MDCK细胞基质与鸡胚基质单价流感疫苗在小鼠中诱导的免疫反应的比较研究

目的:比较鸡胚基质和细胞基质的H1N1单价流感疫苗在小鼠体内诱导的免疫反应的差异.方法:分别采用鸡胚基质和MDCK细胞基质H1N1流感疫苗注射C57BL/6小鼠,通过体外中和实验,胞内细胞因子染色及多细胞因子检测比较2种基质生产的单价流感疫苗诱导的体液及细胞免疫反应的差异.结果:体液免疫方面,细胞基质疫苗组血清滴度与鸡...     

甲型流感病毒血凝素头部蛋白结构域的原核表达及血清学分析

目的在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中, 通过IPTG诱导, 在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白, 验证表达的准确性, Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白, 多剂次免疫家兔, 获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时, 重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 评价其免疫原性。结果 rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体, 可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体, 可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原, 在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体, 可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。     

四价流感病毒灭活疫苗在18~64岁人群免疫原性和安全性的系统综述和Meta分析

目的 用Meta分析的方法评价四价流感病毒灭活疫苗在18~64岁人群的免疫原性（抗体保护率和抗体阳转率）。方法 检索Medline、Cochrane Library、Science Direct数据库,将近10年内发表的比较18~64岁人群接种四价流感病毒灭活疫苗和三价流感病毒灭活疫苗免疫原性的临床随机对照试验纳入分析。采用Revman 5.3软件对纳入文献数据进行Meta分析。结果 共纳入8篇文献,针对甲型流感株（A/H1N1、A/H3N2）的抗体保护率和抗体阳转率,两种疫苗的反应差异无统计学意义;针对不含乙型流感株B/Victoria的三价流感病毒灭活疫苗,四价流感病毒灭活疫苗抗体保护率的合并RR值为1.28（95% CI：1.08~1.51,P<0.05）,抗体阳转率的合并RR值为1.94（95% CI：1.50~2.50,P<0.05）;针对不含乙型流感株B/Yamagata的三价流感病毒灭活疫苗,四价流感病毒疫苗抗体保护率的合并RR值为1.10（95% CI：1.02~1.18,P<0.05）,抗体阳转率的合并RR值为1.99（95% CI：1.34~2.97,P<0.05）,差异有统计学意义。结论 18~64岁人群中,四价流感病毒灭活疫苗与三价流感病毒灭活疫苗对于相同的疫苗株产生的免疫原性无差异,对于三价流感病毒灭活疫苗中不含的乙型疫苗株能产生良好的免疫效果。     

不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液, 并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液, 透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量, 计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性, 并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果 Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05), 但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,...     

重组流感血凝素三聚体蛋白疫苗的制备及免疫原性评价

目的制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析, 研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株, 通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组, 并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价, 以评价免疫原性。结果构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环, 蛋白质粒径大小约为18.79 nm, 具有10个N-糖基化位点, 包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型;HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后, 3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义(P=0.431 2, U=36), 配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组, 其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高, 为1 280。结论成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白, 其...