广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

广东2003年末SARS患者冠状病毒抗原抗体动态特征分析

目的分析SARS-IgG、SARS-IgM、核壳蛋白-IgG抗体和核壳蛋白抗原的变化特点并探讨其意义。方法采用酶联免疫方法对2003年末至2004年初新发4例SARS病人的系列血清进行上述4项的滴度检测。结果在病人较早期的血清中可以检测到核壳蛋白抗原，随着抗体水平的升高，抗原含量迅速下降。抗体E升下降快，在最高水平维持时间短，并且除第1例外，其余3例的抗体滴度均小于1：100，核壳蛋白抗体变化规律与总的IgG抗体一致，但滴度更低。结论抗体变化规律与前次流行不同，抗体水平变化快，应注意及时采集标本。抗原检测可作为一种实验室诊断依据。核壳蛋白抗体可考虑用于早期诊断。     

广东省首例人高致病性禽流感病例病原体的分离与初步鉴定

人禽流感病是由甲型禽流感病毒（AIV）某些亚型的毒株感染人引起的急性呼吸道传染病。人高致病性禽流感病的潜伏期一般为1～3d，起病急，早期表现类似普通流感。主要症状为发热，伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛和全身不适。2006年2月22号，广州市一家医院发现1名患者出现“流感样”症状．表现为发热、咳嗽和白细胞数降低等发热肺炎症状，3月3日因治疗无效死亡。     

广东省不同人群SARS病毒抗体水平调查

目的对不同人群进行SARS-IgG抗体水平检测，分析SARS流行规模和特征，评价暴露的危险性，了解人数中是否存在SARS病毒隐性感染，为寻找SARS病毒传染源提供线索。方法抽取7708份不同人群标本，按临床症状和暴露因素分为临床确诊SARS病人、病人或污染物的接触者、普通健康人群和动物销售人员4类，采用酶联免疫方法(ELISA)进行SARS-IgG抗体检测，用免疫荧光法(IFA)复核，并结合流行病学资料进行分析。结果127例临床确诊SARS病人抗体阳性率为66．9％；密切接触者中女性发病率高于男性；SARS病人或其污染物的密切接触者抗体阳性率为0．88％；动物销售人员为13．4％；野生哺乳动物销售者的抗体阳性率显著高于其他动物销售者，普通健康人群未检出抗体阳性。低年龄健康人群ELISA检测阳性率为2．06％，高于总体水平。结论人群总体抗体水平很低，普通健康人群无SARS冠状病毒抗体，但可能存在某种可与SARS冠状病毒起交叉反应的抗体；有无接触史是影响抗体阳性率的重要因素；密切接触者可能存在隐性感染；野生动物可能是本次SARS的传染源。     

人禽流感死亡病例不同组织器官中H5N1病毒的检测分析

目的了解H5N1病毒在人禽流感死亡病例组织器官中的分布和含量。方法在BSL-3实验室，测定H5N1禽流感病毒分离株的TCID50，并采用荧光定量PCR制作标准曲线；将人禽流感死亡病例的尸解标本，包括心、肝、脾、肺、肾、脑等组织标本研磨处理后，进行荧光定量PCR检测，并根据标准曲线推算H5N1禽流感病毒的病毒载量。结果心、肝、肾、脑组织标本中H5N1禽流感病毒检测为阴性，在肺、脾组织标本中检测到H5N1病毒，病毒载量分别为10^6.3TCID50／ml和10^4.55TCID50／ml。结论除呼吸系统外，在脾组织中也存在H5N1禽流感病毒。     

一起急性上呼吸道病毒感染暴发流行的病原学分析

目的探讨2006年2月下旬汕头市某小学暴发的一起急性上呼吸道病毒感染的病原学。方法采集患者急性期咽拭子标本进行腺病毒、B型流感病毒和呼吸道合胞病毒的核酸检测,对PCR结果进行序列测定和分析;咽拭子标本用Hep-2细胞进行病毒分离;用患者双份血清进行腺病毒中和实验和B型流感病毒的血凝抑制试验。结果35份患者的咽拭子标本中用PCR扩增同时检测到了12份腺病毒(阳性率为34.3%)和15份B型流感病毒(阳性率为42.9%),呼吸道合胞病毒核酸检测阴性。序列分析表明腺病毒与江苏省2005年分离的毒株以及广东省2005年分离的3型腺病毒毒株的相似性高达98%,而B型流感病毒与孟斐斯分离到的B型流感病毒同源性高达99%。咽拭子标本用Hep-2细胞未分离到腺病毒和B型流感病毒。病人双份血清的腺病毒中和试验显示抗体没有4倍增长,但腺病毒阳性者晚期血清抗体几何平均值为12.1,腺病毒阴性者即为1.4。而B型流感病毒双份血清血凝抑制试验表明恢复期抗体比较急性期抗体有4倍或以上增长。结论该次急性上呼吸道感染是由B型流感病毒引起的,但可能先前感染过腺病毒。     

