Changes in human umbilical vein endothelial cells induced by endothelial nitric oxide synthase traffic inducer

This study investigated the changes in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by overexpression of endothelial nitric oxide synthase traffic inducer (NOSTRIN) and its role in cellular injury. Recombinant NOSTRIN-expressing and empty vectors were transfected into cultured HUVECs, and factor Ⅷ-related antigen was examined by using immunohistochemical analysis. Growth curves were generated for both transfected and untransfected cells and these indicated that the proliferative ability of cells overexpressing NOSTRIN was significantly decreased. The expression of NOSTRIN and eNOS proteins was detected by using Western blot analysis, endothelial NOS (eNOS) activity was assayed by using spectrophotometry, and NO 2 /NO 3 levels were measured using nitrate reductase. Immunohistochemical analysis demonstrated that all groups expressed NOSTRIN in the plasma membrane and cytoplasm, and Western blot analysis confirmed that NOSTRIN levels were significantly higher in cells transfected with the NOSTRIN plasmid (P<0.01). The activity of eNOS and the levels of NO 2 /NO 3 were significantly decreased in NOSTRIN overexpressing cells as compared with empty vector and untransfected cells (P<0.01 and P<0.01, respectively). Morphological and ultrastructural changes were observed under light and electron microscopy, and it was found that NOSTRIN-overexpressing cells were elongated with deformities of the karyotheca, injury to the plasma membrane, increased lipids in the cytoplasm, and shortened microvilli. This study showed that overexpression of NOSTRIN had a significant effect on eNOS activity in HUVECs and resulted in significant cellular damage.     

CR16在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:研究糖皮质激素区域表达基因16(corticosteroids and regional expression 16,CR16)在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达,探讨CR16在精子发生中的作用。方法:采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRNA在48例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常生育男性(正常组)睾丸组织中的表达情况。结果:CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞与生精细胞连接区,在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达显著弱于正常生育男性睾丸组织中的表达。CR16 mRNA在病例组睾丸组织中的表达水平显著低于正常组。结论:特发性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低,这可能与无精子症相关。     

基于HPLC指纹图谱与近红外光谱模型评价祖师麻膏药质量

目的：采用高效液相色谱（HPLC）指纹图谱结合近红外光谱模型评价祖师麻膏药质量。方法：采用HPLC法测定了祖师麻甲素含量,建立了25批祖师麻膏药HPLC指纹图谱;用近红外光谱仪采集25批祖师麻膏药近红外光谱图,应用分析软件OPUS5.5建立相关系数模型和一致性评价模型。结果：祖师麻甲素含量均符合药品质量标准,平均值为122μg/g;祖师麻膏药HPLC指纹图谱和近红外图谱的平均相似度分别为98.52%和99.90%,25批祖师麻膏药全部通过一致性评价模型验证,两种方法均证明了祖师麻膏药质量稳定、可控。结论：近红外光谱模型具有快速、无损伤、无污染的优点,可用于评价祖师麻膏药的质量。     

线粒体融合基因2在小鼠卵巢组织中的表达及意义

目的:检测小鼠卵巢组织中线粒体融合基因2(Mfn2)的表达、ATP水平以及卵巢组织的超微结构,探讨Mfn2与卵巢功能的相关性。方法:采用Western blot和real-time PCR分别检测年轻组(8～10周龄,20例)和老龄组小鼠(52～54周龄,20例)卵巢组织中Mfn2蛋白和Mfn2 mRNA的表达;磷钼酸比色法检测小鼠卵巢组织中ATP含量;透射电镜观察卵巢组织的超微结构。结果:老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2蛋白的表达水平(0.234±0.120)显著低于年轻组(0.876±0.460),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中Mfn2 mRNA相对表达量为(0.0063±0.0034)显著低于年轻组(0.0232±0.0045),差异有统计学意义(P<0.01)。老龄组小鼠卵巢组织中ATP含量[(20.6±7.2)μmol/g]显著低于年轻组[(33.8±11.5)μmol/g]。电镜显示,年轻组小鼠卵巢组织中的线粒体形态规则,轮廓光滑完整,线粒体嵴排列基本规则,老龄组小鼠卵巢组织中线粒体断裂增加,线粒体嵴肿胀,线粒体内出现空泡。结论:老龄组小鼠Mfn2表达水平下降,线粒体出现功能下降和结构损伤。Mfn2表达水平下降可能参与与年龄相关的卵巢功能维持。     

PDTC可改变TNF-α诱导的eNOS基因表达下调

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中内皮型一氧化氮合酶基因（eNOS）表达的作用以及PDTC对此作用的改变。方法将培养的内皮细胞分为3组：1组为无任何处理的HUVEC,2组为子痫前期（PE）患者血清作用的HUVEC,3组为用正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应检测三组细胞中eNOS mRNA的表达。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1ng/ml、3ng/ml、5ng/ml 3种浓度的TNF-α分别作用三组细胞6h,以及用浓度为3ng/ml的TNF-α作用三组细胞分别长达6h、12h、24h,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测eNOS mRNA的表达;将二硫代氨基甲酸吡硌烷（PDTC,5mmol/ml）与TNF-α（3ng/ml）同时作用以及TNF-α（3ng/ml）单独作用三组细胞6h,RT-PCR检测eNOS基因mRNA的表达。结果三组细胞中都有eNOS表达,2组表达量显著低于1组和3组（P〈0.01）。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女（P〈0.01）。TNF-α作用HUVEC细胞后eNOS表达显著低表达,并成时间和剂量依赖关系（P〈0.01）。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC和TNF-α单独作用的HUVEC相比,其eNOS表达显著增高（P〈0.01）。结论可下调eNOS在HUVEC中的表达,PDTC可改变TNF-α诱导的eNOSN表达的下调。     

