)染色、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)观察心肌损伤程度,透射电镜观察心脏线粒体变化,试剂盒及免疫荧光检测铁离子浓度、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)、活性氧自由基(ROS)铁死亡相关信号表达,Western blotting方法检测心肌SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表达水平。结果 与模型对照组比较,白藜芦醇组可明显改善心肌损伤程度,减轻线粒体铁死亡改变,显著抑制铁死亡相关信号表达(P<0.05),增加SIRT1、GPX4、FTH-1蛋白表达水平(P<0.05),而使用Ex527预处理大鼠可逆转上述改变。结论 白藜芦醇通过SIRT1/GPX4信号途径抑制心肌铁死亡,改善脓毒症心肌病,其机制与减少ROS产生、减轻线粒体损伤密切相关。     

芳香新塔花总黄酮调控PI3K/Akt/mTOR通路改善动脉粥样硬化的作用机制研究

观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠自噬和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控，探讨芳香新塔花总黄酮抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的作用机制。ApoE^-/-小鼠喂食高脂饲料8周，建立体内AS实验模型，随机分为5组(模型组、阳性对照组及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组),普通饲料喂食C57BL/6J小鼠设为空白组。灌胃给药12周后取出血清和主动脉，全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平；油红O染色法观察小鼠主动脉斑块面积；苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉斑块及病理变化；免疫荧光法检测主动脉中P62、LC3的表达；蛋白免疫印迹法(Wes...