近交系小鼠H-2基因的PCR检测方法

目的建立快速、灵敏、简便的H-2基因检测方法。方法针对近交系小鼠的H-2D区和H-2K区序列,设计两对特异性引物,分别进行DNA扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定H-2基因型。结果通过PCR反应扩增小鼠H-2D区和H-2K区的基因产物,可以区分不同的近交系小鼠的H-2基因型,进而可以区分出不同品系的近交系小鼠。结论利用分子生物学方法进行近交系小鼠遗传学检测,弥补了过去各种方法的不足,并且PCR方法还具备快速、简便、成本低廉、便于普遍推广并易于和国际接轨等优点。所以通过PCR方法可以进行小鼠H-2基因型检测。     

实验动物中绿脓杆菌检测能力验证的结果与分析

目的：对全国实验动物质量检测实验室进行绿脓杆菌检测能力的验证。方法由 CNAS组织,中国食品药品检定研究院负责协调及实施,向全国参与本次能力验证的实验动物质量检测单位分发“实验动物粪便中绿脓杆菌检测”样品,并在规定的时限内反馈检测结果及报告。结果本次能力验证共有全国20个实验动物质检实验室参加,收到反馈结果和报告共19份。结果满意的实验室有16个,占80%;结果不满意的实验室有4个,占20%。结论国内实验动物质检单位整体具备可靠的绿脓杆菌检测能力,并进一步促进了参与实验室对实验动物病原菌检测能力的提高。     

日本动物实验替代法研究

自从1959年W．M．S．Russell和R．L．Burch提出动物实验的替代、减少和优化(3R)的理论以来，国外的3R研究发展迅速，取得了一批有意义的成果，达到了较高的水平。我国近些年来积极开展3R研究，从国家层面支持了一些研究项目，取得了一定进展，对动物实验替代研究、动物福利提出了发展思路和实施方案，以应对加入WTO后的技术壁垒。从世界上看，3R研究主要集中在欧美等发达国家，亚洲主要是日本等国在开展这方面的研究。为了借鉴国外的研究经验，特别是亚洲近邻的成功之处，     

裸鼠巴斯德氏菌病的诊断

目的对某实验动物中心裸鼠发病死亡的原因进行诊断。方法对发病裸鼠进行病理组织学和细菌学检查以及血清学试验。结果根据临床症状、病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和血清凝集试验，确诊为嗜肺巴斯德氏菌感染导致的细菌性疾病。药敏试验结果表明，分离菌株对阿莫西林／克拉维酸、阿奇霉素、复方新诺明敏感，而对红霉素已经产生耐药性。结论为巴斯德氏菌病原鉴定与疾病诊断提供了科学依据。     

肝螺杆菌鞭毛蛋白B基因的克隆和序列测定

目的 对肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B(flagellin B,fla B)基因进行扩增、克隆和序列测定,以探讨其功能.方法 根据已公布的肝螺杆菌ATCC 51449序列,设计合成一对引物,以肝螺杆菌BJ 0801株DNA为模板,扩增fla B基因片段,与pGEM-T载体连接并转化感受态E.coliDH5α,提取的重组质粒经双酶切、PCR、电泳鉴定并进行序列测定.结果 目的 基因片段长度为1 545 bp,与已公布的肝螺杆菌ATCC 51449核苷酸同源性达99%.结论 成功克隆出肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B基因序列,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.     

2003-2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

目的 对近年来我国实验猴BV(猴疱疹病毒Ⅰ型)抗体检测结果进行比较分析,以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律,为我国实验猴质量控制及标准化提供依据.方法 根据国标中ELISA方法,对2003～2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测,并对检测结果进行统计分析.结果 检测的4612份猴血清中,有1843份BV抗体呈阳性,阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%～50%.幼年(≤2岁)、青年(2.1～4.0岁)、成年(4.1～6.5岁)、老年(≥6.5岁)4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%.不同年龄感染率差异显著(P＜0.01).雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%),但两者差异不显著(P＞0.05).结论 不同年龄猴BV感染率不同,随着年龄的增长BV感染率升高.     

肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用

目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测.     

两个NIH小鼠种群对不同种类的乙肝疫苗免疫应答效应的比较

目的 比较两种不同的NIH 小鼠种群基因组DNA中H-2q单倍型的百分比,对重组基因乙型肝炎疫苗 (酿酒酵母)、重组基因乙型肝炎疫苗 (CHO)、重组基因乙型肝炎疫苗 (汉逊酵母) 和治疗性乙型肝炎疫苗 (乙克) 免疫应答的影响.方法检测乙肝疫苗免疫效力用酶标法,测定乙肝疫苗的ED50值,再通过微量细胞毒法和PCR方法检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分数,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性.结果经验证,经1号NIH小鼠检测结果证实,重组基因乙型肝炎免疫效力依次为CHO＞汉逊＞酿酒,疗性乙型肝炎疫苗 (乙克) 效力检测合格,但经2号NIH 小鼠检测结果显示除CHO疫苗合格外,其他三种疫苗检测结果均为不合格.基因检测结果为,1号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,而2号种群NIH 小鼠含有H-2q型基因基因百分比为30%,因此不同的q型基因百分比导致了不同的检测结果. 结论根据本研究结果表明虽然NIH鼠的H-2单倍型中有q型基因,但不同来源的小鼠种群之间会存在差异,经不同的环境饲养后,小鼠的基因会发生不同的变化,因此在进行生物制品检定时,要注意不同品系小鼠及同一品系小鼠不同种群之间的差异对试验本身的影响.建立一种"动物免疫"的概念.     

我国开展动物实验替代方法工作的前景研究(一)——我国动物实验替代方法研究的现状

“我国开展动物实验替代方法工作的前景研究”是由北京市科委资助支持的、我国第一个以科研立项的形式开展有关3R研究的科研课题。课题研究内容包括：细菌内毒素检查和家兔热原实验标准化研究；体外实验替代动物整体实验：《我国开展动物实验替代研究工作的思路、发展模式和重点支持研究领域》的研究报告；“动物实验替代方法”(暂定名)专业著作的编写。目前，课题已全部完成并通过了北京市科委组织的专家验收。本刊将在近几期内连续刊登《我国开展动物实验替代研究工作的思路、发展模式和重点支持研究领域》的研究报告中部分内容，将课题组通过研究所获得的结论以及提出的观点提供给大家，以供参考。并希望引起大家对这一问题的关注。