虾青素对体外受精-胚胎移植失败患者卵巢反应性的临床观察

目的探讨虾青素对卵巢储备功能降低(diminished ovarian reserve,DOR)患者行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF)治疗结局的影响。方法对接受体外受精/卵胞浆内单精子注射(i VF/intracytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕治疗的30例DOR患者辅助治疗前后周期进行自身对照研究,分析卵巢储备功能指标(基础激素水平、窦卵泡计数等)及周期治疗参数(卵泡数、获卵数、受精率、胚胎种植率、临床妊娠率、周期取消率、流产率等)的变化。结果前后周期超促排卵方案差异无显著性,虾青素辅助治疗后基础窦卵泡计数、卵泡数、获卵数显著增加(P<0.05),胚胎种植率、临床妊娠率显著提高(P<0.05),周期取消率呈降低趋势(P>0.05),而受精率、流产率无差异(P>0.05)。结论虾青素辅助治疗可以改善DOR患者卵巢储备功能,提高卵巢反应性,改善IVF治疗结局。     

线粒体融合素基因2在胚胎发育过程中的研究进展

<正>线粒体是非常重要的真核细胞细胞器,在细胞呼吸,底物氧化,ATP产生及细胞凋亡等功能方面起着关键作用。线粒体通过不断地裂解与融合形成动态的网状结构〔1〕。线粒体融合素基因2(Mfn2)又称作细胞增殖抑制基因(hyperplasiasuppressor gene,HSG),其作为线粒体融合基因家族成员,在线粒体融合方面的作用已得到广泛认同,除了参与心血管疾     

血清维生素D水平对卵巢功能减退患者体外受精-胚胎移植助孕结局的影响

目的分析卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者的血清维生素D水平与其体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)助孕结局的关系,探讨维生素D对DOR人群卵泡生长、胚胎发育及妊娠结局的影响。方法回顾性分析2014年1月1日至2017年12月31日于海军军医大学附属长征医院生殖医学中心行IVF-ET助孕的DOR患者,共纳入204对夫妇,新鲜周期486个,复苏周期270个。根据血清25(OH)D水平分为3组:<20μg/L为缺乏组;20~30μg/L为不足组;≥30μg/L为充足组。观察指标:促性腺激素(gonadotropins,Gn)使用剂量、Gn天数、获卵数、D3可移植胚胎率、D3优质胚胎率、临床妊娠率、流产率及累积妊娠率。统计学方法采用非参数KruskalWallis秩和检验、Bonferroni校正法和χ^2检验。结果维生素D缺乏组、不足组、充足组的Gn剂量分别为(1353±811)、(1191±784)、(1131±661)IU,Gn天数分别为(8.7±3.1)、(8.0±3.2)、(7.8±2.4)d,缺乏组的Gn剂量和Gn天数均高于不足组和充足组(P<0.05),而不足组与充足组的Gn剂量和Gn天数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者的获卵数[(3.9±4.1)、(3.4±3.0)、(3.1±2.4)个]、D3可移植胚胎率[82.8%(313/378)、82.4%(416/505)、82.9%(223/269)]、D3优质胚胎率[60.0%(204/340)、53.4%(242/453)、52.7%(127/241)]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。维生素D充足组无新鲜周期移植的患者;缺乏组与不足组新鲜周期的临床妊娠率[71.4%(5/7)与66.7%(4/6)]和流产率[0.0%(0/5)与0.0%(0/4)]比较、3组复苏周期的临床妊娠率[44.3%(35/79)、42.7%(50/117)、35.7%(25/70)]和流产率[25.7%(9/35)、20.0%(10/50)、16.0%(4/25)]比较,差异均无统计学意义(P>0.05);3组的累积妊娠率分别为73.6%(39/53)、65.4%(53/81)、60.5%(23/38),差异也无统计学意义(χ^2=1.844,P=0.398)。结论维生素D缺乏的DOR患者在IVF-ET助孕中需要更多剂量的Gn和更长的Gn时间来促进卵泡发育,但不影响胚胎发育和妊娠结局。     

基于HPLC指纹图谱与多成分定量结合化学模式识别法评价不同产地白芍的质量

目的:基于HPLC指纹图谱与多成分含量测定,并结合化学模式识别法,评价引种白芍与主产区白芍质量,为其进一步开发利用提供依据.方法:采用HPLC法,Shim-pack GIST-HP C18色谱柱(250 mmx4.6mm,5.0μm),乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为lmL/min,柱温为3...