广东人H5N1毒株PB2基因进化和特性

目的:通过对人禽流感H5N1毒株PB2基因序列的变异分析,揭示毒株PB2基因特征与进化.方法:检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB2基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析.结果:1997/2006 48株毒株PB2基因核苷酸序列同源性分成两组,1997/1998毒株为第一组(G1),2003/2006毒株为第二组(G2).PB2基因错义置换导致101个氨基酸位点变异,占比例13.3%(101/759).PB2基因Ks值为39.4×10-6～63.4×10-6 Nt/d,Ka值为3.36×10-6～5.11×10-6 Nt/d;提示PB2基因进化主要受到自发突变影响.2003/2006毒株(包括毒株GD-01-06)仅保留一个糖基化位点(NPT301-303),丢失3个糖基化位点,可能影响蛋白致病性和抗原性.结论:目前PB2基因进化分成两组,主要受到除自发突变影响;PB2基因丢失3个糖基化位点可能影响蛋白致病性.人禽流感H5N1毒株PB2基因在自然界变异非常频繁,不断变异将影响H5N1毒株在人-人传播能力和引发大流行.     

广东省野生动物接触人群SARS冠状病毒感染危险因素分析

目的 探索广东省特定人群野生动物接触与SARS冠状病毒感染的关系。方法采用ELISA法和间接免疫荧光试验（IFA）联合检测野生动物接触人群血清SARS冠状病毒IgG抗体（SARS-IgG），以判断SARS冠状病毒感染情况；用非条件logistic回归分析野生动物接触与SARS冠状病毒感染之间的关系。结果单因素非条件logistic回归分析结果表明，接触山猪、黄掠、果子狸、蛇、穿山甲、巨蜥、猴和山鸡是SARS冠状病毒感染的可疑危险因素，OR值分别为5．81（P=0．000）、4．64（P=0.000）、3．31（P=0.000）、1．93（P=0.039）、12．98（P=0.029）、19．89（P=0.001）、11．05（P=0．001）和2．21（P=0．018）；与非野生动物从业人员相比，从事野生动物销售、果子狸饲养和在经营野生动物酒家从事野生动物相关职业是SARS冠状病毒感染的可疑危险因素，OR值分别为31.55（P=0.001）、14.32（P=0.018）和8.14（P=0．043）；多因素非条件logistic回归分析结果表明，接触山猪和果子狸是SARS冠状病毒感染的可疑危险因素，OR值分别为4．97（P=0.002）和2.95（P=0．022）；与非野生动物从业人群相比，从事野生动物销售是SARS冠状病毒感染的可疑危险因素，OR值为31．99（P=0．004）。结论从事野生动物销售可能增加SARS冠状病毒感染机会；山猪和果子狸是广东省SARS冠状病毒感染的可能来源。     

SARS-CoV毒株E、M、N和S基因分子变异研究

目的通过对SARS-CoV毒株基因序列的变异分析,揭示SARS-CoV毒株出现和流行与基因进化的关系.方法对广东地区SARS-CoV毒株进行序列分析,其余毒株序列从GenBank检索,采用DNAstar 5.0软件,对检索的SARS-CoV的E、M、N、S基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合临床资料对变异毒株进行流行病学分析.结果以果子狸冠状病毒(SZ-3)为基准,102株人类毒株中,6株毒株E基因的4个氨基酸发生置换,两株毒株发生缺失变异;果子狸毒株M基因的第5位丝氨酸置换为人类毒株甘氨酸并减少1个糖蛋白位点,此外M基因有38株毒株发生8个氨基酸置换变异;6株毒株N基因发生氨基酸置换,3株毒株发生缺失变异;人类毒株S基因中9个氨基酸全部发生变异并增加1个糖蛋白位点,与果子狸毒株不同比例占0.72%(9/1255);部分毒株中S基因的27个氨基酸在发生置换变异,7株毒株发生缺失变异.结论冠状病毒S基因中9个氨基酸置换和1个糖蛋白位点影响,可能导致人类SARS-CoV毒株出现和SARS流行;SARS流行持续和传播扩大与S基因进化变异相一致.所以认为,SARS-CoV毒株S基因变异可能在SARS出现和流行中发挥极其重要的作用.