2007年驻广州部队部分餐饮单位熟肉制品污染状况调查

熟肉制品被细菌污染是造成食物中毒的一个重要原因。为了解部队餐饮单位夏季熟肉制品卫生质量,保证官兵和消费者的食品安全,预防食物中毒的发生,我们于2007年6~7月对广州市城区部分部队餐饮单位供应销售的熟肉制品进行卫生质量抽检。1对象与方法1·1对象2007年6~7月,对广州军区     

tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究

[目的]构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型.[方法]通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7-rtTA-tTS-Neo及pliv7-rtTA-Neo转染人HepG2细胞,经G418筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,克隆扩增后瞬时转染pTRE-Luc质粒,强力霉素（1 mg/L）诱导表达后检测荧光素酶活性,挑选出低背景和高诱导表达的HepG2细胞克隆.[结果]带有tTS的细胞株其诱导倍数明显高于不带有tTS的细胞株（192：21）,其中克隆9的诱导倍数最高（256）,获得1株高表达、低背景的HepG2/pLiv7-rtTA-tTS-Neo细胞株.[结论]荧光素酶活性检测结果验证了tTS对四环素调控系统的内在泄露问题有一定的抑制作用,使四环素调控系统的开关具有真正意义上的严密性.     

HACCP在某部跨区演习食品安全保障中的应用研究

目的：做好某部跨区演习的食品安全保障。方法：应用危害分析与关键控制点（HACCP）工作原理,对食品采购、加工、摆台等进行全程危害分析,确定了7个关键控制点：原料采购验收、烹调加工、厨房卫生、冷菜制作、餐具容器消毒、分餐摆台、人员健康卫生;并制定了详细的HACCP计划和针对性的纠偏措施。结果：有效保障了某部官兵演习活动的食品安全。结论：运用HACCP管理方法,是加强部队重大活动供餐食品安全保障的有效方法。     

热区某特种部队中暑现状及个体易感因素调查研究

目的 了解热区某特种部队中暑现状,找出影响中暑的个体易感因素.方法 随机选择热区某特种部队376名战士,通过调查问卷得到人员年龄、军龄、身高、体质量、入伍前每天锻炼时间等基本情况以及中暑情况,将发生过中暑的人员设为中暑组,未发生过中暑人员设为未中暑组,测试2组人员的台阶指数、400 m跑成绩、400 m渡海登岛障碍成绩、5 km越野成绩和体质量指数(body massindex,BMI)等体能体质指标,同时测量其5 km越野前后的鼓膜温度、平均皮肤温度、心率、血氧饱和度和血压,分析比较2组人员在可能影响中暑的个体因素方面的差异.结果 根据中暑诊断标准,调查对象近1年发生过中暑的共79人,中暑发病率为21.01％.中暑组与未中暑组在年龄、军龄、对训练量的接受程度、对于训练是否有压力、睡眠质量、台阶指数、5 km越野成绩、BMI、5 km越野前后的平均皮肤温度和脉压差变化量等方面的差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 热区某特种部队中暑发病率较高,年龄和军龄较小、对训练量的接受程度较差、认为训练有压力、睡眠质量较差、台阶指数较小、5 km越野成绩较差和BMI较大的战士更容易发生中暑,这些指标可能是部队官兵中暑的个体易感因素.     

重组慢病毒载体介导不同启动子驱动的绿色荧光蛋白在多种(不同)细胞中的表达影响

目的比较不同启动子的慢病毒转导细胞后,在不同细胞系中驱动绿色荧光蛋白表达的效率高低。方法采用3种不同启动子的转移质粒,与包装质粒共转染293T细胞,转染60 h后,收集慢病毒上清。用等量的三种慢病毒液转导5种细胞系(293A、MOLT-4、PC3、DU145及RM1),72 h后,荧光显微镜下观察转导效果;流式细胞仪计数转导效率。结果不同启动子(Ubiquitin,EF1α,CMV)在5种细胞系中驱动绿色荧光蛋白的表达及转导效率不同。在293A和PC3细胞中,CMV为最强启动子,转导率分别为(94.83±2.87)%和(20.90±3.15)%;但在MOLT-4和DU145细胞中,EF1α为最强启动子,转导率分别为(74.27±2.14)%和(25.13±4.95)%;在RM1细胞中,Ubiquitin为最强启动子,转导率为(16.77±0.38)%。结论在慢病毒载体介导基因表达研究中,要考虑选取合理的细胞和启动子以获得高效的转导效率。     

