细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2诱导表达条件探索

目的 探索细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的最佳诱导表达条件,并对其蛋白结构进行预测。方法 构建p ET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组质粒,将其转化至Ecoli.BL21(DE3)细菌中,选择不同的时间段和温度,用不同浓度的IPTG进行诱导蛋白表达。将得到的菌液通过超声破碎,经离心后用SDS-PAGE分别分析上清和沉淀中重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的表达情况。Western Blot鉴定重组蛋白表达。鉴定成功后进行大量诱导表达。采用生物信息学的方法,使用在线软件SWISS MODEL对HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白三维结构进行预测。结果 HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白在28℃条件下,诱导4 h,IPTG的浓度为0.2 mmol/L时可溶性蛋白表达量达到最大。蛋白的相对分子量约为29 kD,结果与预期相符。其蛋白三维结构的预测与2×44.1.A结构的相似程度为78.13%。结论 探索出HIS-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白最佳诱导表达条件,并成功预测...     

包虫病基因重组疫苗的研究

分子生物学技术的快速发展,使基因工程疫苗的研究更加深入。与此种新型疫苗相比传统疫苗已体现出预防效果不够理想,不容易保存,技术难度大,成本高等诸多缺陷。因此,对基因工程疫苗的开拓研究已成为当前疫苗领域的一个热点。本文简要概述了近年来包虫病基因工程疫苗研究现状及其发展前景。     

细粒棘球绦虫基因型的微卫星分析

目的利用细粒棘球绦虫微卫星序列为分型标记,建立高效、快速、简便的鉴定细粒棘球绦虫基因型技术。方法采用FAM和HEX两种不同荧光染料分别标记细粒棘球绦虫的Sca、Emsk、C106微卫星序列引物,利用荧光PCR-基因扫描技术鉴定新疆不同地区CE病人细粒棘球绦虫分离株的基因型。结果44例CE病人的66个分离株标本经PCR及微卫星标记鉴定均为细粒棘球绦虫,其中43例病人的65个细粒棘球绦虫分离株标本为G1基因型;1例病人的1个细粒棘球绦虫分离株标本为G6基因型。结论微卫星标记能够从基因水平快速、精确地鉴定新疆细粒棘球绦虫分离株的基因型,对细粒棘球绦虫的流行病学和致病性研究有重要价值。     

缺血性心肌病合并持续性心房纤颤治疗中经皮冠状动脉支架植入术对患者心功能的影响

目的 对缺血性心肌病合并持续性心房纤颤的临床治疗中实施经皮冠状动脉支架植入术的相关情况进行分析,探讨其在心功能改善中的作用.方法 将选取的36例缺血性伴持续性心房纤颤患者随机分为两组,每组18例,分别给予传统药物治疗和经皮冠状动脉支架植入术治疗,观察患者心功能的变化情况.结果 经心电图监测结果显示,治疗后手术组的各项指标改善效果更为显著;手术组未出现亚急性血栓和急性血栓,也未出现支架断裂和脱载的情况.两组用药后均无任何不良反应.常规组7例患者二次住院,手术组3例患者二次住院.结论 在缺血性心肌病合并持续性心房纤颤的临床治疗中,经皮冠状动脉支架植入术是一种有效改善心功能的重要方法,值得推荐.     

新疆老年人群TTV感染状况的初步研究

目的了解输血传播病毒（TTV）在老年易感人群中的感染情况。方法采用套式PCR方法,对214例老年易感人群血清进行TTV—DNA的检测。结果在214例老年易感人群中共检出71例TTV—DNA阳性血清,总检出率为33．2％,TTV—DNA阳性率与民族、性别无统计学差异（χ^2=1．14,P〉0．05）;其中甲型肝炎老年病人中TTV—DNA阳性率为28．6％,乙型肝炎老年病人中TTV—DNA阳性率为36．0％,HBsAg（＋）携带者的TTV—DNA阳性率为29．1％,各组相比差异无统计学意义（χ^2=0．779,P〉0．05）。结论新疆老年易感人群中存在较高的TTV感染,TTV的感染可能与肝炎有关。     

细粒棘球蚴Eg95重组蛋白表达及其血清学反应的研究

目的 诱导表达和纯化细粒棘球蚴Eg95抗原重组蛋白,对其与CE病人血清学反应情况进行研究.方法 IPTG诱导pET28a-Eg95原核表达质粒,表达和纯化Eg95重组蛋白,SDS-PAGE 电泳对其进行初步鉴定,Western blot法检测其与中间宿主CE病人血清学反应情况.结果 pET28a-Eg95重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE 电泳显示相对分子量约为15kDa.Western blot 结果 表明,pET28a-Eg95重组蛋白能被CE病人血清识别,11例CE病人血清中8例呈阳性反应.结论 细粒棘球蚴Eg95抗原存在于中间宿主CE病人体内,Eg95蛋白作为保护性抗原可能成为CE病人术后辅助性治疗的手段之一.     

