雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪性能评价方法研究

目的对雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪的性能进行了评价。方法参考《YY/T1155-2009全自动发光免疫分析仪》医药行业标准和国家质量监督检验检疫总局颁布的有关医疗器械检定校准计量技术规范,阐述了准确度、重复性、线性范围、交叉污染等指标的评价方法和选取理由。结果准确度:197pmol/L胰岛素标准品测定结果误差为6pmol/L,20pmol/L胰岛素标准品测定结果误差为2pmol/L;重复性:对20pmol/L的胰岛素标准品重复测定6次,6次测定的相对标准偏差为2%;稳定性:开机4h后和8h后的相对偏差分别为3%和4%;线性范围:20～197pmol/L的胰岛素范围内,其线性相关系数可达到0.997;交叉污染:从低到高交叉污染率为1%,从高到低交叉污染率为0.2%。结论提出的方法可用于日常全自动免疫分析仪性能的评价和校准,有助于检测结果的准确和可比。     

应用尿液蛋白质组技术筛选多发性骨髓瘤相关蛋白的初步研究

目的应用蛋白质组学相关技术筛选多发性骨髓瘤（MM）患者尿液中差异表达的蛋白质,寻找与MM诊断相关的疾病标志物。方法收集MM组、疾病对照组（肾脏疾病）、健康对照组尿液各8例,TCA沉淀法提取尿液蛋白质后建立双向凝胶电泳图谱;Image Master软件筛选差异蛋白质;利用MALDI-TOF-MS获得肽质量指纹图谱,通过Mas-cot软件进行数据库搜索,得到蛋白质鉴定结果。结果筛选出57个差异蛋白点,43个在MM组上调,14个下调。对其中30个差异蛋白点进行分析,鉴定出甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19（Map19）、人组织相容性抗原A2（Hla-A2）、视黄醇结合蛋白（RBP）、转甲状腺素蛋白（TTR）、免疫球蛋白轻链、α2-糖蛋白1（ZAG1）等9类差异表达的蛋白质。结论应用尿液蛋白质组技术成功筛选鉴定出MM尿液中存在的差异蛋白质,可能是MM疾病诊断相关标志物,尚需要进一步验证。     

用2-DE和MALDI-TOF-MS筛选多发性骨髓瘤患者骨髓上清液中标志物

目的 运用2-DE和MALDI-TOF-MS研究MM患者骨髓上清液中差异表达蛋白,以寻找对MM发病机制研究和诊断或鉴别诊断的特异性蛋白质标志物.方法 收集14例MM患者、5例其他血液系统恶性肿瘤患者及5名健康对照者骨髓上清液标本.除去标本中白蛋白和免疫球蛋白G(IgG)后,用2-DE分离3组骨髓上清液标本.用ImageMaster 2D platinum 5.0图像分析软件分析比较3组2-DE凝胶图像,以差异倍数在3倍以上的蛋白点作为候选差异表达蛋白.然后,用MALDI-TOF-MS对重复性较好的候选差异表达蛋白做PMF和二级质谱鉴定.将得到的肽片段质量进行NCBInr 数据库检索,以鉴定出相应的差异表达蛋白.结果 用图像分析软件对3组骨髓上清液2-DE凝胶进行分析比较,从MM组与健康对照组中筛选出47个差异蛋白点,从MM组与疾病对照组中筛选出58个差异蛋白点.从MM组选取41个差异点进行质谱分析并鉴定,发现MM组与其他2组相比,5种高表达蛋白为免疫球蛋白J链、κ轻链、λ轻链、前病毒遗传的Gag多聚蛋白和与半抗原结合的含成熟氧(末)端的催化抗体;3种低表达蛋白为血红蛋白、结合珠蛋白(Hp2)、锌-α2-糖蛋白.这些差异蛋白部分与MM的临床表现相关,部分与MM的发生发展及临床治疗相关.结论 应用2-DE和MALDI-TOF-MS技术从MM患者骨髓上清液标本中筛出与MM疾病相关的8种差异表达蛋白,为进一步研究MM发生发展机制,完善MM诊断、鉴别诊断指标提供了参考依据.     

某高校健康体检人群肝肾常规生化指标参考区间的适用性验证

目的 分析血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰基转移酶(GGT)、尿素(Urea)、肌酐(Crea)新的参考区间在本地区健康成人中的适用情况,并探讨这5项指标的年龄特征。方法 按照行业标准要求,筛选在本院体检的20～79岁健康成人6 593名,采用罗氏ROCHE Cobas 6000全自动生化仪进行检测,分析ALT、GGT、ALP、Crea、Urea的性别、年龄特征,统计超出参考区间的情况。结果 5项指标均有小于10%的参考个体落在新参考区间之外。所有指标男女差异有统计学意义(P＜0.05)。ALT和GGT随年龄增长呈上升趋势,达到高峰后下降。男性ALP在不同年龄组变化不大,女性ALP在中老年组明显高于中青年组。Crea和Urea随年龄增长呈上升趋势。结论 WS/T404《临床常用生化检验项目参考区间》中规定的5个生化常规项目参考区间适用于本实验室。     

北京地区中老年人同型半胱氨酸参考区间的建立及与尿酸相关性分析

目的:建立北京地区中老年人群同型半胱氨酸(HCY)的参考区间,并分析其与尿酸(UA)的相关性。方法:筛选在本院体检的2752例50岁以上表观健康中老年人,采用罗氏Cobas c702全自动生化分析仪检测其血清HCY和UA水平,分析不同性别年龄组的HCY水平差异及HCY与UA的相关性,建立适用于本地区中老年人群的HCY参考区间。结果:本研究中2752例表观健康中老年人血清HCY数据呈偏态分布,浓度为11.41(4.62)μmol/L。中老年男性血清HCY水平明显高于女性(Z=20.51,P<0.05)。血清HCY水平随年龄呈上升趋势：50～59岁组最低：男性11.75(4.00)μmol/L,女性9.36(4.05)μmol/L;80岁以上组最高：男性13.41(6.06)μmol/L,女性10.42(3.98)μmol/L,不同年龄组差异有显著性(P<0.05)。血清UA和HCY呈正相关(r=0.312,P<0.05)。血清HCY 95%参考区间按年龄组50～59岁、60～79岁、≥80岁,男性分别为7.63～24.82μmol/L、7.62～25.71μmol/L、...     

质谱技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异蛋白

目的应用双向电泳(2-DE)和质谱技术分析多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的差异表达蛋白,寻找MM特异性蛋白标记物。方法收集MM患者5例、其他血液系统恶性肿瘤患者及正常对照者血清各10例,三组样本等体积混合,去除高丰度白蛋白和IgG,应用2-DE分离3组血清样本,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过凝胶软件分析MM与疾病对照组及正常对照组血清2-DE图谱,共得到51个三倍以上差异蛋白点,对上述差异蛋白进行MALDI-TOF-MS质谱分析,共鉴定出22种阳性蛋白,其中13种蛋白表达上调,包括高表达蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RIO1亚型2、Rab相关蛋白Rab37亚型2、HP蛋白、锌指结构α2糖蛋白等;9种蛋白表达下调,包括α2-HS-糖蛋白、转铁蛋白、多聚素-1等。结论 MM组与疾病对照组和正常对照组间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有助于MM早期诊断和鉴别诊断,并为MM发病机制的进一步研究提供线索。