高效包装重组慢病毒及其定量方法的建立

目的高效包装不同启动子的重组慢病毒(LV),建立LV的定量方法。方法采用分子克隆方法获得p FUGW、p TY-EF1α-EGFP及p TY-CMV-EGFP 3种转移质粒,然后采用脂质体法与另两种包装质粒p SPAX2及p MD2.G共同转染293T细胞,制备含有不同启动子的LV。设计针对3’-LTR的探针和引物,建立LV的荧光定量PCR定量方法。结果获得了不同启动子的转移质粒,制备了3种不同启动子的LV,应用荧光定量PCR方法测定制备的病毒,载量能达到109copies/ml。结论成功构建了不同启动子的转移质粒,获得了三种LV,建立了针对LV的荧光定量PCR方法,为后续研究不同启动子在多种细胞系中驱动目的蛋白的表达奠定了基础。     

严密型四环素调控系统转基因首建鼠的建立

目的 制备ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠1,为严密型四环素调控系统的体内研究提供调控部分的转基因小鼠,以便与反应部分小鼠交配得到双转基因小鼠.方法 重组构建含目的 基因的质粒pApoE-rtTA-tTS,应用显微注射法将其注入母鼠的受精卵,再植入代母输卵管,出生小鼠经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA标本进一步鉴定.结果 产生了2只整合ApoE-rtTA-tTS基因的首建鼠.结论 成功制备了ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠,为下一步建立严密型四环素调控系统的双转基因小鼠模型奠定了基础.     

严密型四环素调控系统转基因首建鼠的建立

目的制备ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠1，为严密型四环素调控系统的体内研究提供调控部分的转基因小鼠，以便与反应部分小鼠交配得到双转基因小鼠。方法重组构建含目的基因的质粒pApoE-rtTA-tTS，应用显微注射法将其注入母鼠的受精卵，再植入代母输卵管，出生小鼠经PCR初步筛选出阳性，再经Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA标本进一步鉴定。结果产生了2只整合ApoE-rtTA-tTS基因的首建鼠。结论成功制备了ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠，为下一步建立严密型四环素调控系统的双转基因小鼠模型奠定了基础。     

tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究

 [目的]构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型.[方法]通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7-rtTA-tTS-Neo及pliv7-rtTA-Neo转染人HepG2细胞,经G418筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,克隆扩增后瞬时转染pTRE-Luc质粒,强力霉素（1 mg/L）诱导表达后检测荧光素酶活性,挑选出低背景和高诱导表达的HepG2细胞克隆.[结果]带有tTS的细胞株其诱导倍数明显高于不带有tTS的细胞株（192：21）,其中克隆9的诱导倍数最高（256）,获得1株高表达、低背景的HepG2/pLiv7-rtTA-tTS-Neo细胞株.[结论]荧光素酶活性检测结果验证了tTS对四环素调控系统的内在泄露问题有一定的抑制作用,使四环素调控系统的开关具有真正意义上的严密性.     

严密型四环素调控系统调控的表达HCV-C基因双转基因小鼠模型的建立

目的 制备严密型四环素调控系统调控下表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)基因的双转基因小鼠,为进一步阐明核心蛋白Core与HCV感染所致的疾病以及与肝细胞癌发生的关系奠定基础.方法 严密型四环素调控部分(ApoE-rtTA-tTS)转基因阳性鼠和反应部分(TRE-HCV-C)转基因阳性鼠交配产生仔鼠,经PCR和Southcm blot分析筛选出阳性鼠.免疫组织化学检测HCV-C蛋白双转基因小鼠肝组织内表达情况及其肝脏的病理变化.结果 得到了2只携带有两种基因(tTS和HCV-C)的双转基因小鼠,成功制备了严密型四环素调控系统的HCV-C双转基因小鼠.结论 结果表明,所建立的严密型四环素调控系统在动物模型中是可行的和有效的,它消除了普通四环素调控系统存在的本底泄漏表达的缺点,是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具.