结核分枝杆菌北京/W基因家族研究进展

结核分枝杆菌是一个全球性的病原菌,全球约有1/3的人受到感染,同时每年造成将近300万例死亡.目前世界结核病流行主要是由几种特殊的结核分枝杆菌家族引起的,如北京/W基因家族、LAM家族、Haarlem家族、X族群以及其他未定名的菌株群.北京/w基因家族是结核分枝杆菌复合群中一个重要的分支,北京/W基因家族可引起医院、社区结核病的暴发,同时也与耐药及结核病的治疗失败和复燃有关,具有很强的致病力[1,2].因此近年来引起人们极大的关注.     

结核分枝杆菌北京基因型菌株与重庆地区结核患儿耐药表型的相关分析

目的 研究结核分枝杆菌北京基因型菌株与结核患儿耐药表型及其相关因素.方法 采用定向缺失多重酶链聚合反应技术(deletion-targeted multiplex PCR,DTM-PCR)对从143例患儿分离得到的结核分枝杆菌进行北京基因型菌株鉴定,并使用绝对浓度法进行药敏实验.收集患者的性别、年龄、居住地、卡介苗接种史和结核性脑膜炎病史等相关因素资料.采用χ2检验和Fisher确切概率法分析北京基因型与相关因素以及耐药表型之间的关系.结果 在143株结核分枝杆菌中,91株为北京基因型,占63.6%,北京基因型菌株与年龄、性别、居住地、卡介苗接种和结核性脑膜炎无关(P>0.05).北京基因型菌株在耐链霉素菌株(16.5%,15/91)和耐异烟肼菌株(15.4%,14/91)中的比例显著高于非北京基因型(3.8%,2/52;3.8%,2/52)(P<0.05).结论 北京基因型菌株是重庆地区儿童结核患者中流行的优势菌群,患儿的年龄、性别、居住地、是否接种卡介苗和是否为结核性脑膜炎与北京基因型菌株无关,感染北京基因型菌株的结核患儿更易出现链霉素和异烟肼耐药.     

儿童耐药结核病的诊断与治疗

耐药结核病尤其是儿童耐药结核发病率近年来呈上升趋势,使耐药结核病成为现今结核病防治的一个重点。耐药结核病发病机制为菌株耐药相关基因、药物外排泵系统、菌株遗传背景等多种因素共同作用导致;由于儿童耐药结核病诊断困难及用药局限,导致儿童耐药结核病诊治较困难。     

MIRU-VNTR和Spoligotyping用于重庆地区210株儿童结核分枝杆菌临床分离株的基因分型

目的 评价间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和基于结核分枝杆菌散在分布数目可变串联重复序列分析(MIRU-VNTR)方法在重庆地区儿童结核病分子流行病学中的应用.方法 收集重庆地区210株儿童结核分枝杆菌(MTB)临床分离株,应用上述两种分型方法进行比较分析.结果 采用Spoligotyping分型方法,210株菌可分为2个基因群44种基因型,其中最大的1个基因群即北京家族(北京基因型)含有130株菌(61.90%).采用MIRU-VNTR分析发现24个位点的多态性差异较大,不同MIRU位点组合(12、15和24位点)的分辨率指数依次升高,后两个组合的差异是由位点ETR-B引起.各位点和各位点组合在北京家族菌株中的分辨率指数均高于非北京家族菌株.结论 重庆地区儿童MTB具有明显的基因多态性,其主要流行型为北京家族.在结核病原学监测中,可先采用Spoligotyping,再对成簇菌株进行15位点与ETR-B组合二次分型的联合分型策略,可提高分子流行病学调查效果.

Abstract：

Objective To evaluate the application of spacer oligonucleotide typing (Spoligotyping) and mycobaeterial interspersed repetitive unit-variable-number tandem repeat (MIRU-VNTR) analysis in the molecular-epidemiological study of tuberculosis and to discuss the characteristics of pediatric Mycobacterium (M.) tuberculosis strains in Chongqing. Methods M. tuberculosis strains isolated and typed by Spoligotyping and MIRU-VNTR respectively, from the children patients in Chongqing and to compare the results from both methods, epidemiologically. Results By means of Spoligotyping, 210 clinical isolates were divided into 2 gene groups, displaying 44 genotypes. Among them, the biggest group was M. tuberculosis Beijing family, including 130 strains (61.90%) ,using the Spoligotyping. From the results of MIRU-VNTR, 24 loci showed different polymorphism and the HGI of different loci set (12 old loci, 15 basic loci and 24-loci set) increased accordingly. The subtle difference in HGI was originated from one locus ETR-B, which was included in the 24-locus system. The diversity of each loci and MIRU-VNTR set for non-Beijing genotype strains was higher than that of the Beijing genotype strains. Conclusion In this study, it was preliminarily confirmed the existence of high polymorphism of M. tuberculosis while the Beijing Family was the main genotype and main prevalent strain in children of Chongqing area. Spoligotyping prior to 15-locus with ETR-B combination seemed more suitable for the massive epidemiological investigation of pediatric tuberculosis patients.     