细粒棘球蚴egG1Y162疫苗对小鼠免疫应答的研究

目的 观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法 实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗体滴度,并检测各组血清抗体IgG的动态变化。第10周用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)检测免疫小鼠脾淋巴细胞体外刺激后的增殖反应,用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞凋亡率。结果 egG1Y162疫苗免疫组小鼠在第2周免疫后检测到抗体,在免疫第10周,抗体滴度可达到1∶25 600。血清抗体IgG在免疫第2~10周不断升高,并在免疫第10周达到最高水平。MTT法显示egG1Y162疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在体外能被egG1Y162疫苗特异性刺激增生。疫苗刺激后疫苗组增殖水平显著高于对照组、佐剂组和正常组(P<0.05)。AnnexinV-FITC和PI双染色法结果显示实验组小鼠脾细胞原液和ConA刺激细胞凋亡发生率均显著低于对照组(P< 0.01),每组ConA刺激脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液培养(P< 0.01)。结论 细粒棘球绦虫egG1Y162疫苗可诱导小鼠产生高效价抗体并可刺激脾淋巴细胞增殖活化、抑制脾细胞凋亡,特异性抗体反应和脾淋巴细胞增殖活化促进机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应,共同协调诱导机体产生免疫应答反应。     

中药复方对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的 观察中药复方对实验性大鼠肝纤维化的影响. 方法 按照完全随机化原则将80只实验动物Wistar大鼠随机分为8组,每组10只,分别为正常对照组、模型对照组、中药金三莪预防组、中药复方预防组、中药金三莪治疗组、中药复方低剂量治疗组、中药复方中剂量治疗组、中药复方高剂量治疗组.以40%四氯化碳石蜡油作为腹腔造模剂进行腹腔造模,预防组从造模之日起给予中药复方和中药金三莪治疗,治疗组从造模4 w起给予中药复方和中药金三莪治疗.病理切片观察大鼠肝纤维化的变化情况. 结果 经过预防和治疗之后大鼠肝纤维化程度有比较明显的改善. 结论 该中药复方可能通过抗炎、保肝等综合作用起到抗肝纤维化的作用.     

促凋亡基因PDCD5 在新疆哈萨克族与汉族食管癌中的表达及临床意义*

目的:探讨新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌组织中PDCD5 mRNA 的表达及其临床意义。方法:以PDCD5 mRNA 为靶基因运用RT-PCR 法检测40例食管鳞癌患者中PDCD5 mRNA 的表达（哈萨克族18例、汉族22例）。 结果:40例食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中PDCD5 mRNA 表达阳性率为80.0% 、80.0% 、87.5% ,差异均无统计学意义（P>0.05）。 半定量光密度计数后PDCD5 mRNA 表达量在食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中分别为0.764 4 ± 0.144 4、0.934 1 ± 0.163 1 和1.870 3 ±0.476 7,其表达在癌组织与正常组织中差异有统计学意义（P<0.05）。 PDCD5 mRNA 的表达与分化程度有无淋巴结转移均无相关性。结论:PDCD5 mRNA 的表达在不同民族之间无显著性差异。PDCD5 mRNA 的表达与食管癌的发生、发展、远处转移和细胞分化程度均无密切相关性,可以通过增加例数对其关联性进行深入研究;PDCD5 mRNA 在食管癌患者癌组织中的表达量低于正常组织,本研究可能对食管癌的治疗提供理论依据。      

细粒棘球蚴EgG1Y162-2基因的克隆、蛋白表达及纯化鉴定

目的:构建细粒棘球蚴pET30a-EgG1Y162-2原核表达重组质粒,诱导表达EgG1Y162-2重组蛋白,为研制细粒棘球蚴疫苗提供研究基础。方法:以细粒棘球蚴cDNA为模板,利用PCR法合成EgG1Y162-2目的基因,经限制性内切酶 EcoRⅠ和 HindⅢ双酶切后连接到原核表达载体pET...