应用抑制消减杂交技术构建耐多药结核杆菌差异表达基因消减cDNA文库

目的：构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库,进一步探索结核杆菌耐多药的分子机制。方法：以耐多药菌株cDNA为实验组（Tester）,敏感株cDNA为驱动组（Driver）应用抑制消减杂交（Suppression subtractive hybridiza－tion,SSH）技术结合T/A克隆技术构建结核杆菌耐多药株与敏感株的差异表达消减cDNA文库。结果：成功构建了耐多药结核菌株差异表达消减cDNA文库,获得113个差异表达cDNA片段。结论：研究表明SSH技术是筛选新功能基因的有效方法;多种已知或未知基因均参与了结核杆菌耐多药的调节,大规模筛选与克隆这些基因为进一步研究结核杆菌耐多药机制的产生奠定了必要的理论基础。     

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目的 探讨儿童结核性脑膜炎临床特征与卡介苗(BCG)接种之间的关系.方法 将重庆医科大学附属儿童医院2004-2007年122例儿童结核性脑膜炎按是否接种BCG分为BCG组(54例)和未接种BCG组(68例),对临床资料进行回顾性分析.结果 0～5岁为发病高峰(67.2%);以农村患儿为主(72.1%);临床分期以中晚期为主,其中未接种BCG组的晚期发病例数明显高于BCG组,差异有统计学意义(P<0.05);BCG组临床预后明显好于未接种BCG组,差异有统计学意义(P<0.05);两组在临床特征及是否发生脑积水方面差异无统计学意义(P>0.05).结论 BCG组晚期结核性脑膜炎的发生率较未接种BCG组低,并且其预后好于未接种BCG组.     

感染性腹泻的发病机制

感染性腹泻是指细菌、病毒、真菌及寄生虫感染而导致的腹泻,为儿科常见疾病之一。其发病机制按病理生理学将其分为渗透性腹泻、渗出性腹泻和分泌性腹泻,按感染病原的不同分为细菌性腹泻、病毒性腹泻、寄生虫性腹泻、真菌性腹泻及特殊病原感染引起的腹泻。了解感染性腹泻的发病机制对腹泻病的治疗有极其重要的意义。     

皮肤粘膜淋巴结综合征66例临床分析

皮肤粘膜淋巴结综合征（MCLS）好发于婴幼儿，约75％在4岁以下发病，是一种原因不明的急性发热性疾病，其基本病理改变是以冠状动脉为主的全身血管炎为特征的儿童多系统疾病。1临床资料1．1一般资料：66例中男43例，女23例，发病年龄最小3个月，最大12岁，其中4岁以内发病的占78．3％，四季均有发病，各占比例为春35．3％，夏19．3％，秋20．5％，冬24．7％．以春冬季较多见（60．0％）。本组病例诊断符合1984年日本MCLS研究组制订的六条诊断标准［1］1．2症状及体征：全部病例均有中高度发热以稽留热或不规则热多见（96．3％），眼结合…     

重庆地区儿童诺如病毒基因型别特点研究

目的:了解重庆地区儿童诺如病毒(Norovirus,NV)基因型别特点.方法:收集2008年8月至2009年7月全年轮状病毒抗原阴性的急性非细菌性腹泻标本,用real-timeRT-PCR方法扩增NVORF1-ORF2结合区,测序扩增片段后进行比对并分型及构建系统进化树.结果:全年获得806份标本,共检测出251份为NV阳性标本,其中G Ⅰ组4例,GⅡ组247例.NV以7～10月份为高发月份,以6～12月龄婴儿最多见.已分型的NV GⅡ基因组(108例)以GⅡ.4/2006b占绝对优势,其构成比达62.96%(68/108),其余次为GⅡ.3占25.93%(28/108);GⅡ.6占6.48%(7/108);GⅡ.2占1.85%(2/108);此外还分别检测出GⅡ.7、GⅡ.12、GⅡ.13各有1例(1/108).结论:重庆地区NV夏季发病率较高,流行毒株以GⅡ.2006b为主.     

重庆汉族儿童单核细胞趋化蛋白1基因多态性及表达水平与结核病易感性的关系

目的 分析趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)启动子区2518基因型频率和等位基因在重庆地区汉族儿童结核病中的分布特点,探讨MCP-1基因启动子区2518A/G多态性、血清MCP-1蛋白表达水平与结核病的相关关系.方法 研究对象为100例儿童结核病、100例成人结核病以及相应的200例健康对照.序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术检测MCP-1基因启动子区2518A/G多态性.ELISA方法测定相应不同基因型患者和对照血清MCP-1水平.结果 (1)总体结核病组2518位点G等位基因频率为58%,明显高于相应的健康对照组(36%)(P<0.01);(2)总体结核病组2518 GG基因型频率为65%,明显高于相应的健康对照组(27%)(P<0.01);(3)MCP-1基因启动子区2518位点GG基因型结核病患病危险性(OR=6,95%CI=3.3～11.0)高于AA基因型(OR=1.0,95%CI=0.243～1.554),且儿童GG基因型患病的危险性(OR=7,95%CI=3.0～16.6)高于成人GG基因型(OR=5.1,95%CI=2.2～12.0);(4)2518 GG基因型的MCP-1水平(124 μl/L)高于AA基因型(23.10 μg/L)和AG基因型(39.96 μg/L),三组比较差异有统计学意义(P<0.01).结核组高于正常组,儿童组高于成人组.结论 在中国重庆地区汉族人中,MCP-1-2518位GG基因型作为结核病可能的危险因素,在儿童结核病的发病中具有较成人更重要的意义.